《电化学发 光原理简介》由会员分享，可在线阅读，更多相关《电化学发 光原理简介（46页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、电化学发光免疫分析技术简介电化学发光免疫分析技术简介 演讲人：赵志德 演讲时间：2010-3-18 标记免疫的发展简介 电化学发光技术原理 电化学发光技术特点 标记免疫的发展简介 电化学发光技术原理 电化学发光技术特点 内容内容 标记免疫的发展简介标记免疫的发展简介 电化学发光技术原理 电化学发光技术特点 内容内容 免疫测定的发展和应用免疫测定的发展和应用 免疫测定免疫测定 免疫浊度测定（g-ng）标记免疫测定（ng-pg） 放射免疫测定法 酶免疫测定法 荧光免疫测定法 化学发光免疫测定法 电化学发光免疫测定法 免疫透射浊度测定法 免疫胶乳浊度测定法 免疫速率散射浊度测定法 电化学发光电化学发
2、光 1960S 197080S2000S 放射免疫 酶免 荧光免疫 化学发光 放射免疫 酶免 荧光免疫 化学发光 标记免疫技术的发展标记免疫技术的发展 标记免疫的发展简介 电化学发光技术原理电化学发光技术原理 电化学发光技术特点 内容内容 电化学发光免疫分析(ECLIA)电化学发光免疫分析(ECLIA) Eletro-chemiluminescence immunoassayEletro-chemiluminescence immunoassay 什么是电化学发光免疫分析什么是电化学发光免疫分析(ECLIA) ？ ?ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应， 是电化学和化学发光两
3、个过程的完美结合 ? 电化学发光免疫测定是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合 的产物，是目前非常先进的标记免疫测定技术 。 E ELECTRO C CHEMI L LUMINESCENCE I IMMUNO A ASSAY 磁性微粒子磁性微粒子 亲和链霉素亲和链霉素生物素生物素 钌标记物钌标记物 Paramagnetic microparticle-SB-AgAb complex labelled with Ru(bpy)3+2+ 反应时间反应时间: 18 分钟分钟 专利的电化学发光检测技术专利的电化学发光检测技术 免疫复合物 电化学发光技术主要技术电化学发光技术主要技术 三联吡啶钌标记技术
4、三联吡啶钌标记技术 链霉亲和素生物素技术 磁性微粒子技术 电启动的化学发光反应 专利的电化学发光检测技术专利的电化学发光检测技术 钌复合物标记 三联吡叮钌复合物三联吡叮钌复合物Ru(bp)3+2+ 标记；标记； 水溶性小分子， 免疫损伤小；水溶性小分子， 免疫损伤小； 结构稳定， 受干扰影响小；结构稳定， 受干扰影响小； 与三丙胺（发光电子供体）共同 参与氧化还原反应； 与三丙胺（发光电子供体）共同 参与氧化还原反应； 应用广泛（激素，核酸等）应用广泛（激素，核酸等） 三联吡啶钌N羟基琥珀酰胺(NHS)酯 夹心法捕获法 核酸检测竞争法 磁性微粒子 亲和素-生物素 抗原抗体探针钌标记物 电化学发
5、光具有广泛的检测空间电化学发光具有广泛的检测空间 电化学发光技术主要技术电化学发光技术主要技术 三联吡啶钌标记技术 链霉亲和素生物素技术链霉亲和素生物素技术 磁性微粒子技术 电启动的化学发光反应 专利的电化学发光检测技术专利的电化学发光检测技术 共价配合物 生物素链霉亲和素耦联体系生物素链霉亲和素耦联体系 1分子亲和素分子亲和素4分子生物素分子生物素 结合力强，特异性高结合力强，特异性高 提高检测灵敏度提高检测灵敏度 电化学发光技术主要技术电化学发光技术主要技术 三联吡啶钌标记技术 链霉亲和素生物素技术 磁性微粒子技术磁性微粒子技术 电启动的化学发光反应 专利的电化学发光检测技术专利的电化学发
