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1、磷脂原位凝胶- 一种新的注射用长效缓释给药系统,1,生物技术药物制剂,问题,稳定性差，存在显著的首过效应 生物半衰期短，消除快,2,注射用长效缓控释给药系统的优点,可减少给药次数, 提高患者的顺应性。 稳定的血药浓度, 避免了峰谷现象。 直接注入治疗部位, 可降低系统毒性。 缓释制剂因提高治疗效果, 以及减少了制剂配发、 服药和监护等健康护理时间, 而使总的治疗费用降低。,刺痛，患者的顺应性差； 血药浓度变化大。,普通注射给药的缺点：,3,生物半衰期短,原位凝胶 PLGA微球,4,原位凝胶,是一类以溶液状态给药后，能在用药部位立即发生相转变，由液态转化成非化学交联半固体凝胶的制剂。 分类： 在
2、研：温度敏感型，pH敏感型，离子敏感型，光敏感型等。 应用：扩散沉淀型（聚合物、蔗糖酯） 材料：天然或化学合成高分子聚合物，如壳聚糖，帕洛沙姆，PEG/PLGA, PEG/PPO，卡波姆等。,5,原位凝胶,市售产品：Eligard 、 Atrigel 、Atrisorb 基本材料：PLGA / NMP 优点：缓释时间可调节幅度较大,6,磷脂 凝胶,处 方 组 成,减少乙醇刺激性,新型磷脂凝胶缓释递药系统,7,磷脂,易溶于乙醇,内源性成分,价廉易得,可生物降解,应用安全,不溶于水,新型磷脂凝胶缓释递药系统,8,磷脂溶于乙醇中，形成澄清透明低粘度的可注射液体。,磷脂析出，形成半固体凝胶状药物储库，
3、缓慢释药。,醇溶 解性,水不 溶性,皮下注射,乙醇扩散,水分渗入,形 成 机 制,9,磷脂凝胶的处方,10,制剂外观性质,外观：澄清透明,初始粘度： 低（ 200 cP），可注射； 加MCT者粘度增加，PPSG-70最显著,11,含水量增加，粘度增加，PPSG 70最显著,制剂粘度随含水量的变化,迅速的相转变，控制突释,高粘度，缓释药,较大的固化区 域（68.9%）,12,凝胶相转变中的微观形态,加MCT或水分渗入 微粒析出 增加粘度，缓慢释药,13,凝胶在水中的溶剂扩散行为,乙醇扩散速率：药物释放过程,PPSG-40-(-) PPSG-40-(+) PPSG-70-(-) PPSG-70-(
4、+),水分渗入速率：磷脂固化过程,14,局部刺激性评价,未见明 显刺激性,15,磷脂凝胶在多种药物上的应用,多肽类药物：醋酸奥曲肽、醋酸艾塞那肽 小分子化学药物：盐酸阿霉素、匹伐他汀钙,16,释放曲线,奥曲肽磷脂凝胶的体外释放,17,奥曲肽磷脂凝胶的体外释放,状态变化：,澄清固化浑浊,18,药时曲线： a.溶液组 b.微球肌肉注射 c.微球皮下注射 d.PPSG-70(+)皮下注射,奥曲肽磷脂凝胶的体内药动学结果,缓释一个月,大鼠皮下注射凝胶PPSG-70(+)后，迅速固化形成药物储库,19,20,磷脂凝胶在体内逐渐降解,(n=3),奥曲肽磷脂凝胶的体内形态变化,实验动物：雄性昆明小鼠30只，
5、体重25-30g 模型建立方法：每只小鼠于左腋窝皮下注射H-22小鼠肝癌细胞株细胞 实验分组：将30只小鼠称重后随机分为3组，每组10只。 A为对照组（生理盐水组）：皮下接种肿瘤24h后予以相同容积无菌生理盐水腹腔注射，每日一次，连用14d； B为实验组（制剂组）：皮下接种肿瘤24h后皮下注射一次醋酸奥曲肽凝胶制剂1.4mg/kg（以14d给药量计），给药体积为0.2ml ； C为阳性组（溶液组）：皮下接种肿瘤24h后腹腔注射奥曲肽溶液100g/kgd，每日一次，连用14d 。 实验方法：在一定的时间点应用游标卡尺测量肿瘤的长径和宽径，最后一次注射后处死小鼠，切除肿瘤，4%多聚甲醛固定，包埋，
6、连续切片后行常规HE染色和免疫组织化学染色,异位瘤实验方案,奥曲肽磷脂凝胶的药效学结果,21,以测量时间（d）为横坐标，以肿瘤体积的对数值为纵坐标作图。,异位瘤实验结果,奥曲肽磷脂凝胶的药效学结果,22,HE染色结果,A为OCT溶液组 B为OCT凝胶制剂组 C为生理组 HE结果表明： A组肿瘤坏死明显，残存肿瘤细胞中可见较多的凋亡细胞及碎片，血管及相关增殖情况不明。 B组能够清楚看到肿瘤大片坏死，大多数仅存少量肿瘤细胞残影，故无法看清血管及相关增殖情况（核分裂等）。 C组能够看到肿瘤中央间或出现肿瘤性缺血坏死灶，细胞呈片状生长，分化程度低，核浆比例大，细胞深染，未见明显核分裂。 肿瘤细胞坏死程
