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1、实验三 粗纤维的测定,一、目的要求,学习和掌握粗纤维的定量测定方法。,二、原理 粗纤维是指不能被稀酸、稀碱所溶解,不能被人体或家畜所消化利用的天然有机物质。其主要成分为纤维素、残存的半纤维素和木质素。 1、热的稀酸处理去除样品中的淀粉,果胶质和部分纤维素。 2、热的氢氧化钠处理去除蛋白质、部分半纤维素和部分木质素,并使脂肪皂化而去除。 3、乙醇或乙醚洗涤去除单宁、色素、残余脂肪、蜡、部分蛋白质和戊糖。 4、灰化去除灰分(金属氧化物)。,三、试剂与器材 试剂:1.25% 硫酸、1.25氢氧化钠、正辛醇、95乙醇 器材:干燥箱、粗纤维测定仪,4、将坩锅用蒸馏水洗尽,使其不带任何杂质,并将其置于恒温
2、箱内(温度在100oC左右)烘30分钟左右然后移入干燥器内冷却至室温,并将其编号,再置于干燥器内备用。 5、将电源线一头插人仪器右下侧的电源插座中,另一头插入交流220V的电源插座中,实验室的电源插座必须用三脚插座,且必须有可靠接地。 6、在仪器顶部的酸、碱、蒸馏水烧瓶中分别加入已配制好的酸、碱、蒸馏水,应基本加满。将瓶盖盖上。 7、在坩锅内放人l2 g试样,并将装好试样的坩锅分别放人6个抽滤座中,注意应放置于抽滤座中央的硅橡胶圈上,并使其与上面的消煮管下套中的硅橡胶回对齐,不要将坩锅放偏或放斜,否则将会漏液,当六个坩锅均放置准确后稍压下操纵杆柄并锁紧。,8.打开进水开关。将面板上预热调压旋钮
3、和消煮调压旋钮逆时针旋到底,打开电源开关,调整定时器的设定时间为30min,以后使用时可不必调节。 9.开启酸、碱、蒸馏水预热开关,调节预热调压旋钮,将其调到顺时针最大,这时左边电压表显示电压为220V左右。 10.等酸、碱、蒸馏水沸腾时,将预热电压调小至酸、碱、蒸馏水微沸。 11. 打开加酸开关,分别按l6号加液按钮在消煮管中加人已沸的酸液200 mL约到消煮管中间刻度线,再在每个消煮管内加2 mL正辛醇。关闭酸预热开关,开启消煮加热开关将消煮调压旋钮调至最大,此时右边电压表显示约220 V左右,待消煮管内酸液再次沸腾后再将电压调至 150170 V左右,使酸液保持微沸,向上打开消煮定时开关
4、,保持酸微沸30 min。,12. 将消煮加热开关关闭,将消煮定时开关向下关闭,将消煮调压旋钮逆时针旋到底,打开l6号抽滤开关,打开抽滤泵开关,将酸液抽掉拍完酸液后,先关闭抽滤泵开关,再关闭抽滤开关。打开蒸馏水开关,再按下l6号加液按钮,在消煮管中加人蒸馏水后再抽干,连续23次,直至用试纸测试显中性后关闭加蒸馏水开关。在抽滤过程中若发现坩锅堵塞时,可关闭抽滤泵,开启反冲泵用气流反冲,直至出现气泡后关闭反冲泵,打开抽滤泵继续抽滤。洗涤完毕后关闭所有抽滤开关及泵开关。 13.打开加碱开关,分别在消煮管中加人微沸的碱溶液200 mL后关闭加碱开关,再在每个消煮管中加入2滴正辛醇后重复第11后半部分和
5、第12步的操作,进行碱消煮、抽滤和洗涤。,14.以上工作完成以后,用吸管分别在消煮管上口加入25 mL左右95乙醇,浸泡十几秒钟后抽干。 15.将操纵杆手柄稍用力下压后拉出定位装置,使升降架缓慢上升复位,戴上手套后将坩锅取出,移入恒温箱,在130oC下烘干2小时,取出后在干燥器中冷却至室温,称重后得到m。 16.将称重后的坩锅再放入500oC的高温炉内灼烧1小时,取出后置于于燥器中冷却至室温后称重后得到m。 测定结果按下式计算: m1-m2 粗纤维 m 式中:m1100C烘于后坩锅及试样残渣重; m2500oC灼烧后坩锅及试样残渣重; m试样(未脱脂)质量。,五、注意事项 (1)样品粒度的大小将影响分析结果,通常将样品研磨成粒度为1mm3左右为宜。 (2)样品脂肪含量大于10%,应先脱脂,脱脂不足,则分析结果偏高。 六、思考题 (1)在本测定中哪些因素是影响测定结果的主要因素? (2)在测定为中为什么必须严格控制实验条件。 (3)用本方法测定的结果为什么称为“粗纤维”?,