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1、第九章不发酵革兰阴性杆菌 张楠 不发酵革兰阴性杆菌 定义 一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧 无芽胞的革兰阴性杆菌 多为条件致病菌 葡萄糖O F反应结果 不发酵菌主要特点 氧化酶 不动杆菌 嗜麦芽窄食单胞菌属除外 部分洋葱伯克霍尔德菌 O F试验 O 动力试验 多数有鞭毛 但半固体动力试验不明显 常采用镜检或鞭毛染色 肠道杆菌 非发酵菌 弧菌科鉴别 不发酵革兰阴性杆菌 第一节假单胞菌属 假单胞菌属细菌根据rRNA DNA同源性分为5群 其中 群最多见共12种细菌 代表菌种为铜绿假单胞菌 假单胞菌属多为条件致病菌 占非发酵菌感染的70 80 现把II V群分别独立为伯克霍
2、尔德属及窄食单胞菌属 假单胞菌属共同点 革兰阴性杆菌 无芽孢 无荚膜 单或丛鞭毛专性需氧氧化酶 O F O产生水溶性色素 二铜绿假单胞菌 假单胞菌属的代表菌种 假单胞菌感染主要为铜绿假单胞菌 分布广泛主要的条件致病菌 铜绿假单胞菌 形态染色 革兰阴性杆菌 无芽孢 无荚膜 单鞭毛 一 生物性状形态染色性 革兰阴性菌杆 呈球杆状或长丝状 长短不一 单个或短链排列 无芽胞 无荚膜 单端单鞭毛 运动活泼 培养特性 专性需氧 4 不长 42 可生长 血平板 典型的菌落扁平 湿润 毛玻璃样 金属光泽 有透明的溶血环 生姜味 菌落和培养基灰绿色普通平板 可产多种色素 主要有 绿脓素 兰绿色 可溶于水 和荧光
3、素 即青脓素 黄或黄绿色 只溶于水 从临床标本中分离的菌株大多产生此色素 90 铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征 18 24h 80 90 产生绿脓素和荧光素 铜绿假单胞菌产荧光素 铜绿假单胞菌产绿脓素 铜绿假单胞菌绿脓素 铜绿假单胞菌荧光素 麦康凯上可形成5种不同形态的菌落 典型型 灰绿色 大小不一 扁平湿润 边缘不齐 表面可见金属光泽 大肠菌群型 圆形凸起 灰白色半透明 粗糙型 菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙 侏儒型 细小无光泽 半透明菌落 粘液型 光滑凸起呈粘液状 生化反应 氧化酶 O F上能氧化分解葡萄糖 木糖产酸 精氨酸双水解酶 枸橼酸盐 硝酸盐 抵抗力 较强 临床分离株对多种
4、抗生素耐药 葡萄糖O F反应结果 二 致病性 可产生多种致病物质 菌毛 荚膜 胞外酶和溶血物质 内毒素 外毒素 除自然界外 也存在于人体皮肤上及与外界相通的腔道中 多为继发感染 如烧伤后的创面感染 也可引起肺炎 脑膜炎 尿道感染 严重时可引起败血症 死亡率甚高 三 微生物学检验1 显微镜检查 标本直接涂片革兰染色镜检 鞭毛染色镜检2 培养 标本接种血平板 Mac平板分离培养 血标本先增菌 再转种3 鉴定 初步鉴定 菌落特征 水溶性绿色色素 生姜气味 氧化酶 O F全面鉴定 色素不典型者需全面鉴定 铜绿假单胞菌 检验程序 荧光假单胞菌 革兰阴性杆菌 单端丛鞭毛专性需氧营养要求不高 普通平板 Ma
