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1、T-SPOT.TB 结核感染T细胞检测 （免疫斑点法）,列入欧美等20多个国家结核诊疗指南,.,内容,结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享,.,内容,结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享,.,2000-2008年我国肺结核报告发病情况,结核分枝杆菌（MTB）是结核病的致病菌，通过呼吸道传播，可以侵入人体全身各种器官，主要感染肺部 全世界约三分之一的人群感染了结核分枝杆菌，2012年全球结核病报告显示，在2011年有870万新发病例， 140万人死于结核病,.,活动性结核与潜伏性结核,新发TB病例来自
2、潜伏性结核感染人群 潜伏性结核感染（hidden epidemic）人群数量巨大“定时炸弹” 若想控制活动性TB，必须先控制潜伏性结核感染 鉴别高危人群 预防性治疗 免疫接种,活动性TB 全球每年900万新发病例 仅为冰山一角,Latent TB - “hidden epidemic” - 2 billion people infected,.,活动性结核与潜伏性结核,接触活动性结核病患者,暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除,没有症状,结核杆菌仍旧存在而不能被侦测 X-光/ CT 扫描显示正常 没有抗体应答 诊断困难 传统的结核感染检测只有PPD,机体被感染,受免疫抑制 没有临床症状,终身
3、处于感染状态,潜伏性结核,有临床症状 具有传染性,结核杆菌可以通过涂片、培养检测出 胸部的 X-光或 CT 扫描显示异常 肺外结核难以诊断(特别是儿童),活动性结核-结核病,5%,5%,再次激活,？,.,LTBI活动的危险因素,Erkens J ERJ 2010,结核病常规诊断技术,耗时长 涂阴PTB检出低 肺外结核难,结核 诊断,X射线,分子诊断,接触史,涂片 镜检,细菌培养,特异性差 主观 肺外结核难,操作复杂 技术要求高 涂阴PTB检出低 肺外结核难,不能区分NTM PTB近半阴性 肺外结核难,试剂灵敏度低； 不能区分既往感 染和发病病人,抗体检测,WHO关于血清学检测声明,2011年7
4、月20日，世界卫生组织（WHO）发出正式声明，要求禁止将血清学检测方法（抗原，抗体，蛋白芯片等）用于肺结核和肺外结核的诊断。 WHO warns against the use of inaccurate commercial serological tests for pulmonary and extra-pulmonary TB,小结,活动性结核病与潜伏性结核感染的区别 LTBI危险因素 结核中有20%左右的肺外结核，诊断困难 传统结核诊断方法不能满足临床需要,内容,结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享,T-SPOT.TB原理,T-SPOT
5、.TB原理：结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原（ESAT-6，CFP 10）刺激时会分泌多种细胞因子（ IFN- ）。因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断 列入美国、英国等欧美20多个国家结核诊疗指南 美国CDC推荐：BCG接种人群结核感染检测首选 国内风湿科/消化科指南,T-SPOT.TB原理,由于效应T细胞存活时间很短（6周左右），而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状,结核杆菌特异抗原,T-SPOT.TB 准确、可信、快速,特异性好 只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（
6、BCG）无交叉反应 美国FDA数据：特异性97.1%(297/306) 国内临床数据：特异性94.1%(478/508) 灵敏度高 基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率 美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183) 国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655) 快速简便 简单的血液检测，隔天报告结果,阴性预测值：93.9%（478/509） 阳性预测值：95.4%（624/654）,16,国外文献汇总灵敏度,国外文献汇总特异性,实验效果图,报告单,根据抗原A或/和抗原B孔的反应判断结果: 检测结果为“有反应性”，参照以下标准： 空白对照孔斑点数为0-5个时且
7、（抗原A或抗原B孔的斑点数）-（空白对照孔斑点数）6 空白对照孔斑点数大于6个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）2（空白对照孔斑点数） 如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“无反应性”,实验结果判断,斑点数的意义活动性or潜伏性,多少个斑点是活动性结核？ 结果阳性说明患者结核感染，是潜伏性还是活动性需要结合临床症状。因个体差异，没有具体的斑点数字可以依据。但斑点数越多越倾向于活动性结核,Chee et al Eur J Clin Microbiol Infect Dis (2008)（IF=3.02）,活动性与潜伏性结核感染患者中，T-SPOT.TB斑点数比较,Janssens e
