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1、近日，中华结核和呼吸杂志发布成人呼吸系统感染性疾病病原学诊断专 家意见，旨在规范标本的采集、储存、运输、检测过程，提高对感染性呼吸 道标本检测效率和准确率，同时对各种检验方法的结果判读进行归纳总结，为 临床治疗方案的选择提供帮助。呼吸系统感染性疾病是由细菌、病毒、支原体、真菌和寄生虫等多种微生物引 起的感染性疾病，是临床常见病和多发病，病情严重程度因致病原、感染部位、 被感染人群以及合并基础疾病的情况不同而表现各异。呼吸道病原学检测标本的采集方法呼吸道病原学标本的采集方法见表lo表1呼吸道病原学标本类型及采集方法标本类型采集方法痰液自主咬,诱驟拭子口咽拭子，鼻咽拭子保护性毛刷经支气管镜引导下采
2、集好A 丁4渚由皿 经人工气道，在负压吸引装置前连接无菌集痰器，操作前应听蠡錦严 5体位引流5,5根据病变咅典择潘先叶段，使用水国市段飆鼬行 灌注并回收，通过细胞计数进行灌洗液质量控制，回收率应在 30%lU细菌培养标本量应21 mL ,真菌培养N10 mL,分枝杆菌培养胸腔积液10 mLo如送检结核舞T细胞检测(T-SPOT )还需注意添 加肝素抗凝可选择电视辅助胸腔镜手术,气管-支气管内超声引导下肺组组织活检标本织或淋巴结活检,经气管镜M活检术，CT或B超引导下经皮 肺穿刺活检术。蠢管肺泡灌洗标本的运送、储存和预处理1. 标本的运送和储存原则首先标签应准确，信息完整，贴在容器上，而不是容器
3、盖上。不同病原体检测 标本的采集和转运原则见表2。表2不同病原体检测标本的采集,收集和转运原则不同类型标本采集量、保存和转运时间见表3。表3不同时间标本的采集量,保存和转运时间标本类型标本采ma收集装置.保存温度和转 运时间黒清学标10 ml血液或5 ml血清血清分离胶促凝采血管, 室温，2h内髒蒙抗體佥豔矗番翳（根密闭容器，室温内核酸扩増 10 ml血液或5 ml血浆含EDTA采血管，室温，2h内2 ml病毒转运培养基密闭容器，室温，2 h内2 .针对不同病原体的检测方法标本采集后应及时进行质量控制，合格的标本应尽可能短期内送检。某些特殊病原体标本的转运、保存和检测方法见表4。表4特殊病原体
4、标本的转运、保存条件及检测方法特殊病原体标条件和 时间标本保存条件检测方法细菌无蘭容器,至温t2h4 C , 24 h革兰染色，定量培养努卡菌革兰染色,弱抗酸染色，培养军团菌培养，核酸检测，抗原检测頁菌无菌容器，室温，2h4 C , 24 h氢氧化钾压片或荧光白染色，真菌培 养曲霉氢氧化钾压片或荧光白染色，真菌培 养，半乳甘露聚糖（GM ）阈佥啪子菌六肢银染色,核酸检测,抗原检测皺菌墨汁染色，真国培养，隐球园英膜多 糖抗原分枝杆菌无困容器，室温，2h4C , 24 h涂片抗酸染色，培养，瞄检测病毒病毒转运培养基， 室温，2h4C , 5d核酸检测，抗原检测，分离培养寄生虫无菌容器，室温，2h4
5、 C , 24 h直歯检，核酸倒，质检则病原特殊结 构Hiss英膜染色,Loeffler多色亚甲蓝鞭毛银盐染色法，复红染色法芽抱孔雀绿瞧法，石碳酸診染色法呼吸道病原体检测方法的优缺点不同检验方法的优缺点见表5。表5病原体不同检测方法的优缺点检测方法优点缺点聚合酶链反应（如直接PCR. mPCR.简单，快速，便宜，可危RT PCR、qPCR）假阳性率高，污染风险高，引物可能失效，用于 诊断常见和某些特殊病原体（如肺弛子菌、非结 核分枝杆菌等）等温（恒温）扩増技术（LAMP、NASBA、快速，敏感，特异RPA和SDA ）假阳性率高，污染风险高，引物可能失效，用于 诊断常见和某些特殊病原体芯片技术（