5、c平板可生长最适生长温度25 30 4 生长 35 42 不生长产生水溶性荧光素 青脓素 不产绿脓素氧化酶 O F O 卵磷脂酶 明胶液化 具有嗜冷性 可在冰箱储存血中繁殖 恶臭假单胞菌 革兰阴性杆菌 单端丛鞭毛专性需氧最适生长温度25 30 4 及42 不生长产生水溶性荧光素 青脓素 不产绿脓素 陈旧培养物有腥臭味氧化酶 O F O 卵磷脂酶 明胶液化 OF试验 O氧化酶 精氨酸水解 葡萄糖酸氧化 氮气 假单胞菌鉴定程序 第二节伯克霍尔德菌属 属于rRNA第II群主要有马勒伯克霍尔德菌 伪马勒伯克霍尔德菌 洋葱伯克霍尔德菌等条件致病菌 马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌 鼻疽病与类鼻疽病的
6、病原体2004年NCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌肺鼻疽病 皮肤鼻疽病 内脏脓肿 菌血症 脓毒血症 生物学特性 革兰阴性杆菌无芽胞 无荚膜伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛 1 4根 42 生长马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力 42 不生长 洋葱伯克霍尔德菌 染色 细小阴性杆菌菌落 细小透明的菌落 可产黄色素 紫色素生化 O F非发酵 有动力 多数氧化酶阳性 缓慢阳性 三 嗜麦芽窄食单胞菌 属于假单胞菌科的rRNA同源群 嗜麦芽窄食单胞菌 S maltophilia 和S africana 分类 临床意义 为条件致病菌呼吸道 泌尿道 伤口等部位感染 菌血症及心内膜炎 在不发酵菌引起的感染中 仅次
7、于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌 居临床分离阳性率的第三位 生物学性状 形态与染色 革兰阴性 端鞭毛 1 8 根无芽孢 无荚膜培养特性 生长温度为35 4 不生长血琼脂 普通培养基均能生长血平板上 菌落中等大小 圆形 光滑 湿润 产生不溶血的黄色色素 嗜麦芽窄食单胞菌菌的菌落形态 生化鉴定 氧化酶阴性O F氧化型有动力液化明胶水解七叶苷赖氨酸脱羧酶阳性氧化分解麦芽糖DNA酶阳性 药物敏感试验及结果解释 治疗首选磺胺类 TMP SMZ 喹锘酮类 环丙氟派酸或替卡西林 棒酸泰能 Imipenem 天然耐药药敏试验纸片法仅有三种抗生素 左氧氟沙星 米诺环素 复方磺胺有折点 其他药敏试验应选用肉汤 琼脂稀
8、释法作MIC 或采用E TEST的方法 洋葱与嗜麦芽的鉴别 第四节不动杆菌 不动杆菌 Acinetobacter 为一群氧化酶阴性 不发酵糖类 无动力的革兰阴性菌 含6个种 醋酸钙不动杆菌洛菲不动杆菌溶血不动杆菌鲍曼不动杆菌琼氏不动杆菌约翰逊不动杆菌 一 生物学性状形态与染色革兰阴性球杆菌 常成双排列 不易退色 多数有荚膜 无芽孢 无鞭毛 培养特性专性需养 营养要求不高 最适温度35 鲍曼不动杆菌42 可生长 血平板上圆形凸起 2 3mm 光滑 边缘整齐 灰白色的菌落 部分菌落呈黏液状 溶血不动杆菌可形成 溶血环 不产生色素 麦康凯平板形成粉红色菌落 革兰阴性球杆菌 常成双排列 不易退色 鲍曼
