第二章_药物的杂质检查

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1、 第二章生物药物的杂质检查 药物的纯度要求 指药物纯净程度 反映了药物质量的优劣 含有杂质是影响药物纯度的主要因素 杂质是指 1 有毒副作用的物质2 本身无毒副作用 但影响药物的稳定性和疗效的物质3 本身无毒副作用 也不影响药物的稳定性和疗效 但影响药物的科学管理的物质 一 杂质的来源与种类 一 杂质的来源 1 生产过程中引入 1 原料 反应中间体及副产物 2 试剂 溶剂 催化剂类 3 生产中所用金属器皿 装置以及其他不耐酸 碱的金属工具所带来的杂质 例 阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得 制剂过程中可能产生新物质 1 在药物生产过程中引入杂质的途径为A 原料不纯或部分未反应完全的原料造成B 合成过程

2、中产生的中间体或副产物分离不净造成C 需加入的各种试剂产生吸附 共沉淀生成混晶等造成D 所用金属器皿及装置等引入杂质E 由于操作不妥 日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质 2 贮藏过程中产生 水解 氧化 分解 异构化 晶形转变 聚合 潮解和发霉等 易发生水解反应的结构 酯 内酯 酰胺 卤代烃 苷类等 易发生氧化反应的结构 醚 醛 酚羟基 巯基 亚硝基 双键等 二 杂质的种类 药物中的杂质按来源分为 1 一般杂质 如氯化物 硫酸盐 铁盐 重金属 砷盐 酸 碱 水分 易炭化物 炽灼残渣等 一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中 2 特殊杂质 指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质 如阿司

3、匹林中的游离水杨酸 异烟肼中的游离肼 甾体激素中的其他甾体 特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中 三 药物的纯度与化学试剂的纯度 药物的纯度考虑杂质的生理作用 药品只有两个等级 合格或不合格 化学试剂有很多等级 如基准试剂 优级纯 GR 分析纯 AR 化学纯 CP 色谱纯 光谱纯 例 临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是A 所含杂质的生理效应不同B 所含有效成分的量不同C 所含杂质的绝对量不同D 化学性质及化学反应速度不同E 所含有效成分的生理效应不同 二 杂质的限量检查 指药物中允许杂质存在的最大量 通常用百分之几或百万分之几来表示 砷 10ppm重金属 50pp

4、m 杂质量 杂质限量 杂质量 药品合格 药品不合格 一 药物的杂质检查法 1 对照法限量检查法 LimitTest 特点 不需知道杂质的准确含量 灵敏度法 对照法 比较法 操作 平行试验 比较两比色管的颜色或浊度 判断杂质限量是否符合规定 管2 对照管 管1 样品管 取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液 与一定量供试品配成的供试品溶液在相同条件下处理 比较反应结果 判断供试液中所含杂质限度是否符合规定 标准对照法 2 灵敏度法 系指在供试品溶液中加入试剂 在一定反应条件下 不得有正反应出现 特点 不需对照品 3 比较法 与空白比较 含量测定法 测定杂质的绝对含量 如测定吸收度 pH值等 特点

5、 不需对照品 二 杂质限量的计算 1 检查某药物中的砷盐 取标准砷溶液2ml 每1ml相当于1 g的As 制备标准砷斑 砷盐限量为0 0001 应取供试品的量为A 0 20gB 2 0gC 0 020gD 1 0gE 0 10g 已知 c 1 g ml 1 10 6g mlV 2mlL 0 0001 2 检查维生素C中的重金属时 若取样量为1 0g 要求含重金属不得过百万分之十 问应吸取标准铅溶液 每1ml 0 01mg的Pb 多少ml A 0 2mlB 0 4mlC 2mlD 1mlE 20ml 第三节杂质检查的原理 检查方法 一 利用药物和杂质在物理性质上的差异二 利用药物和杂质在化学性质

6、上的差异 一 利用药物和杂质在物理性质上的差异 一 臭味及挥发性的差异 二 颜色的差异 三 溶解行为的差异 四 旋光性质的差异 五 对光吸收性质的差异 六 吸附或分配性质的差异 一 臭味及挥发性的差异 药物 特别是挥发性药物 中如存在具有特殊气味的杂质 可以由气味判断该杂质的存在 乙醇 冰醋酸 苯酚 氟烷 浓过氧化氢如麻醉乙醚异臭检查 控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质 方法为 取供试品10ml 置于瓷蒸发皿中 使自然挥发 挥散完毕后 不得有异臭 二 颜色的差异 某些药物自身无色 但从生产中引入了有色的有关物质 或其分解产物有颜色 维生素C 三 溶解行为的差异 有的药物可溶于水

