《{医疗药品管理}液相色谱串联质谱法在药物动力学和代谢研究中的应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《{医疗药品管理}液相色谱串联质谱法在药物动力学和代谢研究中的应用（59页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、创新药物及其代谢物浓度测定方法的建立及应注意的问题,Unknown User:,钟大放 ,生物样品中药物及代谢物浓度测定,临床前 吸收试验 组织分布试验 代谢 排泄 毒代 临床 临床药动学 制剂生物利用度及生物等效性,生物样品中代谢物浓度测定,代谢物, 影响药物的安全性和有效性 药动学研究 测定母体药物和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定母体药物和代谢物的浓度,等效性评价时以母体药物浓度作为主要判断指标 主要代谢物，活性不清楚 药动学研究 测定母体药物和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定母体药物浓度,生物样品中代谢物浓度测定,母体药物体液浓度很低,代谢物为体内的主要存在形式 药动学研究 测
2、定母体药物和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定代谢物的浓度 前体药物 药动学研究 测定母体药物(如果能测到)和代谢物浓度 制剂生物等效性评价 测定代谢物的浓度,生物样品中药物浓度测定方法的建立和确证,基本概念 生物样品分析方法的建立 生物样品分析方法的确证 生物样品分析方法的应用 分析数据的记录与报告提交,基本概念,生物样品分析方法的重要性 临床药理学研究、药代动力学试验、生物等效性试验、药物组织分布试验、排泄试验：数量和质量 血浆药物浓度 药物在体内达到平衡状态时，血浆中药物浓度一般与药物在作用部位的浓度密切相关：药效和毒性 分析方法 色谱学方法、免疫学方法、微生物学方法,基本概念,生物介
3、质 生物来源物质 能够以可重复方式采集和处理 包括全血、血浆、血清、尿、粪、各种组织,基本概念,分析批 包括待测样品、适当数目的标准样品和质控样品的完整系列：相同实验条件和时间区段 一天内可以完成几个分析批 一个分析批也可以持续几天完成 通常一天完成一个分析批,基本概念,准确度 在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度 精密度 在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测量值的分散程度,基本概念,选择性 分析方法测量和区分共存组分中分析物的能力 这些共存组分包括代谢物、杂质、分解产物、介质组分等 基质效应 由样品中存在的干扰物质，对响应造成的直接或间接的影响,基本概念,重现性 分析
4、方法在相同条件下，间隔一段短时间后测定结果的分散程度 不同实验室间采用同一分析方法，测定结果的分散程度,基本概念,标准样品 在生物介质中加入已知量分析物配制的样品 用于建立标准曲线、计算质控样品和未知样品中分析物浓度 质控样品（QC样品） 在生物介质中加入已知量分析物配制的样品 用于监测分析方法的重现性、评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性,基本概念,标准曲线 实验响应值与分析物浓度间的关系 应采用适当的加权和统计检验，用简单的数学模型来最适当地描述 应以各浓度点回归计算结果的百分偏差最小为基础,基本概念,定量范围 包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的连续的浓度范围 采
5、用浓度-响应关系能进行可靠的、可重现的定量 其准确度和精密度可以接受,Optimization,Validation,Implementation,Development,Revalidation,Pre-Validation,生物样品分析方法的建立,生物样品分析方法的建立,生物样品分析常用方法 色谱法 HPLC, GC, LC/MS, LC/MS/MS, GC/MS 微生物法 免疫分析法 选择依据 药物的化学结构、待测物浓度范围、实验室条件,生物样品分析方法的建立,（1）查阅相关文献 是否有分析方法可供借鉴 尽可能获知分析物待测浓度范围 Journal of Chromatography B