6、多病原等温 扩増微流控芯片技术、 POCT等）靶向通用引物多重PCR 和一代测序（如16s、 ITS）靶向NGS宏基因组NGS血清学试验（如醃联免 疫和免疫层析等检测）涂片显微镜检查病原国培养快速，敏感，特异，污染率低大部分检测仍需在扩増前进行样本和速算提取， 无需PCR认证未完全实现样品前处理自动化可对病原体按照科、属、种进 行分类，敏感度高,可定量不局限于特定病原体，可发现 新岀现的病原体，可获得整个 基因组,通过比对有助于发现 新型致病病原体引物可能失效，诊断某些特定病原体，难以区分 定植微生物和病原微生物，测序文库构建复杂， 可诊断某些特定的病原体，价格昂贵且耗时，有 可能被环境物种污
7、染,难以区分定植微生物和病 原雜物可能存在宿主核酸污染，价格昂贵且耗时（2-3 d）,有可能被环境物种污染，难以区分定植微 生物和病原微生物血清特异性抗体检测在感染早期可能呈假阴性， 包括对血清特异性抗体检测和需要采集急性期和恢复期双份血清进行检测木吟 快速抗原检测，价格便宜,可果评价；体液免疫缺陷会导致假阴性,受一些因 诊断急性感染 素影响也可能会出现假阳性结果；抗原检测结果不受机体免疫状况影响，但准曜较低快速（数分钟至数小时），可通过计算分析标本中各种微生體驟生肅鬆嘴聽敏感度及特异度低,受摘乍者體的限制据疑诊病原体采取特殊染色进彳5断经涂，标本容易收集,并可结敏感度及特异度低，无法检测非培
8、养病原体，某 合体外药敏试验结果为治疗提些病原培养十分耗时,某些病原微生物培养困难 供有用的信息或无法进行体外培养敏感度高，培养后检测快速需要病原体培养结果和已知病原体蛋白谱注：PCR :聚合酶链式反应；RT-PCR :实时逆转录PCR ; mPCR :多重PCR ; qPCR :实时荧光定量PCR ; LAMP :环引物介导的等温扩增；NASBA :核酸 序列扩增；RPA :重组聚合酶扩增；SDA :链置换扩增；POCT :即时检验或 床旁检测；ITS :内部转录间隔区；NGS :二代测序技术病原检测结果的判读及其临床价值 病原学检查结果的判读应该综合考虑患者的年龄、基础疾病、免疫状态、临床
9、 特点、病情严重程度以及先期的抗感染治疗等情况。1. 直接抗原快速检测胶体金法病毒抗原快速检测方法简便、快速、成本低。病毒抗原快速检测的特 异性较好，但存在敏感度低、假阴性率较高的问题。当临床高度怀疑为病毒感 染，但病毒快速检测结果为阴性时，应加做病毒核酸检测，以排查假阴性。2. 血清特异性抗体检测适合在门诊、急诊或基层医院用于病原体的筛査。但由于早期阳性率较低， 需要采集急性期及恢复期双份血清进行检测和效果评价，但体液免疫缺陷的患 者可呈假阴性。3.涂片所获取的各种标本均应行病原学涂片检查。在结果判读时，需要结合患者的 临床症状和影像学表现，排除操作过程或环境污染的可能。BALF离心沉淀后 行六胺银染色、抗酸染色和革兰染色可分别用来检测肺泡子菌、分枝杆菌和部 分细菌等。肺穿刺标本和胸腔积液涂片发现病原体对确诊具有重要意义。4.培养在进行痰培养前必须确定是合格痰标本，并排除操作不当或环境污染的情况。 定量培养有助于区分致病菌和定植菌。5.核酸分子扩增检测和基因芯片检测核酸分子扩增及等温扩增基因芯片检测等方法可实现快速分子诊断，所需时 间短，但现有核酸分子扩增技术也存在一定的局限性，尤其是难以快速检测和 确定多药耐药病原菌的耐药基因突变部分。
