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1、SN/T 湖南省市场监督管理局 发布2020-实施2020-发布黄曲霉毒素B1快速检测 超导量点免疫荧光法Detection of aflatoxin B1 in feedRapid quantitative method of superconducting dots immunofluorescence technique （征求意见稿）DB43/T 2020DB43湖南省地方标准ICS I DB43/T 2020目 次前言1 范围2 规范性引用文件3 原理4 试剂与材料5 仪器与设备6 样品制备7 样品测定8 结果表述9 重复性附录A（规范性附录）超导量点免疫荧光快速定量检测卡性能评价要
2、求 前 言本标准按GB/T 1.12009 给出的规则起草。请注意本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省畜牧水产事务中心提出并归口。本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所、湖南九鼎科技（集团）有限公司、湖南省饲料工业协会。本标准主要起草人：黄勇、李裕、李艳平、刘芬、张敏、雷加、周灿、曹霞。IXX/T XXXXXXXXX饲料中黄曲霉毒素B1的测定 超导量点免疫荧光快速定量法1 范围本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1的超导量点免疫荧光快速定量法的原理、试剂、材料、仪器设备、样品制备、样品测定与结果表述。本标准适用于我省植物性饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中
3、黄曲霉毒素B1的快速检测。本方法检出限为0.5 g/kg。 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料 采样GB/T 20195 动物饲料 试样的制备3 原理本方法基于超导量点标记的抗原抗体反应，采用荧光侧向免疫层析方法学原理。试样提取液中的黄曲霉毒素B1与检测卡上标记的抗体相结合并发出荧光，荧光强度与试样中黄曲霉毒素B1含量相关。层析结束后，用免疫荧光分析仪测定检测卡上的检测线和控制
4、线的荧光强度，仪器根据内置标准曲线自动算出试样中黄曲霉毒素B1的含量。4 试剂与材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中三级水的要求。4.1 稀释缓冲液：由超导量点免疫荧光定量检测卡配套提供，或根据产品使用说明书配制。4.2 提取液：量取550mL甲醇加入450mL水中，混匀。5 仪器与设备5.1 天平：分度值0.01g。5.2 粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目筛。5.3 离心机：转速不低于4000 r/min。5.4 涡旋振荡器。5.5 免疫荧光分析仪：可测定并显示超导量点免疫荧光定量检测卡的测定结果。5.6 黄曲霉毒素B1超导量点免疫荧光定量检测卡：常
5、温避光储存，具体储存条件参照使用说明；技术要求见附录A。5.7 滤纸：采用中速定量滤纸。5.8 计时器。6 样品制备6.1采样按GB/T 14699.1的规定执行。6.2样品处理6.2.1 取有代表性的样品约500 g，用粉碎机（5.2）粉碎至全部通过20目筛，混匀。6.2.2 称取5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入25.0 mL试样提取液（4.2），用涡旋振荡器（5.4）振荡10 min；静置后用滤纸（5.7）过滤，或取1.0 mL1.5 mL混合液于离心管中，经离心机（5.3）以4000 r/min离心35 min。取滤液或离心后的上清液100 L于另一洁净离心管中
6、，加入400 L稀释缓冲液（4.1），充分混匀待测。注：不同厂家黄曲霉毒素B1超导量点免疫荧光定量检测卡所用的样品处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定的方法进行操作。7 样品测定7.1 开启免疫荧光分析仪（5.5）。7.2 将超导量点免疫荧光定量检测卡（5.6）取出，加样孔朝上平放。7.3 准确移取75L待测液（6.2.2），加入检测卡加样孔中。7.4 检测卡加样后，水平静置15 min反应，然后在3 min内将检测卡插入免疫荧光分析仪（5.5），仪器将自动进行检测。7.5 免疫荧光分析仪（5.5）将在13秒内完成数据读取、分析，免疫荧光分析仪自动显示试样中黄曲霉毒素B1的含量并保存检测
7、结果。若免疫荧光分析仪的显示值50 g/kg，需移取100 L 6.2.2中滤液或上清液，加入300 L试样提取液（4.2），充分混匀后取100 L至一洁净的离心管中，加入400 L稀释缓冲液（4.1），充分混匀，按照7.27.5进行测定。注：不同厂家免疫荧光分析仪的使用方法可能有所不同，应按照产品说明书的规定进行操作。8 结果表述试样中黄曲霉毒素B1的含量由免疫荧光分析仪自动计算并显示，单位为微克每千克（g/kg）。9 重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。附 录 A（规范性附录）超导量点免疫荧光快速定量检测卡性能评价要求本附录规定了饲料中黄曲霉毒素B
8、1超导量点免疫荧光快速定量检测卡的技术性能要求，用于对饲料中黄曲霉毒素B1超导量点快速定量检测类产品的技术性能进行验证，以确保其适用于本方法。A.1 准确性评价采用5 g/kg、10 g/kg和20 g/kg 3个浓度水平的黄曲霉毒素B1实物标准样品，每个浓度平行测定不低于6次。计算检测卡检测结果与实物标准样品的相对偏差，3个浓度的相对偏差均应控制在-20%+20%之间。A.2 精密度评价采用10 g/kg黄曲霉毒素B1的实物标准样品，平行测定不低于6次，计算检测卡批内变异系数，变异系数应20%。A.3 批间稳定性评价采用10 g/kg黄曲霉毒素B1的实物标准样品，随机选取至少6个批次产品，每个批次产品测定不低于2次，批内测定取其平均值，计算检测卡批间变异系数，变异系数应20%。A.4 批内稳定性评价采用10 g/kg黄曲霉毒素B1的实物标准样品，随机选取1个批次产品测定，平行测定不低于6次，计算检测卡批内变异系数，变异系数应20%。_3
