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1、.,1,激光角膜共焦显微镜,.,2,角膜的基本解剖结构,上皮细胞层 前弹力层 基质层 后弹力层 内皮细胞层,.,3,.,4,.,5,激光共焦显微镜的原理,光源为波长670 nm的二极管激光源 激光束聚焦在角膜焦平面，通过振荡镜周期性的移动,连续扫描获得角膜各层二维图像。 光敏探测器可以测到每一点的光反射强度,接收焦平面上的反射光及其周围的散射光。 共焦平面可以通过焦平面调解环进行手动调解,因此可获得角膜各个层面的图像,一系列不同共焦平面的图像组成了三维图像。,.,6,激光发生器,影像探测器,针孔样结构,分光镜,聚光镜,焦平面,Courtesy of J. Flanagan PhD, MCOpt
2、,670 nm,共焦激光技术,.,7,技术参数,光学原理：激光共焦纤维扫描技术 激光光源：670nm 水平分辨率：1um 纵向分辨率：1um 观测范围：400um*400um 放大倍率：800 x 扫描深度：1500um,.,8,在角膜病诊断中应用的特点 活体组织切片 定性与定量分析 无创伤性 动态观察,.,9,0 m,10 m,30 m,40 m,62 m,100 m,300 m,572 m,.,10,检 查 窗口,.,11,HRTII角膜激光共焦显微镜,上皮细胞 - 30 m 基质 - 300 m 内皮细胞 570 m,.,12,四种检查模式,.,13,50 m,Section模式：可获取
3、角膜不同深度的地形图,10 m,Tiefe:,30 m,40 m,62 m,100 m,300 m,572 m,0 m,.,14,Sequence模式：同一焦平面动态扫描,同一焦平面动态连续记录图像 10幅/秒,.,15,Volumn模式：序列扫描图像,沿Z轴向后连续动态扫描，每幅图像间隔2um，共连续向后扫描40幅图像，深度80m,.,16,独有的纵向断层扫描,.,17,角膜内皮细胞计数功能,.,18,临床应用,.,19,药物毒性眼表病变,.,20,42岁男性 左眼“霰粒肿”手术后长期频点各种抗生素滴眼液3月余 左眼红痛、流泪2月,.,21,.,22,治疗1月余,.,23,棘阿米巴性角膜炎,
4、.,24,感染源：棘阿米巴原虫 病理： 病变早期累及上皮，成假树枝状上皮混浊。 病灶反复破溃和愈合，渐向基质深层发展，有大小不等斑片状或盘状基质混浊。 晚期可发生溃疡穿孔。 诊断：角膜刮片后培养找到阿米巴原虫； 共焦显微镜阿米巴包囊,.,25,06-08-30,06-08-30,病例1 患者女，19岁，学生. 过夜配戴OK镜后出现左眼 红、疼痛、视力下降1月,deth 22m,棘阿米巴性角膜炎,包囊,.,26,病例2 患者女, 22岁，学生. 配戴隐形眼镜后右眼红， 畏光，视力下降1月,06-11-10,06-11-10,deth 44m,滋养体,.,27,06-09-18,06-09-18,
5、deth 117m,病例3 患者女，19岁，学生. 过夜配戴OK镜后左眼红、 疼痛、视力下降1月,滋养体,.,28,.,29,.,30,病变角膜组织切片内可见棘阿米巴包囊(箭头) ，PAS 染色40,.,31,角膜基质层出现断裂，表示扫描区位于溃疡灶内，溃疡边缘可见有细小圆形阿米巴包囊结构，包囊中心可见白色高反光区。,.,32,阿米巴性角膜炎的微囊,离体组织学检查 (光学显微镜),活体检查 (HRT 3),.,33,单纯疱疹病毒性角膜炎,.,34,树枝状角膜炎,可为单发或多发，组织学上的上皮损害表现为沿树枝状走行曲的细胞丧失。 单个损害可扩大，或邻近的损害融合成大的病灶，形态不规则，呈“地图状