8、t al ERJ (2007)（IF=6.35）,活动性与潜伏性患者中T-SPOT.TB斑点数的比较(TST+和 TST-),斑点数的意义现症感染,之前得过结核治愈了，T-SPOT结果如何？ T-SPOT检测的是现症感染。如果彻底治愈，体内无结核分枝杆菌，则结果阴性；如果结果是阳性，则说明患者体内还存在结核分枝杆菌，还在结核感染中 陈旧性结核体内会存在记忆T细胞，但记忆T细胞在全血中的数量非常少，而且抗原再次激活孵育时间远远超过24h，不会因为记忆细胞的存在而产生斑点 文献显示，大概只有38%左右的活动性结核患者经过治疗，T-SPOT结果会转阴 Chee et al. , AJRCCM (20
9、06)（IF=11.04）,Ribeiro S, Dooley K, et al. BMC Infect Dis, 2009 （IF=3.02）,方法：在肺结核治疗中，用T-SPOT.TB方法评估治疗效果。在治疗开始前，治疗16周和24周后，分别计数ESAT-6和CFP-10刺激产生的斑点数,图1. 所有研究对象ESAT-6, CFP-10和总RD1在治疗前，16周后和24周后的平均斑点数（n=58）,在24周完整疗程后，ESAT-6, CFP-10和总RD1产生的平均SFCs分别从42.7, 41.2和83.8降到23.3, 23.2和46.5 ，有显著性差异,结论：T-SPOT.TB试验中
10、检测的由RD1特异T细胞产生的-干扰素与肺结核患者在治疗中的结核杆菌量直接相关,斑点数的意义治疗前后变化,注意事项,采血量：6-10ml 采血管：肝素抗凝 样本保存：当天送样，常温运输 注意：PET-CT与输血,方法学优点,特异性95%左右，不受卡介苗（BCG）接种与环境分枝杆菌影响 灵敏度95%左右，几乎不受个体免疫功能低下影响 快速，24小时报告结果 国内外指南推荐，多篇文献数据支持 斑点数意义：斑点越多越倾向活动性结核、现症感染、能反应疗效 送样的注意事项,方法学缺点,不能够提示临床患者的病变部位，需要结合临床的判断 目前还不能够根据斑点数量的多少来判断患者是活动性结核病或是潜伏感染者,
11、内容,结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享,肺外结核,结核分枝杆菌能侵染全身大部分器官，其中有20%发生在肺外,临床应用,临床应用,国内外文献举例,T-SPOT.TB的灵敏度为94.7%(71/75)，肺疾病组和肺外疾病组中分别为95.6%和93.3%，特异性为84.1%(90/107)，肺疾病组和肺外疾病组中分别为69.2%和88.9%。 冯云, 张文宏等. PLOS ONE, 2012（IF=3.73） 北京协和医院感染内科2004年至2010年收治的997例不明原因发热患者的病因分析显示，感染性疾病一直是最主要的病因，占479例(48.0%
12、)，其中结核病占45.3%(217/479) 侍效春, 刘晓清等. Chin Med J, 2013（IF=0.901）,国内外文献举例,在84例CD或ITB患者中，T-SPOT是诊断ITB一个很好的指标，其灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别是84.2%、75.4%、50.0%和94.2%。 李玥, 钱家鸣等. J Crohns Colitis, 2012（IF=2.566） 在60 例CD 以及34 例ITB 患者中，T-SPOT.TB 和PCR 方法的鉴别诊断效能： 雷媛, 夏冰. Journal of Digestive Diseases, 2013（IF=1.853）,国内外文
13、献举例,293例怀疑结核病的非洲儿童，T-SPOT在年龄小于3岁、HIV感染和营养不良的儿童中灵敏度分别是85%、73%和78%。如果结合TST的结果，T-SPOT的灵敏度达到91% Liebeschuetz S, et al. Lancet, 2004（IF=39.06） 在77名结核病和51名健康儿童中，T-SPOT灵敏度为89.2%，特异性为94.1%，明显高于TST（灵敏度77.0%，特异性70.6%），卡介苗是否接种对结果没有显著影响。 孙琳, 申阿东等. Chin Med J, 2010（IF=0.901）,消化科-国内外指南,IBD诊断：在结核高流行区域要排除肠结核，方法包括PP
14、D和-干扰素测定（T-SPOT.TB试验） CD排除肠结核的相关检查：胸部X线片，PPD试验，有条件时可行IFN-释放试验（T-SPOT.TB试验）,World Gastroenterology Organization Practice Guidelines for the Diagnosis and Management of IBD in 2010 世界胃肠病学组织（WGO），2010,2012年炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2012广州） 消化病学分会炎症性肠病学组，2012,依那西普治疗类风湿关节炎和强直性脊柱炎的专家建议 中华内科杂志2010年6月第49卷第6期 英夫利西单抗治疗
15、类风湿关节炎和强直性脊柱炎的参考意见 中华内科杂志2012年12月第51卷第12期,生物制剂使用前，为排除活动性结核病(包括肺结核和肺外结核)及结核潜伏感染者。可用的辅助诊断方法可考虑用结核抗原特异性IFN-释放试验(IGRA)。其中以T-SPOT敏感性(88)和特异性(82)最高。对T-SPOT阳性者，高度怀疑结核感染的可能，应予抗结核治疗。,风湿科-国内外指南,内容,结核病基础概念 T-SPOT.TB 产品知识 T-SPOT.TB 临床应用 病例分享,病例-上海华山医院感染科,患者，女，21岁 突发右侧眼睑下垂，胸片发现两肺多发占位 既往体健 肺科医院诊断：结核 但患者无发热、纳差、盗汗、消瘦等症状,会诊,T-SPOT.TB：阴性 血隐球菌乳胶凝集试验：1:640,诊断：隐球菌肺炎 治疗：两性霉素B5-FC,NC,PC,B,A,抗真菌治疗前后对照,感谢聆听,