6、光检测技术 磁性颗粒载体 直径仅直径仅2.8 um, 体积小，悬浮于 液体中，构成均一，稳定的类均 相试剂 体积小，悬浮于 液体中，构成均一，稳定的类均 相试剂 凹凸不平，增强包被效率凹凸不平，增强包被效率 磁性吸引，易于磁性吸引，易于AgAb复合物的 结合分离 复合物的 结合分离 反应前仪器自动混匀反应前仪器自动混匀 电化学发光技术主要技术电化学发光技术主要技术 三联吡啶钌标记技术 链霉亲和素生物素技术 磁性微粒子技术 电启动的化学发光反应电启动的化学发光反应 电极表面的电化学发光反应电极表面的电化学发光反应 电化学发光信号的检测电化学发光信号的检测 稳定的检测窗口稳定的检测窗口 电化学发光
7、免疫反应全过程电化学发光免疫反应全过程 磁性微粒子磁性微粒子 亲和链霉素亲和链霉素生物素生物素 钌标记物钌标记物 电化学发光免疫反应过程电化学发光免疫反应过程 1.反应杯的标记免疫反应1.反应杯的标记免疫反应 Elecsys HIV Combi图解图解 第四代抗原抗体联合检测第四代抗原抗体联合检测 单克隆HIV抗体检测 P24 抗原 单克隆HIV抗体检测 P24 抗原 使用大量的重组抗原 gp41/gp36 和 RT 来 检测 IgG and IgM抗 体 使用大量的重组抗原 gp41/gp36 和 RT 来 检测 IgG and IgM抗 体 光电倍增管 磁铁 工作电极 电极电极 清洗液清洗
8、液 电化学发光免疫反应过程电化学发光免疫反应过程 2.测量池中的ECL反应2.测量池中的ECL反应 电极电极 工作电极 磁铁 TPA TPA TPA TPA 光电倍增管 电化学发光免疫反应过程电化学发光免疫反应过程 2.测量池中的ECL反应2.测量池中的ECL反应 电化学发光免疫反应过程电化学发光免疫反应过程 3.电极表面的电化学发光反应3.电极表面的电化学发光反应 标记免疫的发展简介 电化学发光技术原理电化学发光技术原理 电化学发光技术特点电化学发光技术特点 内容内容 试剂稳定试剂稳定 测量范围宽，灵敏度高 特异性优异 检测菜单丰富 准确性好，精密度高 操作简便 电化学发光技术特点电化学发光
9、技术特点 试剂稳定性试剂稳定性 货架期18个月，开封后3个月货架期18个月，开封后3个月 试剂稳定 测量范围宽，灵敏度高测量范围宽，灵敏度高 特异性优异 检测菜单丰富 准确性好，精密度高 操作简便 电化学发光技术特点电化学发光技术特点 检测范围宽，减少稀释检测范围宽，减少稀释 高灵敏度可用于感染的早期检测高灵敏度可用于感染的早期检测 Elecsys HBsAgElecsys HBsAg 第四代第四代HIV 同时检测同时检测HIV P24抗原和抗抗原和抗HIV 抗体的试剂抗体的试剂 缩短窗口期缩短窗口期,提高检测安全性提高检测安全性 试剂稳定 测量范围宽，灵敏度高 特异性优异特异性优异 检测菜单
10、丰富 准确性好，精密度高 操作简便 电化学发光技术特点电化学发光技术特点 ElecsysElecsys Anti-HCV 献血员中的特异性: 99.71% Anti-HCV 献血员中的特异性: 99.71% COI Elecsys HIV combi 献血员中的特异性: 99.74% 献血员中的特异性: 99.74% Elecsys HIV combi 临床特异性优异（常规标本）临床特异性优异（常规标本） 特异性达到99.63%特异性达到99.63% Elecsys Anti-HCVElecsys Anti-HCV 对于各种基因型的检出对于各种基因型的检出 ElecsysHIV combi 检
11、测检测HIV变异 识别所有基因型和变异株 变异 识别所有基因型和变异株 试剂稳定 测量范围宽，灵敏度高 特异性优异 检测菜单丰富检测菜单丰富 准确性好，精密度高 操作简便 电化学发光技术特点电化学发光技术特点 丰富的检测菜单丰富的检测菜单 自身免疫自身免疫 AntiCCP 脓毒血症脓毒血症 IL6 BRAHMS PCT 先兆子痫风先兆子痫风 险评估险评估 sFLT1 PIGF 传染性疾病传染性疾病 Anti-HAV Anti-HAV IgM Anti-HBc Anti-HBc IgM Anti-Hbe Anti-HBs HBe Ag HBs Ag HBs Ag confirmatory Ant
