《加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定课件（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、加味香连丸的定性鉴别及 黄连生物碱的含量测定,一、仪器与药品,1）层析缸 2）三用紫外分析仪 3）喷雾瓶 4）吹风机 5）紫外分光光度计 6）小层析柱：高13cm,内径8mm，2个 7）中性Al2O3(150200目) 8）滴管 9）加味香连丸样品 10）盐酸小檗碱对照品、黄连、木香对照药材 11）95%乙醇,1、定量用样品的净化 1）定容：将索氏提取样品定容到25mL。 2）净化 A、装柱：取2个高13cm、内径8mm的Al2O3柱，平行装柱。分别垫上少许棉花，装入中性氧化铝，高度1.5cm左右。1个作空白，另1个加入样品。 B、加样与洗脱：将两根小柱下分别接上10mL容量瓶，样品用小柱中精
2、密加入样品液0.5mL，待样品完全被填料吸收后，加入95%EtOH至洗脱完全。空白用小柱中的填料直接用95%乙醇平行洗脱。接近10mL时停止洗脱，分别定容到10mL。 C、含量测定：采用外标一点法于350nm 测定含量 供试品紫外测定：空白采用自制空白 对照品紫外测定：空白采用95%乙醇，对照品浓度：0.06mg/mL D、计算（100g干品中含有多少克总生物碱）,二、实验步骤,A供/A标 = C供/C标,1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别 1）黄连的鉴别 取本品60mg，研细，加乙醇5ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液补加乙醇使成5ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg，同
3、法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.04mg的溶液。用点样用毛细管分别取1.5cm左右，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（8：2：2：1：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。,二、实验步骤,1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别 2）木香的鉴别 取本品0.5g，研细，加乙醚5ml，放置2小时，时时振摇，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材
4、0.2g，加乙醚5ml，同法制成对照药材溶液，用点样用毛细管分别取1.5cm左右，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：丙酮（10：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色至蓝紫色斑点。,二、实验步骤,例,光度计模式操作教程,开机自检通过后，经过15分钟的预热，系统自动进入主菜单。,波长：546.0nm 09：21：19,取消,下翻,选取,D2,W,系统主菜单,光度计模式,定量测量,光谱扫描,动力学测量,DNA/蛋白质测量,M,APADA,测试波长,当前时间,氘灯点亮显示,钨灯点亮显示,波长：546.
5、0nm 09:21:19,取消,下翻,选取,D2,W,系统主菜单,光度计模式,定量测量,光谱扫描,动力学测量,DNA/蛋白质测量,M,APADA,点击“选取”功能键，或点 ，进入光度计模式。,ENTER,波长：546.0nm I: 19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 A b s,首先选择测量所需要的波长。,点 进入。,GOTO,波长：546.0nm I: 19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 A b s,请输入波长：546.0_,使用数字键和小数点输入所需要的波长。,波长：546.0nm I: 19669 09：21：1
6、9,D2,W,0. 0 0 0 A b s,请输入波长：350.0_,输入的测量波长,波长：350.0nm I ：19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 A b s,波长将自动调节到所设置的波长，系统将自动校零。,波长已调整,波长：350.0nm I: 19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,样品浓度单位设定键,0. 0 0 0 A b s,波长：350.0nm I ：19669 09：21：19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入含量单位：,mg/L,使用四个方向键来选择浓度单位，选择完毕后，点
7、 确认。,ENTER,波长：450.0nm I: 19669 09:21:19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 A b s,设定测量模式：吸光度模式、透过率模式、浓度模式。,点击“模式”功能键进入。,“模式”功能键,吸光度模式：显示样品的吸光度； 透过率模式：显示样品的透过率； 含量模式： 根据系数法C=KA，直接显示 试样浓度。,波长：350.0nm I: 19669 09:21:19,D2,W,0. 0 0 0 A b s,请输入模式：,吸光度,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0
8、m g / L,模式已变为浓度模式,浓度测定的原理是公式C=KA。 C浓度 A吸光度 K吸收系数 K值设定有两种方法：,一是选择“因子”功能键直接输入K值； 二是选择“标样测量”，测定吸光度，输入浓度，求出K值,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,选择“因子”模式，直接输入K值。,吸收系数设定键,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入F因子：1.000_,使用数字键和小数点输入所需要的K值。,K值来源：以前实验所做、查询相关文献
9、。,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入F因子：3.000_,输入完毕后，点击 进行确认。,ENTER,输入的吸收系数K,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.000,设定的吸收系数K,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.000,测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出K值。,选择“标样测量”功能
10、键。,进入浓度法求K值,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入标样含量：1.000_,将标样放入光路中，使用数字键和小数点输入标样的浓度。,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,D2,W,0. 0 0 0 m g / L,请输入标样含量：4.000_,输入完毕后，点击 进行确认。,ENTER,输入的标样浓度,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,4. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.258,计算出的吸收系数K,标样浓度 4.000,波长：450.0nm I ：19669 09：21：19,设置单位,模式,因子,标样测量,D2,W,4. 0 0 0 m g / L,F 因子 3.258,输入的标样浓度,标样浓度 4.000,