7、度： 制剂组溶液组生理组,23,40倍,200倍,奥曲肽磷脂凝胶的药效学结果,溶液组和制剂组的血管稀疏，而生理组的血管密集,生理组的ki-67呈现高表达，而制剂组和溶液组呈现低表达，且制剂组的表达最低，提示制剂组细胞增殖最为缓慢，而生理组细胞增殖最快。,溶液组的tunel呈现高表达，制剂组呈现中度表达，而生理组呈现低表达，提示溶液组细胞凋亡情况最为严重。,A为OCT溶液组，B为OCT凝胶制剂组，C为生理盐水组,奥曲肽磷脂凝胶的药效学结果,24,实验动物：5周龄雄性SD大鼠（100-150g） 模型建立方法：适应环境1周后，腹腔注射一次100mg/kg的二乙基亚硝胺（DEN）并开始给予含有100
8、mg/L亚硝基吗啉的饮用水，每只给予40ml，每隔一天更换一次新配制的含有亚硝基吗啉的饮用水，持续8周。 实验分组： 生理盐水组（n=10）：从第8周起，饮用正常自来水。实验开始后每隔一天给大鼠皮下注射1ml/kg的生理盐水。 阳性对照组（n=10）：从第8周起，饮用正常自来水。实验开始后每隔一天给大鼠皮下注射市售处方的奥曲肽溶液，给药剂量为0.2mg/kg。 凝胶制剂组（n=10）: 从第8周起，饮用正常自来水。实验首日给大鼠皮下注射OCT凝胶制剂，给药剂量为6mg/kg，给药体积为0.7ml。 实验方法： 按照分组情况，大鼠自由饮食，饮用含有亚硝基吗啉的饮用水，并按照既定方式给药。于16周
9、处死所有老鼠，股动脉放血后迅速取出其肝脏并且固定，测定血中VEGF水平，并将固定后的肝脏石蜡包埋，切片后行HE染色和免疫组化研究。,原位肝癌模型实验方案,奥曲肽磷脂凝胶的药效学结果,25,A为OCT溶液组，B为OCT凝胶制剂组，C为生理盐水组。 HE染色结果： A，B组周围肝组织水肿（水样变性+），可见界限清楚的结节，推挤周围肝组织，中央可见血管扩张；肝细胞体积核大，深染，核仁清，脱质嗜碱性，结合大体考虑瘤性结节。 C组原发性肝细胞癌，肝细胞水肿（+）,给予醋酸奥曲肽的A、B组血清中VEGF水平明显低于生理盐水组。,原位肝癌模型实验结果,奥曲肽磷脂凝胶的药效学结果,26,药代动力学研究,醋酸艾
10、塞那肽磷脂凝胶,27,将异硫氰酸荧光素（FITC）溶解于乙醇中，将艾塞那肽溶解于的碳酸盐缓冲液中，混合室温反应，纯化，冻干。 将得到的FITC-exenatide与空白磷脂原位凝胶混合。,FITC-exenatide 磷脂原位凝胶 的制备,给药方案,将大鼠随机分为两组，每组 5只。 制剂组：给大鼠背部皮下注射 1g FITC-exenatide磷脂原位凝胶。 溶液组：给大鼠背部皮下注射1ml FITC-exenatide水溶液，浓度为150g/ml。,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,28,药时曲线,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,29,药动学参数,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,30,药效学研究大鼠,一、造模-二型糖尿病大
11、鼠 分别用普通饲料和高糖高脂饲料喂养wista 雄性大鼠，约10周后，高糖高脂组大鼠相对于普通饲料喂养的大鼠体重增加更明显,更重要的是会出现胰岛素抵抗现象。 体重测定：电子秤 胰岛素抵抗现象观察：口服耐糖实验,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,32,分别用普通饲料和高糖高脂饲料饲喂大鼠，约10周。体重（g)变化如下：,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,33,口服耐糖实验： 取高脂组大鼠与对照组大鼠各 5只，禁食 12 h，自由饮水，称体重后，灌胃给予30%葡萄糖溶液，给药剂量为 2 g/kg，分别在 0、15、30、60、120、180 min 于大鼠尾静脉取血，取少部分血液直接用罗氏血糖仪测定其血糖值，剩余的血液在
