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1、1 1.1 DNA 重组技术的基本工具 1科学家们经过多年的努力，创立了一种新兴生物技术基因工程。实施该工程的 最终目的是 ( ) A定向提取生物体的DNA分子 B定向地对DNA分子进行人工“剪切” C在生物体外对DNA分子进行改造 D定向地改造生物的遗传性状 解析： 基因工程的内容就是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”， 对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体 细胞内表达，产生出人类所需的基因产物，也就是定向地改造了生物的遗传性状。 答案： D 2下列关于限制酶的说法，正确的是( ) A限制酶广泛存在于各种生物中，其化学本质是蛋白
2、质 B一种限制酶只能识别一种或一类特定的核苷酸序列 C不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D限制酶均能特异性地识别由6 个核苷酸组成的序列 解析： 限制酶主要存在于微生物中，A错误；限制酶具有专一性，即一种限制酶只能识 别一种或一类特定的核苷酸序列，B正确；不同的限制酶切割DNA后会形成黏性末端或平末 端， C错误；限制酶均能特异性地识别核苷酸序列，但识别的核苷酸序列不一定是由6个核 苷酸组成的， D错误。 答案： B 3下列关于DNA连接酶的作用的叙述，正确的是( ) A将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯键 B将断开的两个DNA片段的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键 C连接
3、两条DNA链上碱基之间的氢键 D只能将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来 解析： 选项 A是 DNA聚合酶的作用，故A项错误。 DNA连接酶能将双链DNA片段末端连 接起来，重新形成磷酸二酯键，故B项正确、 C项错误。 D项只涉及了Ecoli DNA连接酶 的作用 T4 DNA连接酶还可以连接平末端，故D项错误。 答案： B 2 4 如下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步骤需用到的工具酶是( ) ADNA连接酶和解旋酶 BDNA聚合酶和限制性核酸内切酶 C限制性核酸内切酶和DNA连接酶 DDNA聚合酶和RNA聚合酶 解析： 目的基因和载体结合需“分子手术刀”限制性核酸内切酶和“分
4、子缝合剂” DNA连接酶。此过程不涉及DNA复制，不需要DNA聚合酶和解旋酶。 答案： C 5下图为DNA分子的切割和连接过程。 DNA分子的切割和连接 (1)EcoR I是 一 种 _ 酶 ， 其 识 别 序 列 是 _ ， 切 割 位 点 是 _与_之间的 _键。切割结果产生的DNA片段末端形 式为 _。 (2) 不同来源的DNA 片段结合，在这里需要的酶应是_，此酶的作用是在 _与_之间形成 _键而起“缝合”作用的，其中能连接 平末端的连接酶是_。 解析：EcoR I 是一种限制酶，从图中可以看出其识别序列是GAATTC ，切割位点是鸟嘌 呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。
5、切割后产生的DNA末端形式为黏性末 端。要将不同来源的DNA片段连接起来， 需要 DNA连接酶， 其作用是形成磷酸二酯键而将两 DNA片段“缝合”起来。T4 DNA连接酶既可以“缝合”黏性末端，也可以“缝合”平末端。 答案： (1) 限制性核酸内切( 限制 ) GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸 3 磷酸二酯黏性末端 (2)Ecoli DNA连接酶或T4 DNA连接酶鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸磷 酸二酯T4 DNA连接酶 A级基础巩固 1能有效地打破物种的界限，定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种 的生物技术是 ( ) A基因工程技术B诱变育种技术 C杂交育种技术
6、D组织培养技术 解析： 诱变育种是在一定的条件下，对某一品种进行诱变而产生的突变性状；杂交育种 必须在同种生物之间进行；组织培养技术是无性生殖，难以产生新品种；而基因工程可以打 破物种的界限，在不同种生物之间进行基因重组，从而定向改造生物的遗传性状。 答案： A 2在基因工程中，常用的“剪刀”“针线”和“载体”分别指( ) A大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶 B噬菌体、质粒、DNA连接酶 C限制酶、 RNA连接酶、质粒 D限制酶、 DNA连接酶、质粒 解析： 基因工程又叫DNA重组技术， 是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体 外 DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创
7、造出更符合人们需要的新的 生物类型和生物产品。由此可见，DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶( 限 制酶 ) 分子“剪刀”，DNA连接酶分子“针线” ，质粒、动植物病毒或噬菌体运载体。 答案： D 3下列四个DNA分子，彼此间具有黏性末端的一组是( ) AB CD 解析： 两个黏性末端彼此之间可以根据碱基互补配对原则连接成DNA片段。 答案： D 4作为基因的运输工具载体，必须具备的条件之一及理由是( ) 4 A能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B具有多个限制酶切割位点，以便于目的基因的表达 C具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件 D能够在
