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1、第八章染菌的防治,染菌（contamination）的危害 影响产量 影响质量 使能耗主耗上升,第一节染菌的检查与判断 一、杂菌污染的检查,培养基 （1）细菌培养基 营养肉汤：glucose 10 g, peptone 5 g, beef extract 5 g, NaCl 5 g, distilled water 1000 ml, pH 7.27.4。 酚红肉汤：营养肉汤+1% phenol red 3 ml。 营养琼脂：glucose 5 g, peptone 10 g, beef extract 3 g, NaCl 5 g, agar 1520 g, distilled water 10
2、00 ml, pH 7.27.4。,2）酵母培养基 萨氏培养基（Sabourauds agar）：glucose 40 g, peptone 10 g, agar 1520 g, distilled water 1000 ml, pH 5.6。 （3）霉菌培养基 察氏培养基（Czapeks agar）：sucrose 30 g, NaNO3 3 g, K2HPO4 1 g, MgSO47H2O 0.5 g, KCl 0.5 g, agar 1520 g, distilled water 1000 ml, pH 6.6。,无菌检查的流程：,排气中CO2异常变化显示染菌,二、通过异常现象判断,工艺
3、一定，尾气中CO2量变化有一定规律 污染杂菌，糖耗加快，尾气中CO2量增加 污染噬菌体，糖耗减慢，尾气中CO2量减少,种子系统 空气带菌 设备渗漏 培养基灭菌不彻底 操作失误,第二节染菌原因的分析,从染菌规模分析,大规模染菌 空气净化系统 种子染菌、接种管道渗漏 部分罐批染菌 某一批号种子染菌 某一套连消系统染菌 补料管路渗漏或补料液带菌 个别罐批连批染菌 设备问题 个别罐不连批染菌 培养基灭菌不彻底或操作失误,早期染菌 培养基灭菌不彻底 种子带菌 接种管道灭菌不彻底或接种操作不当 中期染菌 培养基灭菌不彻底 加消沫剂、补料系统灭菌不彻底或渗漏 发酵设备渗漏 泡沫顶罐 后期染菌 空气系统有问题
4、,从染菌时间分析,酵母菌：种子室、摇瓶间、计量罐、进料补料阀门、搅拌轴封、被倒流的空气介质 霉菌：种子室、摇瓶间、搅拌轴封、被倒流的空气介质、空气 普通杆菌：空气过滤介质、冷水设备渗漏、设备死角渗漏 芽孢杆菌：培养基灭菌不彻底、设备有死角 球菌：空气系统、无菌间摇瓶间空气中,从染菌的菌型分析,第三节染菌的防治措施 一、一般染菌的防治,预防种子带菌： 环境清洁， 无菌操作设备完好、可靠， 无菌操作用品灭菌彻底， 操作熟练， 制度严格。,一、一般染菌的防治,消灭培养基染菌： 严格物料采购、运输、仓贮 配料（防止块状物料、清洗配料罐） 灭菌（保证蒸汽的压力、稳定及畅通、按操作规程操作） 保压 （防治
5、培养基倒流）,严防空气带菌： 提高空气进口的洁净度 除尽压缩空气中的油和水 空气过滤器灭菌时防止被冲翻 保证空气过滤器介质的填装质量,一、一般染菌的防治,杜绝设备污染： 良好的设计（无死角） 规范的安装 彻底的清洗 严密的维修 有效的灭菌。,一、一般染菌的防治,染菌罐的处理,种子罐染菌 灭菌后放下水道 并对种子罐、管道进行检查和灭菌 启用备用罐或倒种,发酵灌染菌 前期： 危害大的 灭菌后放下水道 危害不大，可重新灭菌，重新接种 中后期： 降低培养温度，降低通风 提前放罐 控制补料量,染菌罐的处理,二、噬菌体污染的防治,噬菌体污染的鉴别 现象鉴别： 发酵液变稀、发粘，OUR，DO，NH4+N，泡沫。 平板鉴别： 观察噬菌斑。,污染的预防 选育抗噬菌体菌株； 环境、明沟、下水道定期消毒； 排气过滤，菌体排放前灭菌； 选用孔径为0.01 m的微滤膜空气过滤器； 发酵车间远离农田、排污明渠、污水处 培养基中加入适量化学消毒剂： 三聚磷酸钠 0.2%0.3%， 植酸0.1%0.2%，柠檬酸0.2%0.5%， 草酸0.2%0.5%， 新洁而灭0.02%0.05。,污染后的处理 停产大消毒（用漂白粉、次氯酸钠、甲醛等对厂房和设备的所有角落进行大消毒）。 更换菌种或转产其他产品。,
