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1、第章植物脱毒技术复习题参考答案一、填空：1、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。2、通过茎尖或根尖离体培养可获得无病毒再生植株。3、通过茎尖培养脱毒时，常以带 1-3 个幼叶原基的茎尖（约 0.30.5mm）作外植体较合适。4、分子生物学鉴定脱毒苗的主要方法：双链 RNA 法(dsRNA)和 互补 DNA(cDNA)检测法。5、无病毒苗的保存分：隔离保存和长期保存两种方法。二、名词解释：1、无病毒苗（virus-free plantlets）：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。 2、微尖嫁接技术（micrografting s
2、hoot-tip）：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。主要程序：无菌砧木培养茎尖准备嫁接嫁接苗培养移栽。3、指示植物(indicator plant method)： 将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主） ，利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。三、问答题：1、植物脱毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？（1）茎尖培养脱毒：病毒在植物体内的分布并不均匀，越靠近茎端的病毒的感染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少（2）愈伤组织培养脱毒法：通过植物的器官和组织的培养，脱分化诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，
3、长成小植株，可以得到无病毒苗（3）珠心胚培养脱毒：病毒一般不通过种子传播，由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的，并具有与母本相同的遗传特性。（4）茎尖微体嫁接：将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取 0.41.0mm 茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。（5）花药培养脱毒（6）热处理脱毒：一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40） ，即钝化失活（7）化学处理：抑制或杀死病毒2、说明微尖嫁接技术脱毒的程序微尖嫁接技术指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。主要程序：无菌砧木培养茎尖准备嫁接嫁接苗培养移栽。3、目前鉴定脱毒苗的方
4、法有哪些？各有何特点？（1）直接检测法：直接观察脱毒植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状。（2）指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主） ，利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法（3）抗血清鉴定法：用已知抗血清鉴定未知病毒的种类。这种方法特异性高，测定速度快。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。 （4）分子生物学鉴定法：双链 RNA 法(dsRNA)：受 RNA 病毒侵染的植物，有病毒的双链 RNA(dsRNA)存在；健康植株则无。互补 DNA(cDNA)
5、检测法：用人工合成的能与病毒碱基互补 DNA，作为探针，与从待测植物中提取RNA 进行 DNA-RNA 分子杂交。有荧光标记的证明有病毒存在（5）电镜检查法：可以直接观察病毒，检查出有无病毒存在，了解病毒颗粒的大小、形状和结构，又可以鉴定病毒的种类。优点是方法先进、灵敏度高、能在植物粗提取液中定量测定病毒。但需一定的设备和技术。4、简述植物无病毒原种长期保存的方法。（1）低温保存：将茎尖或小植株接种到培养基上，置低温（1-9） 、低光照下保存。材料生长极缓慢，只需半年或一年更换一次培养基，又叫最小生长法。（2）冷冻保存（又叫超低温保存） ，一般以液氮（-196）保存植物材料。在如此低温下，新陈
6、代谢活动基本停止，处于“生机停顿”状态 材料选择 预培养 冷冻防护剂预处理 冷冻： 快速冷冻法、慢速冷冻法 、分步冷冻法、干燥冷冻法、解冻5、无病毒苗的繁殖方法有哪些？（1）嫁接繁殖（2）扦插繁殖（3）压条繁殖（4）匍匐茎繁殖（5）微型块茎（根）繁殖 6、我国的农作物无病毒苗繁育生产体系是怎样的？国家级（或省级）脱毒中心无病毒苗繁育基地无病毒苗栽培示范基地作物无病毒化生产。（1）脱毒中心负责作物脱毒、无病毒原种鉴定与保存、提供无病毒母株或穗条；（2）无病毒苗繁育基地将无病毒母株或穗条在无病毒感染条件下繁殖生产用无病毒苗；（3）无病毒苗栽培示范基地负责进行无病毒苗栽培的试验和示范，在基地带动下实现作物无病毒化生产。
