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1、综述法莫替丁片的药代动力学研究08药剂一班 左艳敏 20080702031【摘要】采用随机分组，以RP-HPLC的法测定血浆药物浓度比较山西津华药业有限公司与青岛国风集团金海制药有限责任公司生产的法莫替丁片在人体内生物利用度和生物等效性，及其在大鼠体内的吸收动力学研究，充实完善法莫替丁体内过程的研究。【关键词】法莫替丁；生物利用度；生物等效性；吸收动力学；HPLC前 言法莫替丁是继西咪替丁和雷尼替丁之后出现的第三代组胺H2受体拮抗剂，对胃酸分泌有明显的抑制作用。法莫替丁是第三代组胺H2受体拮抗剂，能拮抗胃粘膜壁细胞的组胺H2受体，进而抑制胃酸分泌，且其抑制作用比雷尼替丁强7.5倍。临床上用于治
2、疗消化性溃疡Zolinger-E11ison综合征。本品不良反应低，少数患者可出现口干、头晕、失眠、便秘、腹泻、皮疹、面部潮红，白细胞减少。偶有轻度转氨酶增高等。目前，国内已有其注射剂、片剂和胶囊剂等上市。有关法莫替丁片的生物利用度及其生物等效性评价亦有文献报道【1-5】。本研究采用高效液相色谱法，以青岛国风集团金海制药有限责任公司生产的法莫替丁片为参比，对山西津华药业有限公司研制的法莫替丁进行了研究。采用自身交叉试验方法。测定18名健康志愿者口服法莫替丁制剂后的经时过程的血药浓度，并计算血药浓度-时间曲线下面积(AUC012、AUC0)、生物利用度以及有关药代动力学参数，同时根据测定值AUC
3、012、AUC0、C max和t max的统计处理结果进行生物等效性评价。肠吸收动力学的研究是采用大鼠分离、在体肠吸收方法，对法莫替丁的吸收部位和吸收动力学进行研究，以期了解该药在各肠段的吸收特征。主 体（一）法莫替丁片的相对生物利用度及生物等效性评价1、材料和方法11仪器与药品 仪器：日本岛津公司LC-10AT泵，KromailC18色谱柱(4.6 mm250 mm，5m)，SiL-10A全自动进样器，SPD-l0A型紫外可见分光光度检测器(190600 nm)，ND-2000型色谱工作站。TGL-16G高速台式离心机，超声波发生器。TKH-型液体快速混合器。试剂：乙腈色谱纯。其他试剂均为分
4、析纯，水为三重蒸馏水。标准溶液(2 000ngml)：精密称取法莫替丁适量，加甲醇溶解并稀释成2 000ngml，摇匀，置冰箱中冷藏备用。试验药品：法莫替丁片(每片含法莫替丁20 mg)，山西津华药业有限公司生产，记作T。参比制剂：法莫替丁片(每片含法莫替丁20 mg)，青岛国风集团金海制药有限责任公司生产，记作R。试验药品和标准参比制剂经山西省药品检验所检验合格。12血浆中法莫替丁HPLC测定法121色谱条件 色谱柱：KromailCl8色谱柱(4.6 mm250 mm，5m)，流动相：0.2 molL醋酸铵(pH 4.5)乙腈(90：10)，流速：1.0 mlmin，检测波长：266nm，
5、检测器灵敏度：0.5 AUV，进样量：20L 。122血浆样品处理方法 精密吸取血浆样品1.0mL置具塞离心管中，加100L 7.5盐酸羟胺，涡旋30 s，加入0.5 ml饱和碳酸钾溶液，涡旋30 s，加入6 ml乙酸乙酯。涡旋10 min。离心10 min(4 000 rmin)，吸取上清液5 ml置于尖底试管中，于氮气流下60吹干，残渣以流动相100L溶解后，取20L进样分析。123色谱行为按上述方法分离测定血浆所得色谱图表明，空白样品中内源性物质不干扰，通过与空白样品添加标准品色谱图比较，证明9.060 min色谱峰为法莫替丁色谱峰。如图1所示13方法学验证131血浆标准曲线的绘制取空白
