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1、实验课要求,1.进入实验室须穿白大衣，实验室要保持安静，有秩序，手机要保持关闭或无声状态，以免影响他人。 2.必须严肃、认真地进行实验操作，观察实验结果。 3.动物室需保持清洁，定期确认饲料和水瓶，注意观察动物。 4.取及动物时，注意个人安全。,5.鼠笼及垫料需要每周更换次，用过的鼠笼必须及时清洗干净。 6.如有死亡动物，应及时报告并按规定处理。 7.爱护公共财物，节约各种试剂,每次实验结束后都要轮流值日，将实验室打扫干净，关好门窗和水电后方可离开实验室。,形态学实验（一）,实验主要内容,小白鼠的捉拿与固定、注射方法 动物麻醉及正确使用手术器械方法 肝硬化模型制备方法 解剖小白鼠并观察腹腔脏器
2、及解剖位置 （重点观察胆总管）,小白鼠的生物学特性,）体型小，体重20-40g，寿命一般为2-3年。 ）性情温顺，胆小怕惊，对外来刺激极为敏感。 ）属杂食性，胃容量小，不耐饥饿。对温、湿度变化敏感。 ）性成熟早，繁殖力强。,小白鼠的捉拿与固定方法,先用右手将鼠尾抓住并提起，将其旋转数周后放在实验台面上，在小白鼠向前爬行时用力向后拉尾，此时用左手的拇指和食指捏住小白鼠两耳和头颈部皮肤，然后将鼠置于左手心中，拉直后肢并用左手无名指和小指压紧尾巴和后肢，右手即可作注射、灌胃等实验操作。,常用给药途径与方法,）注射给药法：肌内注射 皮下注射 皮内注射 腹腔注射 静脉注射 ）口服给药法：饲料给药 胃管给
3、药,腹腔注射方法,小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左下腹部刺入皮下，使针头向前推0.51.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。 可先回抽注射器，确认 无血管或脏器刺破。 切勿用力过猛，以免刺 伤内脏器官。,动物术前准备,实验前动物需： 禁食 12-24小时 禁水 4-6小时 以免手术时出现呕吐及窒息死亡等现象,动物实验常用麻醉剂,（）吸入性麻醉剂：乙醚、氯仿等 特点：a.麻醉量与致死量相差大；b.麻醉深度易于掌握；c.麻醉后恢复快 （）非吸入性麻醉剂：巴比妥类、氨基甲酸乙酯、水合氯醛、氯胺酮等 特
4、点：优点是使用方法简便、麻醉过程平稳，且一次用药便可维持较长时间等；缺点是动物的苏醒较慢，麻醉深度和使用量较难控制。,5%水合氯醛，按0.2m1/20g腹腔注射,麻醉药给药途径,）注射给药法：肌内注射 皮下注射 皮内注射 腹腔注射 静脉注射 ）口服给药法：灌胃法 ）其他途径：呼吸道给药 脊髓内给药 直肠内给药,麻醉效果的观察,呼吸：深慢而平稳 反射活动：明显迟钝 肌张力：全身肌肉松弛 皮肤夹捏反应：皮肤夹捏反射消失,正确持剪刀法,为拇指和第四指分别插入剪刀柄的两环，中指放在第四指环的剪刀柄上，食指压在轴节处起稳定和向导作用，有利操作。,正确持镊法,正确持镊是用拇指对 食指与中指。,缝 针,缝针
5、是用于各种组织缝合的器械，它由三个基本部分组成，即针尖，针体和针眼。 圆针：弧度大者多用于深部组织及软组织。 三角针：前半部为三棱形，较锋利，用于缝合皮肤、软骨、韧带等坚韧组织，损伤性较大。 铲头针：临床较少用。,圆针,三角针,铲头针,直针,器械打结法,肝硬化造模的主要方法,化学性肝硬化模型 结扎胆总管肝硬化模型 实验性免疫肝硬化模型 血吸虫虫卵所致肝硬化模型 转基因肝硬化模型 复合法,化学性肝硬化模型,无色、易挥发、不易燃的液体。具氯仿的微甜气味。化学性质稳定。 分子量153.84，微溶于水，可与乙醇、乙醚、氯仿及石油醚等混溶。 操作注意事项：有毒，加强通风。,四氯化碳（ CCl4 ）：ca
6、rbon tetrachloride,CCl4对肝脏损伤机理,CCl4通过肝微粒体细胞色素P450氧化酶激活后, 产生自由基CCl3-及Cl,CCl3-与肝细胞内大分子发生共价结合,破坏肝细胞功能,肝纤维化、肝硬化,CCl4模型制备过程,给药时间：腹腔注射次/周，共4周，最后一次给药24h之后处死并取材。 药物剂量：20% CCl4 0.1ml/20g 特点：成功率高、方法成熟，但动物个体差异较大。,CCl4 : 橄榄油: 即20的CCl4注射,CCl4注射后肝脏变化,注射CCl4一个月后,正常小白鼠肝脏,正常组,CCL4 组,CCL4 组,结扎胆总管肝硬化模型,固定,备皮,切开 皮肤,切开
7、腹膜,消毒,正常人体胆总管解剖,小白鼠胆总管位置,结扎胆总管,进腹后提出十二指肠，近十二指肠处游离胆总管，两端丝线结扎,切断胆总管、缝合,结扎胆总管手术过程,Curr Protoc Toxicol. 2012 May;Chapter 23:Unit 23.1,术后周后胆管明显扩张,胆囊,胆囊管,肝总管,术后周后可见胆囊、胆 囊管及肝总管明显扩张； 皮肤、肝脏明显变黄,正常组,BDL组,BDL组,每个组 4只,正常组 1只,加药组 3只,考核方式: 1.平时成绩（平时实验操作能力，实验态度，出勤率 ） 30% 2.实验报告书 70%,思考题,肝纤维化和肝硬化的病理特点？ 人体肝门部解剖特点？手术时注意事项？ 人体胆总管与十二指肠的关系？ 肝外胆汁淤积引起肝损伤的机理？ 胆漏的原因及临床表现？,
