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1、DB43/T2020ICSDB43湖南省地方标准DB43/T2020摇蚊室内培养技术操作规程Guideline for Laboratory Culture Technology of Chironomidae2020 - - 发布2020 - - 实施湖南省市场监督管理局发布前 言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由湖南省植物保护研究所提出。本标准由湖南省农业标准化委员会归口。本标准起草单位：湖南省植物保护研究所。本标准主要起草人：陈昂、刘勇、张德咏、蒋桂芳、罗杰、罗香文、陈武瑛、熊浩。目录前 言1摇蚊室内培养技术操作规程31 范围32 规范性引用文件33 术语和定义3
2、3.1 卵33.2 卵块33.3 蛹33.4 成虫34 环境条件34.1 培养介质34.2 光照34.3 温湿度条件45 培养装置45.1 养虫笼45.2 培养容器45.3 喂食盘45.4 照明系统45.5 充气系统46 饲养46.1 卵期46.2 幼虫期46.3 蛹期56.4 成虫期5附录A6附录B8附录C9摇蚊室内培养技术操作规程1 范围本标准规定了摇蚊室内饲养及繁殖的环境条件等技术要求。本标准适用于摇蚊的室内饲养与繁殖。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
3、文件。NY 5051 无公害食品 淡水养殖用水水质标准3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 卵摇蚊受精卵。3.2 卵块摇蚊产出的卵团，由卵螺旋规则排列形成的胶质圆柱块体。3.3 蛹从幼虫变态发育成成虫的过渡形态的摇蚊。3.4 成虫完成变态发育、已羽化、性成熟的摇蚊。4 环境条件4.1 培养水使用存放并曝气处理24 h以上的曝气水或人工培养基（M4，配方见附录B），培养水pH值为6.58.0，溶解氧含量不低于空气饱和值（附录A）的60%，水质硬度（以CaCO3计）范围为10 mg/L 250 mg/L，其它水质条件符合NY 5051的规定。4.2 光照光照/黑暗时间为14 h/10
4、h，光照强度800 Lux 1300 Lux。4.3 温湿度条件摇蚊饲养与孵化的水体温度控制在20 25 ，采用空调或加热棒控温；湿度控制在60%以上。5 饲养装置摇蚊培养装置由养虫笼、培养容器、喂食盘、照明系统、曝气系统组成。养虫室应密闭，避免外界阳光、蚊虫、天敌进入，并配备加湿器、空调、温湿度计、照度计等。5.1 养虫笼可拆式养虫笼，尺寸为50 cm50 cm50 cm，铝合金管可拆卸框架，80目涤纶透明纱网笼子，一面具拱形拉链门及袖筒式小门。5.2 培养容器直径180 mm的结晶皿，皿内平铺一层约3 cm厚的粗石英砂（粒径5 mm），加入培养水至结晶皿上缘。结晶皿上应有标示卡，记录该摇蚊
5、的中文名、拉丁名、卵产出的日期等信息。5.3 喂食盘直径为90 mm的培养皿，往培养皿中放置沾满蔗糖水的脱脂棉团，用于饲喂成虫。5.4 照明系统由时控开关、灯管组构成，控制光暗周期及光照强度。5.5 充气系统由超静气泵以及导管、一次性塑料滴管构成，能在饲养期间持续往培养水中温和曝气。6 饲养摇蚊生活史一般分为4个时期，分别为卵期、幼虫期、蛹期、成虫期。6.1 卵期用一次性塑料滴管吸取摇蚊卵或用镊子夹住卵块柄状端，转移至结晶皿中静置培养，受精卵即开始发育。6.2 幼虫期一般2天左右，受精卵就能发育成幼虫，但初孵化出的幼虫仍旧被卵块中的胶状物黏结成团，需要一段时间，幼虫才能完全分散，自由游动、觅食
6、。幼虫期需分三次投入鱼饲料粉末（如Tetramin），投饵量为0.21 mg/天/虫。饲喂量应严格监控，充分满足需求的同时亦不宜过多，以免污染水质，影响其生长。饲养期间，如果培养液浑浊，可以用虹吸法吸出浑浊的培养液，再加入新鲜的培养液。开始出现摇蚊蛹时，就需要将结晶皿转移至养虫笼中。6.3 蛹期摇蚊蛹栖息在水层，蛹期不足1d即能羽化成成虫。摇蚊蛹期仍旧能够游动、取食，需每天投喂鱼饲料粉末，投饵量为0.21 mg/天/虫。6.4 成虫期成虫期间，笼具中置一培养皿，培养皿中放入一团沾有2%蔗糖水的脱脂棉，供成虫取食。摇蚊成虫寿命约4天，多数在羽化后的第一天婚飞、交配。每天在笼具内放置装有新鲜培养水