6、血浆1.0ml 5份，分置具塞离心管中。分别加入上述法莫替丁标准溶液，使法莫替丁浓度分别为160.0、3200、640.0、900.0和2 000.0ng/ml，按“122”项下方法处理后，经HPLC测定，以法莫替丁峰面积为纵坐标，法莫替丁浓度C(ng/ml)为横坐标，按加权最小二乘法6进行回归，得血浆标准曲线为：Y=137.9232x+689.8672 r=0.9963(权重1/c2107)，线性范围160.02 000.0ng/mL，最低定量限为160.0ng/mL。132回收率试验按血浆标准曲线项下方法配制低、中、高浓度分别为160.0、900.0和2 000.0ng/mL的法莫替丁血浆
7、模拟样品，按“122”项下方法处理后经HPLC测定，测得回收率结果分别为(95.933.70)、(86.581.99)、(96.411.87)，RSD分别为3.86、2.30、1.94 (n=5)。133精密度试验按“131”项下方法配制低、中、高浓度(160.0、900.0和2 000.0ng/mL)法莫替丁血浆模拟样品，按“122”项下方法处理，1 d内测定5次。连续测定5 d，求得低、中、高3个浓度的日内RSD分别为3.99、2.30和0.91(n=5)；日间RSD分别为3.56、3.33和0.69(n=5)。134稳定性试验(1)室温稳定性：于空白血浆中加入一定量的法莫替丁标准液，配制
8、成160.0、9000和2 000.0ng/mL的系列标准血浆QC样本各3份，于室温分别放置不同时问后，按“122”项下处理并进样分析，与0相比求得标准血浆样本的偏差。结果表明，标准血浆Q样本在8 h内可保持稳定。(2)冻融稳定性：同法制成160.0、900.0和2000.0ng/mL的系列标准血浆QC样本各3份于-20冷冻24 h，取出待完全融解后，按“122”项下处理并进样分析，反复冻融3次，与未冻融相比，求得标准血浆样本的偏差。结果表明，标准血浆QC样本在冻融条件下可保持稳定。(3)长期稳定性：同法制成160.0、900.0和2000ng/mL的系列标准血浆QC样本各3份，于-20分别冷
9、冻0、7、14、21 d，取出待完全融解后，按“122”项下处理并进样分析，与0 h相比，求得标准血浆样本的偏差。结果表明，标准血浆QC样本在-20条件下21 d内可保持稳定。14试验对象及方法141受试者的选择 18名男性健康志愿受试者，体重(63.781.90)kg，年龄(22.501.58)岁，身高(171.003.51)cm。经常规体检证明肝、肾功能正常，心电图正常，精神状态良好。受试前2周至实验期间不服用其他任何药物，实验期间禁烟、酒及含咖啡因的饮料，受试者均签署知情同意书。自愿作为受试者参加法莫替丁片的相对生物利用度试验。试验经医学伦理委员会批准后实施。142试验方案 18名男性健
10、康志愿者禁食过夜后，于早上7：00单剂量口服法莫替丁试验制剂或参比制剂40 mg，用200mL温开水送服。试验期间受试者避免剧烈运动，2周后交叉给药。分别于给药前及给药后的0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h于肘静脉取血5mL。所采血样置于含肝素抗凝剂的离心试管中，4000 rmin离心3 min，分取血浆于-20冰箱保存至测定。服药2 h后可饮水，4 h后进统一低脂膳食。用药期间和用药后，受试者均未出现任何不良反应。15药动学参数计算及统计学处理 以梯形法计算血药浓度时间曲线下面积(AUC)，根据对数血药浓度-时间曲线末端直线部分的斜
11、率求算消除半衰期(t1/2)，峰浓度(Cmax)和达峰时间(tmax)，用实测值表示7。采用交叉设计方差分析法，对被试制剂和参比制剂的主要药物动力学参数进行方差分析，用双单侧检验法(Two one-side test)和(1-2)置信区间法进行生物等效性评价。2、结果21血药浓度18名健康志愿者单剂量口服40 mg法莫替丁片后，平均血药浓度-时间曲线见图2：22药动学参数 18名健康受试者单剂量口服40 mg法莫替丁试验制剂或参比制剂后的药动学参数见表1：23相对生物利用度 根据18名健康受试者口服法莫替丁试验制剂或参比制剂的AUC012，估算法莫替丁试验制剂的相对生物利用度为(96.5810
12、.39)。24生物等效性 分析方差分析表明，两种制剂的Cmax、tmax、AUC012、AUC0剂型间、个体间和周期间均无显著差异。双单侧检验法和(1-2)置信区间法计算结果表明，两种制剂的单剂量交叉口服给药的Cmax、tmax、AUC012、AUC0的tl、t2值均大于t(1-0.05)，并且x T在(1-2)置信区间内，受试制剂参数AUC012、AUC0的90可信限在参比制剂80125范围内，C max在70143范围内，因此，可以认为试验制剂T与参比制剂R两种制剂生物等效，结果见表2。（二）（二）法莫替丁大鼠吸收动力学的研究11-151、材料与方法（1）材料：法莫替丁标准品；酚红；兰格B
13、T01-100蠕动泵；754紫外分光光度计；高效液相色谱仪（515泵，2487紫外检测器）。（2）动物：SD大鼠，普通级，体重（25020）g，雄雌兼用。（3）离体小肠不同肠段吸收实验。外翻肠囊制备：选取实验前禁食1夜的大鼠，腹腔注射3%戊巴比妥钠1ml/kg进行麻醉。沿腹白线剖开，选择所需肠段：十二指肠自幽门1cm处开始，空场段离幽门15cm处开始，回肠20cm处开始，结肠段为紧邻盲肠端至直肠；各段均取10cm。用镊子夹住小肠一端的断缘，将肠翻转后结扎一游离端，另一端接上三通管，并向肠腔内注入2ml Kreb-Ringer溶液，固定，将肠管置于盛有37恒温的Kreb-Ringer溶液的锥形瓶
14、中，通入混合氧气，待用。2）离体吸收实验：按上述制备外翻肠囊，并置于盛有25ml 37恒温的供试液的锥形瓶中，法莫替丁浓度为20mg/L，分别于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h各取样0.1ml，离心，进样。同时补充等量Kreb-Ringer溶液。（4）在体小肠不同肠段吸收实验1)大鼠在体肠吸收实验法：选取实验前禁食的大鼠，腹腔注射3%戊巴比妥钠1ml/kg，麻醉后固定。沿腹白线剖开，选择所需肠段两端插管，结扎。先用37生理盐水将小肠内容物冲洗干净。再用空气排除生理盐水并将大鼠连接至灌流装置。用100ml37供试液按2.5ml/min流速平衡10min，再以1ml/min流速灌流。分
15、别于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h取样0.6ml,0.5ml用于酚红含量测定，0.1ml用于法莫替丁浓度的测定，同时补加酚红溶液0.6ml，分段考察 不同肠段法莫替丁肠吸收实验。2）酚红标准曲线：精密吸取Kreb-Ringer溶液配置的浓度分别为2.5、5.0、10、20、40、60mg/L酚红标准溶液各0.5ml，加入0.2mol/LNaoH溶液5ml显色，在557nm处测定吸收度，以0.2mol/LNaoH溶液为空白，以吸收度A与酚红浓度C进行线性回归，得酚红标准曲线A=0.0156C+0.0076 (r=0.9999，P0.001)。（5）肠循环液中法莫替丁浓度测定方法1）高效液相色谱条件：采用HPLC外标法定量。法莫替丁测定色谱条件SpherisorbC8柱。流动相：10%乙腈，三乙胺调pH为4.3。流速：0.8ml/min。检测：紫外检测器，267nm波长处，灵敏度：1AUFS。10l进样。2）法莫替丁标准曲线：离体：用Kreb-Ringer溶液精密配