6、”损害， 组织学上“地图状”损害可累及基底层上皮细胞。 反复感染可累及角膜深层。 角膜上皮下感觉神经丛及上皮内神经末梢受损，从而出现角膜知觉减退。,.,35,.,36,盘状角膜炎,可在上皮感染的同时或之后发生，为一种亚急性或慢性坏死性炎症。 轻型病例角膜混浊可完全吸收，长期或复发性病例，基质炎症由前弹力层扩展至深层基质。 病变早期表现为板层水肿，细胞内和细胞间有液体积聚 随着炎症发展，板层可发生断裂，白细胞从角膜缘倾入病灶， 晚期板层破坏严重，见大量巨噬细胞，血管侵入坏死灶，出现炎性肉芽肿性病变。 最终出现不规则胶原沉积。,.,37,共焦显微镜下见，前弹力层局部出现皱褶，上皮下角膜神经穿过皱褶
7、处见皱褶甚至断裂。,.,38,患者，XXX，女，既往患双眼病毒性角膜炎史三年，三年来双眼反复发作，来我院行共焦显微镜检查示，双眼角膜上皮下神经广泛断裂，局部扭曲。,.,39,真菌性角膜炎,.,40,病因：致病真菌直接侵入角膜感染所致。多见于农业性外伤（植物擦伤）或剔除泥土、砂石等角膜异物后。 感染源：常见为曲霉菌、镰刀菌、白色念珠 菌、头孢霉菌、酵母菌。,.,41,病理：,早期角膜基质有脓疡形成，周围基质有卫星状浸润坏死灶，内有破碎的板层和中性粒细胞浸润，坏死灶内很少见完整的霉菌，但周围基质内却有大量菌丝。 随着病情进展，临近脓疡趋于愈合，坏死物质连同表面组织脱落形成溃疡，坏死程度依霉菌毒力、
8、抗原性、菌株种类而异。 部分霉菌可穿过后弹力层，形成角膜穿孔。 适当的抗霉菌治疗可使溃疡愈合而留有白斑， 若发生穿孔，常形成粘连性角膜白斑。,.,42,诊断： 临床表现 坏死组织真菌培养 坏死组织涂片检查：找到真菌菌丝 角膜共焦显微镜检查：活体直接找到菌丝。,.,43,.,44,.,45,角膜浅基质层基质紊乱，可见大量菌丝分布，基质层结构破坏，散在分布炎性细胞。,.,46,予全身及局部抗真菌治疗一周后复查共焦显微镜，可见菌丝有明显减少。,.,47,患者，XXX，因“左眼眼痛、畏光、视物不见两月”，外院诊断“真菌性角膜炎”，予抗真菌治疗后症状好转，但视力无明显提高。入院行角膜共焦显微镜检查可见基
9、质有高反光区域，仅少量短小菌丝结构，但可见大量树突状细胞散在分布于基质层内。,.,48,真菌性角膜炎,.,49,颗粒状角膜营养不良,.,50,组织病理学变化：角膜上皮变薄，前弹力层破坏，实质浅层细胞内外有淡嗜伊红染色颗粒状物，从实质层经过前弹力层破损处进入上皮层内。,.,51,.,52,.,53,上皮和前弹力层尚完整，基底细胞失去极化，上皮下有颗粒物质沉着，前弹力层消失。实质层内亦有颗粒或面包屑样物质沉着，且部分融合成团块状。,.,54,.,55,.,56,角膜上皮细胞呈局限性蜂窝状改变，细胞反光增强，上皮层和基质层可见大量强反光区域，病变局限，与正常组织分界清晰。,.,57,Fuch角膜内皮
10、营养不良,.,58,病例 患者 女 47岁 主诉 双眼视物模糊3年 否认家族史 查体 视力 OD 0.3 OS 0.3 双角膜轻度水肿，后弹力层可见角膜 小滴，中央角膜较多 诊断 Fuch内皮营养不良,.,59,OS,基质层,后弹力层,角膜小滴,OD,内皮细胞,.,60,内皮层可见多量角膜小滴,其间有增大的 内皮细胞,增厚的后弹力层,内皮层,.,61,Fuchs 营养不良,角膜小滴 cornea guttata,.,62,N=272 mm-2,Keratocytes,Endothelium,N= 682 mm-2,Basal cells,Wing cells,Superficial cells