6、 Rapid Communications in Mass Spectrometry Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Biomedical Chromatography 药学学报，药物分析杂志，中国临床药理学杂志,生物样品分析方法的建立,（2）根据药物的化学结构 分子的极性、酸碱性、稳定性 建立色谱分析方法的可能性 使用哪种检测器 质谱、紫外、荧光、电化学,生物样品分析方法的建立,（3）样品的稳定性 采集哪种生物样品：血浆、血清、全血、尿、组织 储存条件 20C：大部分药物 80C：阿莫西林等 加稳定剂：卡托普利等 立即测试：
7、维生素C等,生物样品分析方法的建立,（4）生物样品预处理 液-液提取 液-固提取 沉淀蛋白 在线提取,生物样品分析方法的建立,（5）色谱条件选择 色谱柱 流动相组成 pH值和缓冲盐 流速,生物样品分析方法的建立,（6）内标选择 与待测药物色谱行为相近 与待测药物检测器响应相近 与待测药物提取回收率相近,生物样品分析方法的建立,（7）质谱条件选择 准分子离子和碎片离子 碰撞诱导解离条件 考察生物样品的基质效应 与色谱条件的匹配,生物样品分析方法的建立,（8）各种条件和参数的进一步优化 考察选择性 考察灵敏度 考察线性关系 考察重现性 （9）实际样品预实验 最终确定浓度测定范围,生物样品分析方法的
8、建立,（10）其他因素 血浆蛋白结合 生物样品测试的安全防护,Method Validation,Accuracy,Precision,Limit of Detection,Limit of Quantitation,Linearity and Range,Specificity/Selectivity,System Suitability,Ruggedness/Robustness,生物样品分析方法的确证,分析方法的确证,全面确证 首次建立的生物样品分析方法 增加新的定量组份(如代谢物) 对以前的方法进行较大的改进 如：改变仪器、检测器等,分析方法的确证,部分确证 生物分析方法在实验室间的转
9、移 定量浓度范围改变 生物介质改变 相同生物基质内种属的改变（例如大鼠血浆和小鼠血浆） 同种内生物样品的改变（例如人血浆和人尿） 稀少生物介质 证实复方给药后分析方法的选择性 小幅改变流动相比例和柱温,分析方法的确证,选择性 证明所测定的物质是预期的分析物 内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定 多组分定量分析时应对每一待测物进行考察，以保证它们互相之间不产生干扰 色谱法：考察不同来源（n 6）空白生物样品色谱图，标准生物样品色谱图（注明浓度），实际生物样品色谱图 空白生物样品中干扰物质的响应不超过待测物定量下限时响应的20%,分析方法的确证,标准曲线与定量范围 配制标准曲线时所用生物基质必
10、须与实际研究样品生物基质相同 必须用至少6个非零浓度样品建立标准曲线 根据待测物浓度与响应的相关性，用回归分析法获得标准曲线 计算标准曲线时不包括空白点 标准曲线高、低浓度范围为定量范围 定量范围要能覆盖全部待测浓度，不允许外推,标准曲线与定量范围 在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度 标准曲线上75%的浓度点测定值不能超出真实值的15% （LLOQ浓度点不超出真实值的20%） 相关系数r 0.99,分析方法的确证,分析方法的确证,定量下限 定量下限是标准曲线上的最低浓度点 至少应满足测定35个半衰期的药物浓度，或Cmax的1/101/20时的药物浓度 其准确度应在真实浓度的