7、 有机溶剂或酸 碱中 而其杂质不溶 反之 杂质可溶而药物不溶 葡萄糖 中间产物 糊精 溶于热乙醇 糊精不溶 四 旋光性质的差异 测定旋光度可以用来区别不同的药物 检查杂质的含量 利用的是供试品与其特殊杂质在比旋度上的差异 举例 维生素C溶液 0 10g ml 20 5 21 5 本身没有旋光性的药物 杂质有 则可以通过限定药物溶液的旋光度值来控制相应杂质的量 旋光度 光学活性物质的液体或溶液使平面偏振光的振动面旋转的角度 以 表示右旋 以 表示左旋 比旋度 t 偏振光透过长1dm且1ml中含有1g旋光物质的溶液 在一定波长与温度下测得的旋光度 t cl 100 中国药典规定使用钠光谱的D线 5

8、89 3nm 测定药物在特定溶液中的旋光度 五 对光吸收性质的差异 药物和杂质的结构不同 因而对光吸收的性质往往有差异 分光光度法的优点 灵敏度高 简便 仪器已较普及 因此在药物的杂质检查中应用日益广泛 1 紫外分光光度法2 原子吸收分光光度法3 红外分光光度法4 荧光分析法 1 紫外分光光度法 当杂质在某一波长处有最大吸收 而药物在此无吸收时 可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的量 举例 规定葡萄糖注射液在284nm波长处的吸收度不得过0 32 即可控制其杂质5 羟甲基糠醛的量 头孢噻吩在237nm处规定吸收度范围0 65 0 72 测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸 测定值

9、偏小则说明产品降解 例 肾上腺素中肾上腺酮的检查 若药物在紫外区有明显吸收 而杂质吸收很弱或没有吸收 可以根据吸收度大小限制杂质的量 规定供试品吸收度的上下限幅度 可在一定程度上控制产品的纯度 头孢噻吩在237nm处规定吸收范围0 65 0 72 237nm的吸收特征是噻吩乙酰基产生的 测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸 测定值偏小则说明产品降解 3 红外分光光度法 在杂质检查中主要用于药物中无效或低效晶型的检查 甲硝咪唑C晶型在662cm 1处有较强吸收 其无效A晶型在640cm 1处有较强吸收 当供试品中含有A晶型时 在上述二波数处的吸收度比值将发生改变 R D1 D2 R D1 D2 六

10、 吸附或分配性质的差异 1 薄层色谱法2 纸色谱法3 高效液相色谱法4 气相色谱法简便 快速 灵敏度高 1 薄层相色谱法 TLC 设备简单 操作简便 分离速度快 灵敏度和分辩率较高 杂质对照品法 自身对照法 杂质对照品法与自身对照法联用 对照药物法5 灵敏度法 不允许有杂质斑点 1 杂质对照品法 适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况 要求供试品与所检杂质对显色剂所显的颜色应相同 显色灵敏度也应相同或相近 方法 根据限量 取供试品溶液和限度量的杂质对照品溶液 分别点样于同一硅胶薄层板上 展开 定位 检查 供试品中所含杂质的斑点 不得超过相应杂质的对照斑点 2 供试品自身对照法 适用于杂质的结构

11、不能确定 或无杂质对照品的情况 方法 将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液 与供试品溶液分别点加于同一薄层板上 展开 定位 检查 供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显示斑点颜色 4 对照药物法 当无适合的杂质对照品 尤其是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异 难以判断限量时 可用与供试品相同的药物作为对照品 此对照物中所含待检杂质需符合限量要求 且稳定性好 此外 少数药物还利用试验条件下显色剂对杂质的检测限来控制其限量 盐酸阿米替林 一定浓度点样于硅胶G薄层板上 以氯仿 甲苯展开 喷甲醛 硫酸显色 紫外灯下检视 除主斑点外 不得显其他斑点 2 纸色谱法 用于极性较大

