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1、Th e stNh a幼o n a lSy m po s一um onNat o r a lM日 !n ale Mat ena! R oes u 晓 5P ocer e d nl g s a nd Ab s t ar o t s 全国第 8 届天然 药 物 资源学术 研讨会 多 。 古人主张陈用的原因是陈则 “ 烈气(挥发油)消散 ” I 2 , 减少毒副作用而增加疗效3 。 橙皮昔是黄酮昔 , 由芸香糖基和橙皮普元组成 , 有文献报道陈皮存放时间越长 , 陈皮内含的芸香糖基和橙皮营元结合生成 的橙皮昔就越多4 l ; 同时也有报道认为 , 陈用对陈皮中黄酮类物质含量的影响并不大5 l 。 结合
2、本实验结果 , 我们认为陈用对三种黄酮类成分无显著影响 。 因陈皮中成分复杂 , 陈用后是否引起其它成分的变化有待 进一步研究 。 参考文献(略) 紫花和白花丹参不同部位有效成分分布规律的研究 梁宗锁 ,2 , 杨东风 ,2 1 . 西北农林科技大学生命科学学院 , 陕西杨 陵71 21 0; 0 2 . 陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心 陕西杨陵 7 12 1 0 0) 摘 要 目的 : 采用指纹图谱和含量分析相结合的方法 , 全面评价紫花和白花丹参不 同部位有效成分的分布差 异 。 方 法 : 采用高效液相 色谱法测定主要脂溶性和水溶性成份含量 , 并以相关系数法评价图谱间相似度 。
3、 结果 : 丹 参脂溶性成分以丹参酮 l l A为主 , 主要分布于根周皮部位 , 其他部位含量较微 , 紫花和白花丹参脂溶性成分的分布 规律相同 , 但部分成分在白花丹参含量较高 。 水溶性成分以丹酚酸B为主 , 主要分布于根韧皮部和木部 , 但叶中丹 参素分布较高 , 花辫和花托中部分成分含量也较高 , 可用于单体化合物的提取和开发 。 两种丹参同一部位水溶性成 分种类相同 , 但在含量上略有差异 。 结论 : 本法较为全面的评价的紫花和白花丹参不同部位有效成分的分布规律 , 为丹参资源的综合开发利用提供了依据 。 关键词药用植物;丹参;分布规律; 指纹图谱 中药丹参为唇形科植物丹参(S
4、a v i l a mi t lio rk rz i a Bg e . )的干燥根及根茎 , 主要含丹参酮类和酚 酸类两大类有效成分 , 有祛疲止痛 , 活血通经 , 清心除烦之功效 。 丹参以根入药 , 文献对丹参有效 成分分布规律的报道多以根部为主 , 何锦钧等 【对丹参整根 、 根外皮 、 根去外韧皮部分 、 根木部等 部位 的丹参酮l l A 和丹酚酸 B 进行了研究 , 结果丹参酮n A主要集中于根周韧皮部位 , 其他部位含 量甚微 , 丹酚酸 B主要分布于根去外韧皮部分 , 木部和外韧皮部位含量也很高 。 曾令杰等2 也认为 丹参酮HA主要集中于根韧皮部中 , 丹酚酸 B 在韧皮部
5、和木部都有分布 , 但木部含量略高 。 李磊3 l 、 邓寒4 等人研究结果也表明丹参酮HA分布以根韧皮部为主 , 丹参素分布在韧皮部和木部都较高 , 但木部含量略高 。 尽管地上部分的研究已有报道 , 但仅局限于茎 、 叶和花中的几种成分 1 3 5 一6 , 研究 不够全面和系统 , 大量的地上部分得不到正确利用 , 造成了资源的极大浪费 。 因而 , 对丹参各类有 效成分分布规律进行一项系统的评价将显得尤为重要 。 本文将分别对丹参叶 、 叶柄 、 茎 、 种子 、 花 瓣 、 花托 、 花轴 、 根木部 、 韧皮部及周皮等1 0个部位的脂溶性和水溶性成分进行研究 , 比较不同 部位有效
