病理解剖技术知识课件

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1、病理解剖学技术 （The technique of Pathology 哈尔滨医科大学病理教研室 金晓明,序： 病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮，缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决定病理学的发展。,病理学的技术主要体现在几个结合上 1.传统病理学技术与现代生物新技术相结合 2.宏观、脏器、组织、细胞、超微与分子基因不同层次技术相结合 3.形态、机能与代谢变化相结合 4.定性、定位与定量观测相结合 5.实验研究技术与临床应用技术相结合 6.技术的基本原理与具体方法相结合 7.基本技术知识与作者实践经验相结合,病理学的发展与使用的工具 和方法的更新密切相关 1.用解剖刀剪等进行尸体

2、检查，开展了器官病理学 2.显微镜发明百年之后，建立了细胞病理学 3.电子显微镜的问世，发展了超微病理学 4.免疫组织化学促进了免疫病理学的发展 5.分子生物学带动了分子病理学的兴起 6.计算机及其网络的应用，将病理学走向信息病理学时代,第一章：病理解剖技术 一、病理解剖的意义 病理解剖技术是病理学的基础之一，是病理学不可分割的一部分。 通过病理解剖收集病理教学及科研资料是其中一个途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。 病理解剖是通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化，找出主要病变，分析判断直接死亡的一个重要方法。,二、病理解剖室的设备和器械 1. 设备： 1解剖室的设计要求

3、 最好位于太平间； 室内面积要大，必须有两个门； 地面用水磨石，四周有排水沟或地漏； 室内通风好； 有消毒室，男女更衣室，浴室等。,2解剖台的设计 高低和大小要合适 台面可用水磨石或不锈钢 有条件可购置能够升降的解剖台 解剖台可带有抽气的功能等,水磨石台面的解剖台,水磨石台面的解剖台,不锈钢台面的解剖台,病理解剖器械,2. 器械：,3. 清洁、消毒和个人保护 1病理解剖室的清洁和消毒 2病理解剖器械的清洁和消毒 3个人保护等,三、病理解剖的方法和步骤 1. 病理解剖前的准备 主要办理一切手续，非常重要。 2. 体表检查,体表检查,尸斑，尸僵,3. 胸腹腔检查 1切口 2腹腔检查 3胸腔检查,腹

4、腔有渗出液,心包积液（血液,气管周围血液,液体称量,4. 内脏器官的取出及检查 一般有两种方法： 1各脏器分别取出法 是病理解剖最常用的方法 2多脏器联合取出法 此法比较简单，可保持各器官的完整性。,心脏,表面充血,绒毛心,双肺和支气管,肝脏,表面有结节,胰腺，出血改变,肠管，出血,脑,脑干出血,第二章 病理大体标本的制作 一、大体标本的收集、取材、固定和保存 1.大体标本的收集 通过尸体解剖和活体组织（包括外科手术切除标本和活体组织穿刺标本检查时发现并收集。 2.大体标本的取材,取材室条件： 通风要好，必须有排风设备； 固定的组织取材前要用流水充分冲洗； 排水要远离住宅区等,不同器官的取材和

5、固定不同： 1实质性的器官：如肝、脾等 要注意，实质器官不容易被固定液所穿透。,肝癌,肝癌,肝癌,肝癌,2空腔器官：如胃、肠等 取材时要看全层，保持粘膜、肌层和浆膜全层的组织。,胃癌，呈菜花状,切面的形状,胃癌，溃疡型,切面的形状,切面的形状，浸润性至浆膜,溃疡型胃癌,溃疡型胃癌,切面的形状，浸润性至浆膜,3肺 肺组织比较疏松，固定液容易渗透。 肺组织的取材要清楚的了解各叶肺组织所伴随的支气管。,A：主支气管 B：叶支气管,肺和气管周围的淋巴结,肺癌 肺门型,肺癌 肺门与周围之间,肺癌 周围型,肺癌 空洞型,4）其它类型 外科手术标本常见： 乳腺癌 子宫颈癌 肠癌 卵巢肿瘤等,乳腺癌,乳腺癌,

