《加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定课件》由会员分享,可在线阅读,更多相关《加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定课件(27页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、加味香连丸的定性鉴别及 黄连生物碱的含量测定,一、仪器与药品,1)层析缸 2)三用紫外分析仪 3)喷雾瓶 4)吹风机 5)紫外分光光度计 6)小层析柱:高13cm,内径8mm,2个 7)中性Al2O3(150200目) 8)滴管 9)加味香连丸样品 10)盐酸小檗碱对照品、黄连、木香对照药材 11)95%乙醇,1、定量用样品的净化 1)定容:将索氏提取样品定容到25mL。 2)净化 A、装柱:取2个高13cm、内径8mm的Al2O3柱,平行装柱。分别垫上少许棉花,装入中性氧化铝,高度1.5cm左右。1个作空白,另1个加入样品。 B、加样与洗脱:将两根小柱下分别接上10mL容量瓶,样品用小柱中精
2、密加入样品液0.5mL,待样品完全被填料吸收后,加入95%EtOH至洗脱完全。空白用小柱中的填料直接用95%乙醇平行洗脱。接近10mL时停止洗脱,分别定容到10mL。 C、含量测定:采用外标一点法于350nm 测定含量 供试品紫外测定:空白采用自制空白 对照品紫外测定:空白采用95%乙醇,对照品浓度:0.06mg/mL D、计算(100g干品中含有多少克总生物碱),二、实验步骤,A供/A标 = C供/C标,1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别 1)黄连的鉴别 取本品60mg,研细,加乙醇5ml,置水浴中加热回流15分钟,滤过,滤液补加乙醇使成5ml,作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg,同
3、法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每1ml含0.04mg的溶液。用点样用毛细管分别取1.5cm左右,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:氯仿:甲醇:氨水:二乙胺(8:2:2:1:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同的一个黄色荧光斑点。,二、实验步骤,1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别 2)木香的鉴别 取本品0.5g,研细,加乙醚5ml,放置2小时,时时振摇,滤过,滤液挥去乙醚,残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取木香对照药材
4、0.2g,加乙醚5ml,同法制成对照药材溶液,用点样用毛细管分别取1.5cm左右,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷:丙酮(10:3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105烘约5分钟。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的紫红色至蓝紫色斑点。,二、实验步骤,例,光度计模式操作教程,开机自检通过后,经过15分钟的预热,系统自动进入主菜单。,波长:546.0nm 09:21:19,取消,下翻,选取,D2,W,系统主菜单,光度计模式,定量测量,光谱扫描,动力学测量,DNA/蛋白质测量,M,APADA,测试波长,当前时间,氘灯点亮显示,钨灯点亮显示,波长:546.
5、0nm 09:21:19,取消,下翻,选取,D2,W,系统主菜单,光度计模式,定量测量,光谱扫描,动力学测量,DNA/蛋白质测量,M,APADA,点击“选取”功能键,或点 ,进入光度计模式。,ENTER,波长:546.0nm I: 19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 A b s,首先选择测量所需要的波长。,点 进入。,GOTO,波长:546.0nm I: 19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 A b s,请输入波长:546.0_,使用数字键和小数点输入所需要的波长。,波长:546.0nm I: 19669 09:21:1
6、9,D2,W,0. 0 0 0 A b s,请输入波长:350.0_,输入的测量波长,波长:350.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 A b s,波长将自动调节到所设置的波长,系统将自动校零。,波长已调整,波长:350.0nm I: 19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,样品浓度单位设定键,0. 0 0 0 A b s,波长:350.0nm I :19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入含量单位:,mg/L,使用四个方向键来选择浓度单位,选择完毕后,点
7、 确认。,ENTER,波长:450.0nm I: 19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 A b s,设定测量模式:吸光度模式、透过率模式、浓度模式。,点击“模式”功能键进入。,“模式”功能键,吸光度模式:显示样品的吸光度; 透过率模式:显示样品的透过率; 含量模式: 根据系数法C=KA,直接显示 试样浓度。,波长:350.0nm I: 19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 A b s,请输入模式:,吸光度,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0
8、m g / L,模式已变为浓度模式,浓度测定的原理是公式C=KA。 C浓度 A吸光度 K吸收系数 K值设定有两种方法:,一是选择“因子”功能键直接输入K值; 二是选择“标样测量”,测定吸光度,输入浓度,求出K值,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,选择“因子”模式,直接输入K值。,吸收系数设定键,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入F因子:1.000_,使用数字键和小数点输入所需要的K值。,K值来源:以前实验所做、查询相关文献
9、。,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入F因子:3.000_,输入完毕后,点击 进行确认。,ENTER,输入的吸收系数K,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.000,设定的吸收系数K,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.000,测量浓度已知样品的浓度,输入浓度,由机器自动求出K值。,选择“标样测量”功能
10、键。,进入浓度法求K值,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入标样含量:1.000_,将标样放入光路中,使用数字键和小数点输入标样的浓度。,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入标样含量:4.000_,输入完毕后,点击 进行确认。,ENTER,输入的标样浓度,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,4. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.258,计算出的吸收系数K,标样浓度 4.000,波长:450.0nm I :19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,4. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.258,输入的标样浓度,标样浓度 4.000,