12、i-HCV HIV Antigen HIV Combi HIV Ag confirmatory Rubella IgG/IgM Toxo IgG/IgM CMV IgG /IgM 心肌标志物心肌标志物 CK-MB Digoxin Digitoxin Myoglobin NT-proBNP Troponin T 骨标志物骨标志物 -Crosslaps 25-(OH)Vit. D3 Intact PTH PTH STAT N-MID Osteocalcin Total-P1NP 肿瘤标志物肿瘤标志物 AFP CA 125II CA 15-3 CA 19-9 CA 72-4 CEA CYFRA 21
13、-1 Free PSA NSE S-100 Total PSA 其它其它 IgE 激素激素 ACTH C-Peptide Cortisol DHEA-S Estradiol FSH HCG+ Insulin LH Progesterone Prolactin SHBG Testoterone 孕早期唐氏筛查孕早期唐氏筛查 Free -HCG PAPP-A 甲状腺功能甲状腺功能 Anti-TG Anti-TPO Anti-TSHR FT3 FT4 T3 T4 T-Uptake TG TSH 贫血贫血 Ferritin Vitamin B12 Folate RBC Folate 试剂稳定 测量范围
14、宽，灵敏度高 特异性优异 检测菜单丰富 准确性好，精密度高准确性好，精密度高 操作简便 电化学发光技术特点电化学发光技术特点 二级校准品 一级校准品 工作校准品 商业校准品 参考方法参考方法 参考测量步骤参考测量步骤 厂商选择性的测量步骤厂商选择性的测量步骤 厂商标准测量步骤厂商标准测量步骤 用户常规测量步骤用户常规测量步骤 标本 Result definition of SI-unit uc(y) Uncertainty 准确可靠的检测结果：可溯源性准确可靠的检测结果：可溯源性 溯源性 溯源性溯源性 标准化标准化 （standardization)（standardization) 检测值可
15、靠性检测值可靠性 试剂试剂 、 分析仪分析仪 和和 定标品定标品 形成一个密不 可分的 完整系统 为得到具有可靠保证的实验室结果 形成一个密不 可分的 完整系统 为得到具有可靠保证的实验室结果 准确可靠的检测结果：可溯源性准确可靠的检测结果：可溯源性 试剂稳定 测量范围宽，灵敏度高 特异性优异 检测菜单丰富 准确性好，精密度高 操作简便操作简便 电化学发光技术特点电化学发光技术特点 y = P1 P4 1 + (x/P2) P3 + P4 信息参数 测试数据 应用参数 定标数据 质控数据 稳定性数据 试剂 定标 Reagent identification 2点定标点定标 12点的全点定标生产
16、厂 使用者进行两点定标 日常工作不需要定标 检测时间：9/18分钟检测时间：9/18分钟 电化学发光系统电化学发光系统定标方式定标方式 简便、准确、节省简便、准确、节省 电化学发光技术主要技术总结电化学发光技术主要技术总结 三联吡啶钌标记技术三联吡啶钌标记技术 1.循环使用，不会被消耗，电极表面的氧化还原反应循环进行，测定信号无限 循环放大，检测灵敏度大大提高 信号无限 循环放大，检测灵敏度大大提高 2.其盐是很稳定的水溶性化合物，试剂的稳定性好，效期长试剂的稳定性好，效期长 3.N 羟基琥珀酰胺（ NHS ）酯能与蛋白质赖氨酸的-氨基或核酸上的氨基形 成稳定的酰胺键，应用广泛，宽广的检测菜单应用广泛，宽广的检测菜单 4.惰性元素，非放射性元素，稳定稳定 5.Ru(bpy)Ru(bpy)3 2+ 3 2+ 和TPA TPA ，无电压的情况非常稳定，确保反应结果的