11、,角 膜 移 植,N=810 mm-2,N=11102 mm-2,N=6540 mm-2,N=5003 mm-2,50 m,Bowman membran,02.08.2000,Pat.: w., 57J.,.,63,LASIK术后,.,64,患者女岁 双眼LASIK术后 检查：角膜瓣下大小不等颗粒样混浊,LASIK术后角膜瓣下混浊,OD,OS,06-10-10,06-10-10,.,65,基质层,基质层,基质层内大小不等高密度颗粒,异常神经结构,.,66,LASIK术后6个月的基质. post-op,深度: 150 m, LASIK 切割带 碎片, 新神经, 活性角膜细胞,50 m,50 m,
12、50 m,.,67,患者，XX，因“双眼刺痛、畏光一年余”就诊，裂隙灯检查示角膜缘可见沟状溃疡，深达角膜厚度的1/2。共焦显微镜检查角膜缘溃疡结构，见角膜缘基质结构紊乱，有新生血管长入，周围分布大量树突状细胞。,边缘性角膜溃疡,.,68,患者，XX，男，14岁，因“双眼红、痒一周”于2007年4月就诊，为过敏体质，裂隙灯见结膜充血水肿，角膜缘毛细血管网充盈，睑结膜面呈铺路石状改变，诊断为“双眼春季卡他性结膜炎”。,春季卡他性结膜炎,.,69,共焦显微镜检查，发现角膜表层及上皮层可见大量树突状细胞，以角膜缘最集中。角膜缘结构紊乱，局部可见高反光混浊区。,.,70,共焦激光角膜显微镜优势,角膜活体
13、组织学检查，精确显示角膜各层结构 分辨率高至 1 m，800 x放大倍率 多种图像获取模式 单一图像 z-轴向后40幅动态图像连续扫描，每幅图像间隔1.5 m 同一焦平面动态连续记录图像 10幅/秒 角膜厚度测量 独有活体角膜断层观察 自动图像分析和细胞计数 水肿情况依然可以观察角膜,.,71,应用,临床诊疗 各种感染性角膜病的诊断 角膜变性性疾病的诊断 泪膜异常性疾病的诊断 免疫相关性角膜疾病的诊断 各类角膜手术术后随访 各种角膜疾病治疗随访,基础研究 活体细胞水平研究角膜生理病理变化及影响因素 各种眼表泪液性疾病的发病机制 活体细胞水平研究各类角膜手术创口愈合机制及影响因素 免疫相关性及其
14、他各类角膜疾病的机制研究,.,72,角膜内皮细胞检查,.,73,正常人的角膜内皮细胞,为一单层扁平细胞，呈六边形镶嵌结构，大小均匀、排列整齐。 角膜内皮细胞密度随年龄增高而逐渐下降，110岁时最高，2050岁时相对稳定，60岁以后明显下降。正常人30岁前，平均角膜内皮细胞密度为30004000个mm2 维持正常角膜内皮屏障功能所需最低临界密度700个mm2,.,74,.,75,角膜内皮镜检查,利用镜面反射原理，由于角膜内皮细胞和房水屈光指数不同，二者之间形成了界面，当一窄光术聚焦在这一界面上时引起反射，内皮细胞各部分反射程度的差异显示出细胞的边界。,主要是观察角膜中央部分的内皮细胞，一般是分析
15、计算内皮细胞的形态、大小、密度及计算机分析，可以深入地了解内皮细胞的形态改变情况,.,76,临床应用,（1）对长期配戴角膜接触镜的人可以了解其角膜内皮状况。 （2）可用于评价角膜材料保存情况。 （3）在内眼手术前用角膜内皮镜可评价手术的可行性。,.,77,观察指标,1、内皮细胞形态：六边形，大小相等，均匀规则，边界清晰 2、内皮细胞边界：正常呈清晰的暗的直线，有时可见几个细胞出现双边，这可能是光学上的阴影现象 3、暗结构和角膜后表面形态：暗区表示该处的内皮细胞已不出现。较大的暗区多发生于角膜内皮病变 4、角膜内皮后表面：正常时呈直线型，异常时呈波浪或锯齿型。,.,78,normal,.,79,离体新鲜猪眼超乳术后1h，内皮水肿变形，局部内皮缺损，呈黑区改变。,.,80,Fuchs角膜营养不良,后弹力层见不规则高反光混浊区，内皮表面可见散在小凹，内皮细胞水肿，边界不规则，细胞核可见。局部可出现细胞凋亡，呈“黑洞”结构。,.,81,XX，女，患有“马凡综合征”，来我院行晶体摘除手术。术前查共焦显微镜显示角膜内皮细胞广泛水肿，细胞核增大、反光增强，部分区域无明显内皮细胞结构。,/10/29,.,82,