12、室温下凝结 30 min 后，离心（5000 rpm，15 min），取血清于-20 冻存备用。将取得的血清用胰岛素 ELISA 试剂盒测定其胰岛素浓度。,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,34,口服耐糖实验结果： 血糖值(mmol/L)随时间(min)的变化,大鼠胰岛素水平（ng/ml)随时间的变化：,说明为了达到相同的降糖效果，高脂组大鼠需要分泌更多的胰岛素，其形成了明显的胰岛素抵抗。,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,35,将产生胰岛素抵抗的大鼠禁食18 h，自由饮水，称其体重。称取链脲佐菌素 STZ，溶于适量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中（pH 4.5），按 25 mg/kg剂量立即腹腔注射，连续腹腔注射3 d后，
13、继续高脂饲料饲养 7 d。禁食后，于尾静脉取血，用罗氏血糖仪测定其空腹血糖值，选择血糖值大于 11.0 mmol/L的大鼠，即糖尿病大鼠用于试验。,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,36,诱导2型糖尿病大鼠模型,二、给药方案 A：药物制剂组（n=5）：糖尿病大鼠皮下注射给予艾塞那肽磷脂凝胶 B：药物溶液组（n=5）：糖尿病大鼠皮下注射给予艾塞那肽溶液（给药剂量10g/Kg/次，一天给药两次，给药时间间隔 8小时） C：生理盐水组（n=5）：糖尿病大鼠皮下注射给予生理盐水（一天给予两次，给予时间间隔8小时）,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,37,三、实验结果,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,38,血糖变化情况,药效学研究小鼠,
14、研究采用db 小鼠来对艾塞那肽磷脂原位凝胶的药效进行研究。 db小鼠是一种自发型糖尿病模型，它是由一种基因自发突变C57小鼠回交而来，在生长发育过程中表现出肥胖、高血糖、高胰岛素血症， 甘油三酯、总胆固醇水平升高，胰岛功能不足，肝脏肾脏心脏病变，适用于进行二型糖尿病研究。,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,39,一、分组及给药方案 共19只雌性d/b小鼠，分为三组，其中制剂组7只，溶液组6只，生理盐水组6只。实验过程中溶液组死亡一只。先测定初始血糖和体重后，制剂组每只小鼠皮下注射0.5g磷脂凝胶，共含Exenatide(EXT)150ug,溶液组每只小鼠每天接受两次EXT溶液（50ug/ml）皮下注射，每
15、次剂量为5ug，生理盐水组每只小鼠每天接受两次生理盐水皮下注射，每次剂量为0.1ml.,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,40,二、观测指标及测定方法 每天测定小鼠的血糖，直到制剂组小鼠血糖失去控制后所有小鼠眼眶采血约0.8ml,一部分血液用EDTA抗凝后测定HbA1c值，另一部分离心后取血浆测定胰岛素含量，最后处死所有小鼠，取出胰腺，固定染色后，用光学显微镜观察切片。 血糖值：罗氏血糖仪测定 HbA1c:糖化血红蛋白测定仪 Insulin: Ellisa 试剂盒 切片：多聚甲醛固定，石蜡包埋，HE染色,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,41,三、观测结果 血糖,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,42,血红蛋白HbA1c 值,醋
16、酸艾塞那肽磷脂凝胶,胰岛素含量,43,胰腺组织切片,1010倍,2010倍,醋酸艾塞那肽磷脂凝胶,a.制剂组,b. 溶液组,C. 生理盐水组,44,证实了制剂对胰腺的保护作用，其促进了胰岛细胞的再生，从而刺激胰岛素分泌。,研究总结,载体组成：小分子材料构成；生物相容性好；制备简单； 药代动力学：缓释良好；突释较弱； 体内药效学：缓释长效，药效可达2周-1个月。,总之，磷脂原位凝胶是一种具有良好开发前景的注射用缓控释制剂。,45,46,Thank You !,原位凝胶+瘤内给药,研究背景,盐酸阿霉素磷脂凝胶,45,盐酸阿霉素(doxorubicin hydrochloride),阿霉素分子结构,盐酸阿霉素磷脂凝胶,46,处方： E80（72%） MCT（17%） 无水乙醇（11%） 盐酸阿霉素,盐酸阿霉素磷脂凝胶,47,荷瘤动物模型的建立 小鼠肉瘤S180细胞株；昆明小鼠 实验分组及给药 （1）PME-D组，瘤内