8、受体细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 解析：作为载体要携带目的基因进入受体细胞并使之表达，必须能够在受体细胞内稳定 地保存并大量复制。同时要具有某些标记基因，是为了通过标记基因是否表达来判断目的基 因是否进入了受体细胞，从而筛选受体细胞。载体要具有多个限制酶切割位点，则是为了便 于与外源基因连接。 答案： A 5限制酶是一种核酸内切酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列，下图为四 种限制酶BamH，EcoR ，Hind和Bgl的识别序列和切割位点： 切割出来的DNA黏性末端可以互补配对的是( ) ABamH 和EcoR BBamH 和Hind CBamH和BglDEcoR 和Hind
9、 解析：BamH切割出来的DNA黏性末端是 GATC ，Bgl切割出来的DNA黏性末端也 是 GATC ，它们可以互补配对。 答案： C B级能力训练 6如图表示两种限制酶识别DNA分子的特定序列，并在特定位点对DNA分子进行切割 的示意图，请回答以下问题： (1) 图中甲和乙代表_ 。 (2)EcoR、Hpa代表 _ 。 (3) 图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段，切口的类型分别为_、 _ 。甲中限制酶的切点是_之间，乙中限制酶的切点是 5 _之间。 (4) 由图解可以看出，限制酶的作用特点是_ _ 。 (5) 如果甲中G碱基发生基因突变，可能发生的情况是_ _ 。 解析： (1) 由题图
10、看出， 甲和乙代表由脱氧核苷酸构成的不同的DNA片段。 (2)EcoR和 Hpa能切割DNA分子，说明它们是限制酶。(3) 甲中切点在G、A之间，切口在识别序列中 轴线两侧，形成黏性末端；乙中切点在A、T之间，切口在识别序列中轴线处，形成平末端。 (4) 限制酶能识别DNA分子的特定核苷酸序列，并从特定位点切割DNA分子。(5) 当特定核苷 酸序列变化后，就不能被相应限制酶识别。 答案： (1) 有特定脱氧核苷酸序列的DNA片段 (2) 两种不同的限制酶 (3) 黏性末端平末端G 、A A、T (4) 能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切开 (5) 限制酶不能
11、识别切割位点 7限制酶Mun和限制酶EcoR 的识别序列及切割位点分别是C TTAAG 和 G AATTC 。如下图表示的是四种质粒和目的基因，其中箭头所指部位为酶的识别位点，质粒 的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是( ) 解析： 目的基因两侧有Mun和EcoR 两种限制酶的识别序列，用这两种酶切割都可 得到目的基因； B中质粒无标记基因，不符合作为载体的条件；C、D中的标记基因都会被破 坏。 答案： A 8下图表示某种质粒和人的胰岛素基因，其中a 表示标记基因，b 表示胰岛素基因， E1表示某限制酶的酶切位点，现用该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用 DNA连接酶
12、连接切割后的质粒和胰岛素基因，下列选项中不可能出现的是( ) 6 解析： 根据目的基因和质粒上的限制性核酸内切酶的切割位点及相互连接情况判断不可 能出现选项C的连接。 答案： C 9据图所示，有关工具酶功能的叙述错误的是( ) A限制酶可以切断a 处 BDNA聚合酶可以连接a 处 C解旋酶可以使b 处解开 DDNA连接酶可以连接c 处 解析： 限制酶切割DNA分子时破坏的是DNA链中的磷酸二酯键，如图a 处。 DNA聚合酶 是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3末端的羟基上，形成磷酸二酯键，因此DNA聚合 酶可以连接a 处。解旋酶解开两个碱基对之间的氢键，即b 处解开。 DNA连接酶连接的是两
13、个相邻的脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键，如 a 处，而图示的c 处连接的是 同一个脱氧核苷酸内的磷酸和脱氧核糖。 答案： D 10基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限 制酶的识别序列和切点是G GATCC ，限制酶的识别序列和切点是 GATC 。根据下 图判断下列操作正确的是( ) A目的基因和质粒均用限制酶切割 B目的基因和质粒均用限制酶切割 C质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割 D质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割 解析： 解此题要明确目的基因要切下，质粒只要切开。 限制酶的识别序列和切点是 7 GATC ，单独使用时可以把目的基因和
14、质粒都切断；限制酶的识别序列和切点是 G GATCC ，只能把它们切开，单独使用时不能切下，所以目的基因用限制酶切割，质粒用 限制酶切割； 因为用限制酶切割质粒时破坏了Gene，所以只能用Gene 作为标记基 因。 答案： D 11根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1) 限制酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。 (2) 质粒载体用限制酶X(识别的序列由6 个核苷酸组成)切割后产生的片段如下： AATTC G G CTTAA 该酶识别的序列为_，切割的部位是_。 (3) 为使切割后的载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外， 还可用限制酶Y切割，两种酶共同的特点是 _ 。 (4) 按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和 _DNA连接酶，其中后者只能连接一种末端。 (5) 基因工程中除质粒外，_和_也可作为载体。 解析： (1) 限制酶切割DNA分子后可产生两种类型的末端，即平末端和黏性末端。(2) 将图中片段两端的黏性末端对接后可以看出限制酶X 识别的序列为6 个核苷酸组成的 GAATTC ，互补链是CTTAAG ，切割的位点为G和 A之间的磷酸二酯键。(3) 质粒载体 可以用限制酶X切割， 也可以用另一种限制酶切