12、物质的分离 分析 有时也用于检查放射性药物注射液中的放射化学杂质 方法 类似于薄层色谱法中的供试品自身对照法 3 高效液相色谱法分离效能高 专属性强和检测灵敏度高 可准确测量各组分的峰面积 内标法 外标法 不加校正因子的主成分自身对照法 加校正因子的主成分自身对照法 峰面积归一化法 1 内标法 内标法测定供试品中某个杂质或主成分含量 先以杂质对照品测定其校正因子 然后测定供试品中杂质的含量 2 外标法 测定供试品中某个杂质或主成分的含量 用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况 3 不加校正因子的主成分自身对照法将供试溶液稀释成一定浓度 作为对照液 分别取供试品溶液和对照品溶液进样 将供试品溶

13、液中各杂质峰面积及其总和 与对照液主成分峰面积比较 以控制供试品中杂质的量 特点 1 简单方便 无须对照品 2 适用于杂质与主成分峰面积相差悬殊时的杂质检查3 忽略了各杂质与主成分的响应值可能不同 4 加校正因子的主成分自身对照法 精密称取杂质对照品和待测成分对照品各适量 配制测定杂质校正因子的溶液 进样 记录色谱图 计算杂质的校正因子 此校正因子可直接载入各品种正文 用于校正杂质的实测峰面积 准确计算杂质含量 5 峰面积归一化法 测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的各色谱峰面积 计算各峰面积占总峰面积的百分率 粗略测量供试品中杂质的含量 特点 1 不需对照品 简便易行 2 记录图谱的时

14、间应为主峰保留时间的整数倍 3 通常只能粗略考察供试品的杂质含量 4 气相色谱法 峰面积归一化法 内标法3 外标法 二 化学法利用药物和杂质在化学性质上的差异 一 酸碱性的差异 二 氧化还原性的差异 三 杂质与一定试剂反应产生沉淀 四 杂质与一定试剂反应产生颜色 五 杂质与一定试剂反应产生气体 六 药物经有机破坏后检查杂质 二 利用药物和杂质在化学性质上的差异 一 酸碱性的差异利用杂质的酸 碱性 规定消耗滴定液的体积 规定PH值范围 指示剂法 二 氧化还原性的差异利用药物与杂质之间的氧化还原电位的差异进行检查 三 杂质与一定试剂反应产生沉淀 四 杂质与一定试剂反应产生颜色根据限量要求 规定 一

15、定反应条件下不得产生某种颜色 供试品在相同条件下呈现的颜色不得超过杂质对照品相应颜色 供试品在一定的条件下的吸收度不得过一定值 五 杂质与一定试剂反应产生气体砷 硫 碳酸盐 氨或胺盐 氰化物 六 药物经有机破坏后检查杂质含环状结构的有机药物中磷 硫 卤素及硒等杂质 不溶药物等 氧瓶燃烧法 Oxygenflaskcombustionmethod 将药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中燃烧 使待测元素从有机结合状态转变成无机离子 被事先装在瓶内的吸收液吸收 成为稳定的溶液状态 然后采用适当方法进行测定用于含卤素 硫 氮 硒等元素的有机药物的鉴别 检查和含量测定 仪器装置 操作方法 称样 将样品直接置无

16、灰滤纸上称量 吸收液水 NaOH 含碘 氯药物 例盐酸胺碘酮 甲状腺粉 甲状腺片水 NaOH H2O2 含溴 含硫药物 水 含氟药物 硝酸溶液 含硒药物 燃烧分解操作 通O21 2min 燃烧 注意 防爆 燃烧瓶应洗涤干净氧气要充足 燃烧应完全测定含氟药物应用石英燃烧瓶 一般杂质的检查 第四节 一般杂质的检查方法 一 一般杂质检查规则 药品检验操作标准 规定 1 遵循平行操作原则 1 仪器的配对性如纳氏比色管应配对 刻度线高低相差不超过2mm 砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致 2 对照品与供试品的同步操作 2 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过 2 1g不超过 1 3 正确的比色 比浊方法 4 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份 1 原理 中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用 生成氯化银白色浑浊液 与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯化银浑浊液比较 浊度不得更大 Cl AgCl 微量时浑浊 稀HNO3 AgNO3 二 氯化物检查法 对照法 A 取一定量供试品产生AgCl 浑浊 依法处理 稀HNO3AgNO3 同上处