《细菌转化,单克隆挑选及摇菌(最新编写）-修订编选》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌转化,单克隆挑选及摇菌(最新编写）-修订编选（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细菌转化，单克隆挑选及摇菌细菌转化，单克隆挑选及摇菌 1.接种 50100ul 菌液于 5 ml LB 试管中， 37 250 转/分 震荡约 3 小时，至 OD6000.2-0.6 时停止振荡（透过管能看到手指要挑选细 菌活力强时） 2、取 1.5ml 离心管与菌液放冰浴冷却 15min 3.将细菌转移至 1.5mL 的离心管中，4，4000 转/分离心 15min （防止菌体破裂） ，弃上清液 4.以 1ml 0.1M（0.2 倍菌液体积）预冷的 CaCl2 重悬细菌沉淀，冰浴 30min，4，4000 转/分离心 15min，弃上清液 5.用 250l（0.05 倍菌液体积）预冷的 Ca
2、Cl2 重悬细菌沉淀 6.1ng 质粒 DNA 加入到感受态细菌中， 轻轻旋转几次以混匀内容物， 冰上放置 30 分钟 7.将离心管放入 42的循环水浴中，90 秒 8.将离心管置于冰上，10 分钟 9.加入 200ulsoc 培养基 （加入了葡萄糖等物质， 比 LB 培养基更营养， 更利于热激后细菌恢复） ，200 转 3745min，同时将培养平板放入 孵箱 10.用一无菌玻璃推板轻轻将转化的细菌均匀地涂于培养基上。 （玻璃 推板充分火焰消毒，待充分冷却后再进行涂板，可将推板贴在平板盖 内侧，再用手隔板盖感觉温度） 11. 37培养箱中正置平板，待液体完全干后再倒置平板，培养 16 小时，
3、 将平板取出 4放置约 2 小时后观察。 挑选单个肉眼能见菌落， 坐上在平板上做上标记（菌落不易太大，否则有杂菌混入，培养箱中 培养不超过 16 个小时） 12、 在超净台内， 将细菌挑入 LB 培养基， 一个菌落一支管， 180200 转/分钟过夜（1216 个小时，以菌体浑浊为佳） 。抽取质粒（抽取质 粒时每支 LB 管也应对应相应的 EP 管） 备注 LB 培养基制备 蛋白胨 1%（g/ml） NaCl 1% 酵母粉 0.5% 到此配方为 LB 培养基（液体） 若配制平板则加 琼脂粉 1.5% 氨苄青霉素的储存浓度是 50100ug/ul，使用时稀释 1000 倍， 以下步骤在超净台进行， 培养液高压灭菌后， 待容器不烫手时加入氨苄， 轻摇混匀， 倒入平板， 每板大约 20ml