6、成分的差异 , 同时比较 白花和紫花丹参的异同 , 为丹参资源的开发和充分利用提供可靠依 据 。 1 材料与方法 1 . 1 仪器与材料 W ae t r s 1525二元高效液相色谱仪 , W ate r s 2996二极管阵列检测器 , W aterS S u n Fie rC18 色谱 巧 e ths a tN io n a lSy m 例招iu m o nN atU a lr Mde沁如alM a枉颐a lR 日鱿泪r以与氏伙默劝叩as 冈A伙山州 s 全 国旅 8 属 天然 布物资娜学术研 讨 会蒸 柱 (2 o5m m x 4 . 6n n u , 5林m) , Em pow e
7、rZ 色谱分析软件(美国 We a t r s 公司) , 优普超纯水机(上海 优普科技公司) 。 色谱级甲醇购 自F i sh er S c i e n t if i c F (a ir l awn , N J , USA) , 磷酸(分析纯)购 自西安试剂厂 , 无水乙醇购 自安特生物化学有限公司(宿州 , 安徽) 。 紫花和 白花丹参于 20 06年6月采 自西北农林科技大学药用植物 园 , 标准品丹参素 、 原儿茶醛 、 丹参酚酸B 、 丹参酮 I 、 二氢丹参酮 I和丹参酮11 A 购 自中国生物制品检定所 。 1 . 2 样品制备 脂溶性成分 : 一年生丹参干燥根 , 粉碎 , 过
8、6 0目筛 , 精确称取.0 2509 , 加入 2 5n i l无水乙醇 , 超声提取 3m 0n i , 提取液过.0 45林m滤膜 , 备用 。 水溶性成分 : 一年生丹参干燥根 , 粉碎 , 过6 0目筛 , 取 .05 0 0 9 , 加入 2 5n i l水 , 9 0 水浴提取 h 3 , 提取液 12仪肠翎p离心1smn i , 取滤液 In i l , 加入 4n i l 无水乙醇 , 静置过夜 , 次日过.0 4 5”m滤 膜 , 备用 。 L 3 色谱 条件 脂溶性成分 : 以A : 甲醇和B : 水为流动相 , 采用二元梯度洗脱 , 梯度程序为 : 0 一2 5 而 n
9、 , 6 0 % 一70% A (v l v ) ; 25 一35而n, 70% 一7 5%A(vV l);35 一4 5而n , 75% 一 90%A(vv /) ; 45 一50而n, 90%A(vv /) ; 55 一 60min , 90% 一 10 0% 。 流速 lmF m ln , 柱温 3 0 , 检测波长2 7 0n n l 。 水溶性成分 : 以A : 甲醇和 B : .00 1%磷酸水溶液(H P = 2 .6) 为流动相 , 采用二元梯度洗脱 , 梯度程序为 : 0 一30而n, 15% 一40% A(vv l) ; 30 一4 0而n, 40% 一55% A(vV l
10、) ; 40 一6 0而 n , 55% 一75% (v v l ) ; 60 一70 n I i n , 75%A(vV l) 。 流速 lm Fm in , 柱温 30C 0 , 检测波长 288nm 。 2 结果与讨论 2 . 1 . 脂溶性成分 2 . 1 . 1 进样精密度实验 进样精密度实验主要考察进样及仪器的精密度 , 取 同一供试品溶液 , 连续进样 5次 , 结果各脂 溶性指纹峰的相对保留时间 (R t)和相对峰面积(Ra ) 的较为一致 , 单峰面积占总峰面积 10%以 上的指纹峰(5 一 8号峰) 相对保 留时间和相对峰面积相对标准偏差(.R S . D) 均在 3%以下
11、 , 符合中 药注射剂指纹图谱研究的技术要求 (暂行) , 说明仪器和进样精密度良好 , 各进样间仪器响应较为 一致 , 仪器和进样对实验结果影响较小 。 2 . 1 . 2 方法重现性实验 主要考察实验方法的重现性 , 取同一批号的样品提取 5份 , 分别检测 , 结果各指纹峰相对保留 时间和相对峰面积较为一致 。 单峰面积占总峰面积1 0 %以上的指纹峰(5 一 8号峰) 相对保留时间和 相对峰面积的相对标准偏差 (. RS . D)均在3%以下 , 符合中药注射剂指纹 图谱研究的技术要求(暂 行) , 说明提取方法重现性良好 , 同一样品各提取间结果较为一致 。 2 . 1 . 3 样品