11、80120%范围内，RSD应小于20% 其响应应为空白生物基质干扰物响应的5倍 至少应由5个标准样品测试结果证明,分析方法的确证,精密度与准确度 选择3个浓度的质控样品考察方法的精密度和准确度 低浓度选择在定量下限附近， 3 LLOQ 高浓度接近于标准曲线上限浓度，7590% 测定3个分析批，每批每一浓度至少5个样品 精密度：质控样品的批内和批间标准差 RSD 15%，低浓度RSD 20% 准确度：质控样品的相对偏差 允许范围85115%，低浓度80120%,分析方法的确证,样品稳定性 文献中关于分析物稳定性的报道 含药生物样品冷冻储存条件下的稳定性 含药生物样品在室温、冻融条件下的稳定性 样
12、品处理过程中的稳定性 样品处理后在溶液中的稳定性 储备液的稳定性,分析方法的确证,提取回收率 样品提取过程前、后，分析物含量百分比 注意扣除基质效应和体积改变 应考察低、中、高3个浓度的提取回收率 其结果应当基本一致、精密和可重现,分析方法的确证,基质效应 液相色谱-质谱分析时，内源性物质使待测物的离子化效率降低或增强,分析方法的确证,微生物学和免疫学分析 标准曲线是非线性的 采用更多的浓度点建立标准曲线 结果的准确度是关键因素 如果重复测定能改善准确度，则应在方法确证和未知样品测定中采用同样的步骤,分析方法的确证,分析质量保证 标准曲线样品和QC样品分别配制 独立的质量保证人员 未知浓度样品
13、考核 质量检查报告,生物样品分析方法的应用,未知浓度样品的测试 应在生物样品分析方法确证完成之后，开始测试未知浓度的样品 由独立的人员配制不同浓度的标准样品，对分析方法进行考核 每个未知样品一般测定一次，必要时进行复测 生物等效性试验中，来自同一个体的生物样品最好在同一批中测定,生物样品分析方法的应用,未知浓度样品的测试 每个分析批应建立标准曲线，组织分布试验时，可视具体情况而定 随行测定低、中、高3个浓度的QC样品，每个浓度至少双样本，并应均匀分布在未知样品测试顺序中 当一个分析批中未知样品数目较多时，应增加各浓度QC样品数，使QC样品数大于未知样品总数的5%,生物样品分析方法的应用,未知浓
14、度样品的测试 质控样品测定结果的偏差一般应小于15%，低浓度点偏差一般应小于20% 最多允许1/3不在同一浓度的质控样品测定结果超限 如果QC样品测定结果不符合上述要求，则该分析批样品测试结果作废 浓度高于定量上限的样品，应采用相应的空白介质稀释后重新测定；对于浓度低于定量下限的样品，应以零值计算,分析数据的记录与报告提交,基本要素 建立一般性和特殊性的标准操作规程 保存完整的实验记录：分析方法建立、确证和未知样品测试过程中产生的测试原始图谱和数据，包括QC样品测试 提交完成试验工作的相关资料：综合信息、方法建立过程、日常样品分析中的基本资料、其他相关信息,分析数据的记录与报告提交,综合信息
15、项目编号 分析方法编号、分析方法类型、分析方法确证简化的理由 相应的项目计划编号 项目标题,分析数据的记录与报告提交,方法建立过程 分析方法的详细描述：该方法所用对照品（被测药物、代谢物、内标物）的纯度和来源 稳定性实验描述和相关数据 描述考察选择性、准确度、精密度、回收率、定量限、标准曲线的实验，并给出获得的主要数据 列出批内、批间精密度和准确度的详细结果 根据具体情况，提供代表性的色谱图、质谱图，并加以说明,分析数据的记录与报告提交,在日常样品分析中的基本资料（一） 所用对照品（被测药物、代谢物、内标物）的纯度和来源 样品处理和保存的情况：样品编号、采集日期、运输前的保存、运输情况、分析前
16、的保存 信息应包括日期、时间、样品所处条件，以及任何偏离试验计划的情况,分析数据的记录与报告提交,在日常样品分析中的基本资料（二） 样品分析批的综合信息：分析批编号、分析日期、分析方法、分析人员、开始和结束时间、主要设备和材料的变化，以及任何可能偏离分析方法建立时的情况 用于计算结果的回归方程，分析样品时标准曲线列表 各分析批QC样品测定结果综合列表 计算批内和批间精密度、准确度 各分析批包括的未知样品浓度计算结果,分析数据的记录与报告提交,在日常样品分析中的基本资料（三） 提交20%受试样品测试的色谱图复印件，包括相应分析批的标准曲线和QC样品的色谱图复印件 注明缺失样品的原因、重复测试的结果 对舍弃任何分析数据和选择所报告的数据说明理由,分析数据的记录与报告提交,其他相关信息 缩略语列表 参考文献列表 标准操作规程列表,参考文献,国家药典委员会：生物样品分析方法的基本要求。见：中华人民共和国药典，2005年版二部附录 US FDA: Guidance for Industry:
