第一次课文稿教学讲义

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1、生物化学大实验,1.纪律要求 同其他课程一样,要求不迟到、不早退(提前10分钟到实验室),上课时间,一律关掉手机(或调成静音),不允许接打手机、收发短信等。任何情况下不得耽误上课,如确实有事,一定要在4次实验课中调开。无论因何种原因耽误一次课,扣除本次课成绩。,2.实验课的特点 2.1实验的综合性强: 与上学期的“生物化学实验”做一下对比,生化大实验的每一个实验项目都是综合性实验,需要3-4周,甚至更长时间。实验内容多,包含的实验技术多,多种实验技术综合在一起才能完成一个实验,通过每一个实验项目的完成,可以锻炼大家对所学知识的综合运用能力。,回忆上学期我们学习的内容: 我们分别学习了氨基酸、蛋

2、白质的颜色反应、Folin-酚法测定蛋白质浓度、凯氏定氮法测定生物样品的蛋白质含量、氨基酸的纸层析、凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量、温度对糖化酶活力的影响、微生素C的提取及测定、糖的呈色反应、转氨酶活力测定等等。 每一个实验都是独立的,仅包含一种实验技术,相互之间没有联系。,例如:实验一,鸡卵类粘蛋白的提取纯化、活性及分子量测定。 原材料是鸡蛋清,先采用有机溶剂沉淀的方法去除大量杂蛋白(卵清蛋白、球蛋白),称为粗提,再利用有机溶剂沉淀得到鸡卵类粘蛋白粗品,再采用离子交换纤维素柱层析进行纯化,回收纯化组分,测定生物活性,计算纯化效率,最后以聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量。,该实验包含以下

3、实验原理、技术及仪器使用: (1)有机溶剂沉淀蛋白质; (2)冷冻离心(冷冻离心机); (3)透析(透析袋); (4)蛋白质浓度测定(可见分光光度计); (5)离子交换柱层析(核酸蛋白检测仪); (6)活性测定(紫外分光光度计); (7)相对分子质量测定(电泳仪)。,在粗提步骤,如果有机溶剂的比例和加量不合适,不但会使杂蛋白沉淀,目的蛋白也会共同沉淀,这样导致收率降低,柱层析纯化的条件不合适,会导致纯化效果差,电泳检测时,样品图谱会有差异。 要求:每一次、每一个步骤都要认真,否则,很可能实验进行到一半,某些组就难以继续下去。,2.2上课时间: 由于生物材料的特殊性,每次上课的时间不可能完全受课

4、表安排的限制,每一次上课时间的长短,要根据实验的具体情况调节,有时候还要占用一些其他时间。提前来,或中午接着做,或前一天做些准备,都有可能。,3.本实验课的主要内容 生命科学学院对生工和生技专业,在学习生物化学实验之后,还安排了综合实验课生化大实验,目的就是让同学们学习了生物化学基础知识和基本技术之后,进一步掌握这些技术的运用,如何将这些生物化学原理和技术运用到科研实践当中。,我们为大家选择的实验包括蛋白质(或酶)的提取、纯化、活性测定、分子量测定,亲和层析纯化丝氨酸蛋白酶、酶的固定化及性质、蛋白质的免疫印迹等。 每一个综合性实验相当于一个小型毕业实践的课题。,4.实验报告要求 4.1一个综合

5、性实验完成后写一份实验报告。 4.2由于实验的综合性,以往实验报告的格式已经不适合生化大实验。 本课程实验报告要求按研究论文的格式书写。包括:题目、作者、中文摘要、英文摘要、前言、材料与方法、结果与讨论、参考文献。,4.3 每一部分的要求 题目:每一次实验的题目 作者:一个综合性实验的合作者(4位同学) 单位:河北大学生命科学学院 河北 保定 中文摘要及关键词:总结本次实验的主要内容、最核心的专业词语。 英文摘要及关键词:翻译成英文。,前言:写明本研究的对象有什么性质、用途、研究其的重要意义以及目前的研究水平等。 材料与方法:详细写明所用材料及实际采用的方法。分条目写。 如: 1 材料与方法

6、1.1 材料 新鲜鸡蛋、丙酮、三氯乙酸-丙酮(比例)、透析袋、DEAE-纤维素、 1.2仪器 冷冻离心机、可见分光度计、,1.3 方法 1.3.1 鸡卵类粘蛋白的粗提 1.3.2 鸡卵类粘蛋白的纯化 1.3.3 鸡卵类粘蛋白浓度测定 1.3.4 鸡卵类粘蛋白活性测定 1.3.5 鸡卵类粘蛋白相对分子质量测定,结果与讨论:与方法相对应,写明采用每一种方法得到了什么结果,可以列表、绘图、图片等形式表示。对得到的结果进行一下分析和评价。 2 结果与讨论 2.1 粗提结果 写明?体积鸡蛋清,得到?体积黄绿色上清液,沉淀、溶解、透析后得到?体积粗品。 2.2 2.3,参考文献:写明你完成本次实验阅读了哪些文献,包括书、杂志、电子出版物、专利、论文集等。 例如: 1. 邵雪玲,毛歆,郭清.生物化学与分子生物学实验指导.武汉大学出版社.2003,22-25,32-35 2.方林求,褚楠, 薛静.鸡卵清蛋白对蛋白酶抑制作用的研究. 中国生化药物杂志,1995,16(6):262-265. 3.武金霞,张贺迎,张瑞英,等.生物化学实验原理与技术.河北大学出版社,2005,66-68.,

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