7、的结晶皿供摇蚊产卵，即能获得摇蚊卵。附 录 A（资料性附录）水中饱和溶解氧计算方法不同大气压和不同水温下饱和溶解氧（DO，mg/L）的计算公式如下：DO = ppo477.8T+32.26式中： p当地实测大气压，hPa；po标准大气压，hPa；T水温，取值范围为（040）。表A 不同大气压、温度下水中饱和溶解氧浓度（mg/L）压力(MPa)温度()0.090.0950.1000.1010.105012.9313.6514.37 14.6415.10112.5813.2913.99 14.2314.69212.2412.9313.61 13.8314.30311.9212.5813.25 13
8、.4513.92411.6112.2612.91 13.0913.56511.3111.9412.57 12.7513.21611.0211.6412.25 12.4212.87710.7511.3511.95 12.1112.56810.4811.0711.65 11.8112.24910.2310.8011.38 11.5311.95109.9910.5511.11 11.2511.67119.7510.2910.84 10.9911.39129.5210.0610.59 10.7511.13139.319.8110.36 10.5110.88149.119.6210.13 10.2810
9、.65158.919.419.9110.0610.41168.719.209.709.8510.19178.539.019.499.649.97188.368.839.309.459.77198.188.659.119.269.57208.038.488.949.029.37217.868.318.768.909.20227.728.168.608.739.03237.567.998.428.578.85247.437.858.278.418.70257.297.718.138.258.54267.167.577.988.118.39277.037.437.847.968.24286.917.
10、307.707.828.10296.797.187.577.697.96306.677.067.447.557.83316.566.947.327.427.69326.456.837.207.307.57336.346.707.077.187.44346.246.606.967.067.3335 6.13 6.49 6.84 6.94 7.20 36 6.04 6.39 6.74 6.83 7.09 37 5.94 6.29 6.63 6.72 6.98 38 5.84 6.19 6.53 6.61 6.87 39 5.74 6.08 6.42 6.51 6.76 40 5.66 5.99 6
11、.33 6.41 6.66 附录B（资料性附录）Elendt M4 培养基配方表B Elendt M4培养基组分储备液化合物浓度mg/L加到 10 L培养基中的量(mL)1氯化钙溶液CaCl2 2 H2O73 450402硫酸镁溶液MgSO4 7 H2O123 300103碳酸氢钠溶液NaHCO364 800104氯化钾溶液KCl5 800105阳离子溶液MnCl2 4 H2O3 6051LiCl3 060RbCl710SrCl2 6 H2O1 520CuCl2 6 H2O168ZnCl2130CoCl2 6 H2O1006阴离子溶液NaNO35485H3BO35 719NaBr320Na2M
12、oO4 2 H2O126KI6.5Na2SeO34.38NH4VO31.157硅酸盐溶液Na2 SiO3 9 H2O50 00028铁-EDTA溶液Na2EDTA 2 H2O5 0005FeSO4 7 H2O1 9919磷酸盐溶液KH2PO42865K2HPO436810维生素溶液Thiamindi hydrochlorid(VB1)7501Cyanocobalamin (VB12)10Biotin（VH）7.5附录C（资料性附录）摇蚊发育不同时期的特征表C. 摇蚊发育不同时期的特征描述发育阶段持续时间（d）特征图片卵期一般约2d摇蚊卵块刚产出时，长度约3 mm，遇水膨胀，为胶质圆柱状，卵块内
13、卵粒螺旋形规则排列，每个卵块月300-650 枚卵粒。卵粒长约250 m，宽约100 m。幼虫期一龄1d3d摇蚊幼虫由头、胸、腹三部分组成，胸部第一体节具一对原足，腹部最后一体节具有一对后原足、两队肛管和为毛若干，部分种、属幼虫还具有腹管、侧腹管。刚孵化出的一龄幼虫体长不足1 mm，体色浅，透明度高，显微镜下能清晰观察其身体结构（见图3）。二龄2d3d各龄期幼虫身体结构无明显差异，但尺寸和体色上的变化明显。从低龄期到高龄期，体色逐渐变深，由最初的无色逐步变为浅红、鲜红、深红。摇蚊幼虫一般分为4个龄期，但部分种仅分为3个龄期，也有部分种分为5个龄期。龄期的划分一般以头部骨质化的结构的尺寸作为测量指标，如头壳长、头壳宽以及触角长等。其中头壳宽是比较广泛使用的测量