6、乳腺癌,乳腺癌,子宫颈癌,子宫颈癌,子宫颈癌,子宫颈癌，切面,3.大体标本的固定 1固定的目的： 将受检组织尽快地侵入固定液内，使组织和细胞的固有成分迅速凝固，防治自溶和腐败，使其保持与生活状态有相似的结构，以利于切片和观察。 2固定液的选择： A.甲醛（Fomaldehyde，又称福尔马林，其浓度在4，它是一种还原剂，极易挥发，散发出强烈的刺激性气体，使人流鼻涕、流眼泪，呼吸道有异物感。 B.95酒精（乙醇，除具有固定组织的作用外，尚有脱水作用。,3固定液的特性 甲醛固定液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较小，并能增加组织韧性的优点，而且可以保存组织内的脂类物质，对组织的主要作用为硬化和防腐。

7、 酒精可以保存组织内的糖类物质及尿酸结晶，不过，它常使组织明显收缩，且使脂类物质溶解。,4. 大体标本的脱水、包埋和切片 为能制成满意的切片，固定后的组织还要经过脱水、透明、浸蜡及包埋等一系列程序。 1脱水：目的是将固定了的组织内水分除去。以便使切片时的支撑物（石蜡充分进入组织内。常用的是酒精。 2透明：目的是使能与石蜡结合溶解的媒介剂进入组织，进而将不能与石蜡结合的脱水剂置换出来，并使组织透明。常用的是二甲苯。,3浸透和包埋：可使组织具有一定的硬度和韧度，便于切成薄的切片。常用的石蜡溶点为6062，有时为保存更多的抗原成分。可采用低溶点石蜡（4850 。 4切片 切片机类型： 旋转式切片机

8、滑动式切片机,旋转式切片机,5. HE（Hematoxin Eosin,HE染色 1苏木素染色配方： 苏木素 1g 纯酒精 10ml 钾明矾 20g 蒸馏水 200ml 氯化汞 0.5g 2伊红染色配方： 伊红 0.5-1g 蒸馏水 99ml,HE染色法： 1苏木素染色57分钟； 2自来水冲洗多余的染液； 31盐酸酒精分化数秒钟，使细胞核呈紫蓝色 4自来水中充分洗涤； 51氨水中数秒，至返蓝； 6自来水中至蒸馏水冲洗； 71的伊红染色，3分钟左右； 结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆呈粉红色，基底膜，胶原纤维及肌纤维呈粉红色。,HE切片,第三章 特殊染色 HE染色虽是一种快速、经济、且易掌握的方法，

9、但它不能回答病因学、Z组织发生及发病机制等方面的许多问题。而特殊染色可以协助解决病理诊断问题。,目前市场上有配制好的特殊染色试剂,介绍常用的几种特殊染色 1. 脂肪染色 主要用于心、肝、肾的脂肪变性，动脉粥样硬化，以及因脂肪栓塞导致的死亡病例鉴定等。 1试剂配制：苏丹染液 苏丹III或苏丹IV0.5g，70%乙醇250ml，丙酮250ml。 2染色方法： （1标本常规甲醛固定后流水冲洗12h； （2用滤纸吸干标本表面的水分，把标本放入苏丹III染液中浸泡30min； （3用70乙醇分化，以脂肪组织呈橙黄色，其它组织不着色为佳； （4水洗后浸存在5甲醛液中，为了防腐可加入适量的防腐剂。,肝脂肪变

10、,苏丹III染色,2. 过碘酸(periodic acid)-schiff染色，即PAS染色 此技术主要显示糖原（在淀粉酶消化对照下、中性粘液物质、基底膜、霉菌和寄生虫等。 1 schiff氏试剂的配方： （1将200ml蒸馏水煮沸； （2冷却至90时，慢慢加入碱性复红1g; （3搅拌并煮沸5分钟使其全溶； （4冷却至50时过滤，并加入1N盐酸20ml； （5冷却至25时，再加入无水亚硝酸钠1g并搅拌匀。 （6置入遮光瓶内并放入在4冰箱内保存备用。,2PAS染色方法： （11过碘酸水溶液染10分钟，使含有乙二醇的化合物氧化形成醛基； （2蒸馏水洗去过碘酸； （3 schiff氏试剂反应15分钟

