《高中生物 实验:大肠杆菌的培养和分离课件 浙科选修1》由会员分享,可在线阅读,更多相关《高中生物 实验:大肠杆菌的培养和分离课件 浙科选修1(26页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、实验1:大肠杆菌的培养和分离,微生物,单细胞原核,分支状的菌丝(基内、气生),放线菌,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,就会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体(种群) 菌落是鉴定菌种的重要依据,菌落,芽孢:细菌的休眠体,芽孢,结构 异养型,兼性厌氧型,革兰氏阴性(红色)(G-) 物质(元素)组成:C H O N P S,大肠杆菌,按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。,培养基类型,液体培养基,固体培养基,凝固剂 琼脂,扩大培养,工业生产,分离纯化,鉴定菌种,计数,保藏,选择培养基 鉴定培养基,天然培养基 合成培养基,培养基成分,消毒:较为温和的方法,
2、如酒精 注:消毒不能杀死芽孢 灭菌:强烈,所有,完全无菌 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,无菌技术,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法:70-75 下煮30min或 80 下煮15min(牛奶) 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒(空气),(1)常用消毒的方法:,(2)常用灭菌的方法:,1、灼烧灭菌,2、干热灭菌:160-170 下加热1-2h。,3、高压蒸汽灭菌:100kPa、121 下维持15-30min.,称量-计算-溶化-灭菌-倒平板 灭菌:加上封口膜,用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌,1Kg压力灭
3、菌15Min,步骤一:制备LB培养基(液),倒平板,步骤一:制备LB培养基(液),紫外灯,过滤风,酒精灯,酒精棉球 在火焰旁右手3指拿锥形瓶,2指拿封口膜 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖 待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置,倒平板过程总结,从大肠杆菌斜面锥形瓶中的液体培养基 接种好后在37度摇床振荡培养12h 工具:接种环在接种前要灭菌,步骤二:大肠杆菌的扩大培养,分离方法:平板划线分离法 原理:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的
4、子细胞群体,这就是菌落。 只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置培养1-2天、划线末端出现不连续的单个菌落,步骤三:大肠杆菌的分离纯化,平板划线接种,灼烧接种环,冷却,划线 (第一区域),蘸取菌液,灼烧接种环,冷却,划线 (第二区域),灼烧接种环,冷却,划线 (第三区域),灼烧接种环,冷却,划线 (第四区域),灼烧接种环,冷却,划线 (第五区域),灼烧接种环,平板倒置放置培养,第一区域,第二区域,第三区域,第四区域,第五区域,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?,操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污
5、染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落 划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者,2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?,以免接种环温度太高,杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?,划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,将单菌落用划线法接种到斜面,37度培养24h后放入4度冰箱保藏,步骤四:接种到斜面保存,分离的另一种方法:稀释涂布平板法,分离的另一种方法:稀释涂布平板法,