9、不动杆菌在血琼脂平板上的菌落特征 18 24h 鲍曼不动杆菌在麦康凯琼脂平板上的深红色菌落 19 24h 生化反应触酶阳性 葡萄糖O F为氧化型 氧化酶 硝酸盐还原 动力 生化三阴 二 致病性该菌广泛存在于自然界 属条件致病菌 也是医院感染的常见病菌之一 常引起呼吸道 消化道和泌尿生殖道感染 三 鉴定 1 直接镜检 染色为革兰阴性球菌或球杆菌 成双排列 2 生化反应 氧化酶 硝酸盐还原 动力 不发酵葡萄糖 符合上述即可判定为不动杆菌属的细菌 4 两种不动杆菌的鉴别 第五节产碱杆菌属 粪产碱杆菌 木糖氧化产碱杆菌 木糖氧化产碱杆菌氧化亚种 木糖氧化产碱杆菌脱硝亚种 产碱杆菌属 主要特征 革兰阴性
10、杆菌 有周鞭毛 无芽孢 无荚膜专性需氧营养要求不高 普通平板和Mac平板上可生长氧化酶 O F 不分解任何糖是医院感染病原菌之一 粪产杆菌多见 产碱杆菌属 鉴定要点 革兰阴性杆菌氧化酶 O F 动力 硝酸盐还原 亚硝酸盐还原 KIA 底层斜面不变色 第六节黄杆菌科 革兰阴性杆菌 无鞭毛专性需氧 营养要求不高 普通平板上生长 形成黄色色素麦康凯平板上不生长氧化酶 O F O 黄杆菌 黄色色素 第七节莫拉菌属 微生物特性 革兰阴性球杆菌呈双短链状排列 具有多形性 微生物检验 分离培养 营养要求较高生长温度32 35 血琼脂平板上生长良好针尖大小的圆形凸起 光滑 半透明 边缘整齐不溶血的菌落 微生物
11、检验 鉴定 酶阳化氧性触酶阳性无动力不分解任何糖类吲哚试验阴性 第六节军团菌属 分类 军团菌属 Legionella 属于军团菌科 Legionellaceae 常见的与人类疾病有关的军团菌 嗜肺军团菌 Legionellapneumophila 米克戴德军团菌 L micdadei 长滩军团菌 L longbeachae 杜莫夫军团菌 L dumoffii 波兹曼军团菌 L bozemanii 临床意义 引起肺炎型和非肺炎型 庞蒂亚克热Pontiacfever 感染肺炎型 多器官损害 肺部 消化道及神经系统症状及体征 致死率高医院感染可高达23 慢性心 肺 肾病变 艾滋病或接受免疫抑制剂者易
12、发本病 且死亡率高达45 临床意义 空气 乳胶微粒传播发病机制 内毒素和细胞产生的多种酶 裂解红细胞 消化卵黄囊 生物学特性 革兰阴性杆菌菌体呈线状无芽胞 无荚膜 有端鞭毛或侧鞭毛严格需氧触酶阳性可液化明胶不分解糖类部份菌株氧化酶阳性 微生物检验 分离培养 营养要求苛刻 生长缓慢生长温度为35 最适pH6 7 7 0初次分离必须采用 BCYE 3 5天可形成1 2mm直径的光泽菌落 核酸检测 是快速特异的方法 采用DNA探针及PCR扩增rRNA的方法均可用于军团菌的快速诊断抗体检测 是检测军团菌感染临床常用手段 常采用方法 IFA MAA TAT ELISA法等 常见不发酵菌的鉴定双岐索引 O
13、F试验 O氧化酶 精氨酸水解 葡萄糖酸氧化 氮气 假单胞菌鉴定程序 思考题 1 什么叫非发酵菌 有何特点 2 铜绿假单胞菌在形态和培养特性有何特性 如何鉴定铜绿假单胞菌 3 如何鉴定不动杆菌 测验1 关于铜绿假单胞菌 错误的是A革兰阴性杆菌B氧化酶 触酶 C硝酸盐还原 D产生水溶性蓝绿色素E菌落有金属光泽 测验2 下列哪项是非发酵菌的主要特征A需氧或兼性厌氧B革兰阴性杆菌C营养要求不高D无芽孢E不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用糖 测验3 对革兰阴性杆菌出现下列哪种特征 可怀疑为非发酵菌A氧化酶 B发酵葡萄糖C动力阴性D触酶 E氧化利用麦芽糖 测验4 关于不动杆菌错误的是A氧化酶 B硝酸盐还原 C革兰阴性杆菌 形态多为球杆状D无动力E专性需氧