12、稳定性实验 主要考察供试品溶液的稳定性 , 分别在不同时间检测 , 考察指纹峰相对保留时间和相对峰面积 的一致性 , 确定检测时间 。 本研究对同一份供试品溶液 , 分别在 0 、 2 、 4 、 8 、 2h 4 检测指纹图谱 , 单峰面积 占总峰面积o r %以上的指纹峰(5 一8 号峰)的相对保留时间和相对峰面积. R . SD 均在 3%以 下 , 符合中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行) ) ) , 说明供试品2 4 h 内稳定 , 此时间内检测 样品溶液 , 对指纹图谱结果影响较小 。 Tb e th Ns at i o n a S yl m po s iu o nm N at
13、 oar tM ed一 e 一 n a l M ate而a lRe osuc r es P l oc e ed i 哪 and bA s 加tcs 全国第 8 届天然药物 资 派 学术 研讨会 燃 2 . 1 . 4 线性实验 分别精密吸取不同体积的丹参酮H A 、 丹参酮 I 和二氢丹参酮 I 对照品储备液 , 角甲醇稀释调配 成系列对照品溶液 , 分别进样 10林L , 测定峰面积积分值 , 以对照品溶液浓度单g ) 为横坐标 , 峰面积 印V x S )为纵坐标进行回归 , 得到丹参酮n A 、 丹参酮I和二氢丹参酮I线性回归方程分别为 : 卜3 . 13火10吮+3 . 91、105为
14、 , 。0 . 9965; 卜3 . 24 x lo吮+5 . o3x一0 4 为 , , 0 . 99 95: 卜 2 . 42xlo吮+l . 45xlo 4为 , 。0 . 9999 ; 丹参酮HA在 0 . 12 8 一.2 56林g 、 丹参酮I在 .0 0 95 一 3 . 8林g 和二氢丹参酮I在 . 0 06 5 一. 2 6林g 范围内线 性关系良好 。 2 . L 5 样品分析 同一时期采紫花丹参新鲜样全株 , 分成叶 、 叶柄 、 茎 、 花瓣 、 花托 、 花轴 、 根木部 、 韧皮部及 周皮等9个部分 , 同时收集成熟丹参种子 , 比较脂溶性成分在丹参不同部位的分布
15、, 图 1结果显示 在丹参地下部分 , 脂溶性成分主要集中于周韧皮部位 , 共检测到1 2种成分 , 其中丹参酮n A ( 8号 峰)在韧皮部和木部仅有少量分布 , 1 2号峰在韧皮部亦有分布 , 而其他成分全部分布于根周韧皮部 位 。 。 邓 e l 一 习 才很J司皮 韦刃皮合 书 引良木召解 , _ 一_ _ 一一一、 _ .r厂 、一钾 2 , 月 八 。 心 一 _一一了 又/又一 _一Z、一 _ 6 了日 万 了 ) 910, 1 2 _刀 、,、_ 口 、一 一一J 、 -一一 一 一 八-一、- 一一一 _ 一 _ _ _ _ _ _ _ _ 八 _ _ _ _ _ _ _ _
16、 _ _ _ _ _ _人 _ 利 .月产 才花匀臼 寻花丰七 才E如睡 茎 叶书有 叶 2 0刀02 50 0 4OC减 45 00 图 1 紫花丹参不同部位脂溶性成分图谱比较 SSDO6000 在丹参地上部分 , 除1 2号峰及其周围的几个小峰外 , 其他脂溶性成分均未检测到 , 说明在丹 参脂溶性成分资源的开发上 , 地上部分并无利用价值 , 就其根部而言 , 也只是利用了周韧皮部分 。 因此 , 建议在丹参的采收 、 运输和贮藏过程中要尽可能减少周皮的脱落 。 若能使周皮有效分离 , 则 即能提高脂溶性成分提取效率 , 又节约了运输成本 。 白花丹参为山东特产 , 是正品丹参的一个变型种7 l , 其脂溶性成分含量较原变种高 , 应加以保 护和利用 。 本研究同时对白花丹参不同部位脂溶性成分的分布进行了研究 , 结果显示了与紫花丹参 相同的分布规律 , 主要成分也都集中于根周皮位 。 同一部位 , 白花和紫花丹参脂溶性成分种类相同 , 周皮中部分成分白花丹参略高于紫花丹参(图2