11、，使醛基和schiff氏试剂结合，形成紫红色产物； （40.5%亚硝酸钠(NaHSO3)处理三次，每次2分钟； （5流水冲洗510分钟； （6用苏木素染色液复染细胞核； 7水洗或1盐酸酒精分化。 3结果： 细胞核呈蓝色，基底膜呈红色，胶原纤维、肌纤维及细胞浆呈红色。,过碘酸Schiff反应：糖元及其他PAS反应阳性物质呈红色，细胞核呈蓝色,PAS,念珠菌（PAS染色）,附：AB/PAS法（阿尔辛蓝过碘酸雪夫染色法 结果：中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝 色，中性和酸性粘液的混合物质呈紫色。,阿尔辛蓝阿尔辛黄法：常用于黏液上皮肿瘤的鉴别诊断,阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应：是显示中性和酸性黏液物质的

12、有效方法,HID/AB:高铁二胺奥新蓝法,AB/PAS,3. 六胺银（PASM染色 在肾脏活体组织检查和一些真菌感染的组织选用此方法。 1PASM染液的配方： 2硝酸银水溶液3ml； 3六次甲基四胺液25ml； 5硼砂2ml。 注：2硝酸银配制胺溶液，染色时间40分钟，温度 5560，随时镜下观察便于控制。,2PASM染色法： （11过碘酸水溶液内染10分钟； （2自来水冲洗，蒸馏水冲洗； （3入5铬酸水溶液40分钟，出此溶液后用1亚硫酸钠除掉铬酸； （4自来水洗数次，蒸馏水洗34次； （5入六胺银染液（506040分钟，20分钟后，每5分钟镜下观察一次，蒸馏水洗四次； （6入0.2%氯化金水

13、溶液12分钟，蒸馏水洗三次； （7入5硫代硫酸钠水溶液12分钟，蒸馏水洗数次； （8复染HE，脱水、透明、封片 结果：底膜呈黑色，网状纤维呈黑色，细胞核呈蓝色，背景呈粉红色。,PASM染色,PASM染色,PASM,PASM,附：PASM对真菌的染色 真菌（fungus，又称霉菌，其种类较多。 真菌的基本结构成分是含有较多的粘多糖和蛋白质。 1试剂的配制： （1六次甲基四胺、硝酸银原液（简称六胺银原液。3六次甲基四胺水溶液100ml，5硝酸银水溶液5ml； （2六胺银硼砂染色液。六胺银原液25ml，蒸馏水25ml，5硼砂水溶液2ml； （3核固红染液。核固红0.1g，硫酸铝5g，蒸馏水100ml

14、； （4亮绿染色液。亮绿0.2g，蒸馏水100ml，冰醋酸0.2ml。,2染色步骤： （15铬酸水溶液氧化1小时，流水洗2分钟，蒸馏水洗2次； （2浸入1亚硫酸钠水溶液除掉铬酸1分钟，流水洗5分钟，蒸馏水洗3次； （3浸入六胺银硼砂液染色11.5小时（4050温箱内，至切片呈浅棕色，蒸馏水3次； （4用0.2%氯化金水溶液调色3分钟，蒸馏水稍洗； （5核固红染色细胞核10分钟，流水洗，蒸馏水洗； （6亮绿染色液30秒，用蒸馏水快速稍洗； （7无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：真菌均呈黑色，菌丝和孢子呈黑褐色，细胞核呈红色，背景呈淡绿色。,念珠菌（假菌丝）,新生隐球菌性脑膜炎,4.

15、 淀粉样物质染色（介绍刚果红染色） 淀粉样物质是一种嗜伊红性物质，性质属于糖蛋白成分。组织出现此物质称为淀粉样变性。 1试剂配制： （1刚果红染色液。刚果红1g，蒸馏水100ml； （2Harris苏木素染色液。,2染色步骤： （1苏木素染色液浸染2分钟； （20.5%盐酸乙醇分化数秒钟； （3流水洗，蒸馏水洗2次； （4刚果红染色液中25分钟； （5无水乙醇迅速脱水2次； （6二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色。,刚果红染色,5. Mallory三色染色法（属于结缔组织复合染色法 1试剂配制： （1重铬酸钾液。重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml； （2苯胺蓝橘黄G液。苯胺蓝0.5g，橘黄2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml； （3酸性复红液。酸性复红0.5g，蒸馏水100ml。,2染色步骤： （1重铬酸钾液10分钟； （2流水洗2分钟，蒸馏水洗2次； （3酸性复红液2分钟，蒸馏水稍洗； （4苯胺蓝液20分钟，95乙醇快速分化； （5直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变性物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色。,特点：利用酸性复红、苯胺蓝、橘黄G这三种染料对结缔组织和非结缔组织进