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1、肝炎病毒及其检验 肝炎病毒 hepatitisviruses HV 是指以侵害肝脏为主引起病毒性肝炎的一组病原体 目前公认的肝炎病毒至少有5种 即甲型肝炎病毒 HAV 乙型肝炎病毒 HBV 丙型肝炎病毒 HCV 丁型肝炎病毒 HDV 和戊型肝炎病毒 HEV 近年还发现一些与人类肝炎相关的病毒 如GB病毒 C 庚型肝炎病毒 GBV C HGV 和输血传播性病毒 TTV 病毒 但由于致病性不清 均未被最后确定和命名 此外 还有一些病毒如黄热病毒 CMV EBV 风疹病毒等虽也可引起肝炎 但不列入肝炎病毒范围之内 属于不同的科family和属genus 第一节甲型肝炎病毒 甲型肝炎病毒 hepati
2、tisAvirus HAV 首先是Feinstone于1973年应用免疫电镜技术在急性期肝炎患者粪便中发现的 1982年国际病毒命名委员会将其分类为小RNA病毒科肠道病毒属72型 近年又被单列为肠道病毒科的嗜肝RNA病毒属 heparnavirus 世界各地HAV流行状况 1 形态与结构 一 生物学性状 球形颗粒 无包膜衣壳 20面体立体对称 由VP1 VP4等4种多肽组成 其中VP1是主要的衣壳蛋白 基因组 线状 ssRNA 稳定性高 2 血清型 至今 世界各地HAV只发现一个血清型 3 易感动物和细胞培养动物模型黑猩猩 狨猴及猕猴等灵长类动物易感 且可传代 细胞培养HAV生长缓慢 接种后约
3、需4周才可检出抗原HAV可用非洲绿猴肾细胞 人胚肾细胞 传代猴肾细胞 Vero BSC 1 FRhK 4 FRhK 6 人胚肺2倍体成纤维细胞和人肝癌细胞株 PLC PRF 5 等 4 抵抗力 较一般肠道病毒抵抗力强在淡水 海水 污水 泥沙毛蚶等水产品中存活数天至数月 HAV易通过食物和水在人群中传播 温度60 可存活4h80 5min完全灭活100 1min完全灭活4 其抗原性和组织培养活性可保持1年 20 可存活多年并保持传染性 化学消毒剂3 福尔马林5min均可灭活70 乙醇3min部分灭活不耐受冷冻干燥 对紫外线敏感 鉴于HAV有相当大的抵抗力 因此对肝炎患者及其排泄物处理应特别小心
4、1 传染源与传播途径传染源 多为患者和隐性感染者 患者潜伏期后期及急性期的血液和粪便均有传染性 传播途径 主要通过粪 口途径传播经食物传播经食用受污染的贝壳类水产品经产 供 销环节污染的食物经水传播卫生条件差的国家和地区特点发病者多饮用同一水源 病例分布与供水范围一致日常生活接触传播 二 致病性与免疫性 致病机制HAV主要侵犯儿童和青年 且多为隐性感染 HAV口小肠淋巴结内增殖血 病毒血症 肝细胞内增殖致病 出现临床症状 2 致病性与免疫性 免疫性感染后可产生持久免疫力 早期 IgM 同时 从粪便中检出sIgA抗体 恢复期 IgG 并可持续多年 特异细胞免疫应答 一 病毒检测 潜伏期末期和急性
5、期早期 取粪便用免疫电镜检测HAV颗粒 用放射免疫 RIA 或酶免疫 EIA 法检测HAV的抗原 二 血清学检查 检测抗HAV常用RIA和EIA法 检测抗HAVIgM有助于早期诊断 测抗HAVIgG有助于流行病学调查 测粪便中抗HAVIgA也有助于诊断 三 病毒核酸检测 应用cDNA RNA分子杂交技术及PCR技术检测HAV的RNA 方法特异 敏感 三 微生物学检查法 HAV感染后以隐性感染和无黄疽型病例占多数 预防 一般性预防 搞好卫生 特异性预防 我国使用减毒甲型肝炎活疫苗 H2株和L1株 国外已生产灭活疫苗 HAV基因工程疫苗正在研制中 治疗 甲型肝炎为自限性疾病 经治疗可痊愈 不转慢性
6、亦不留后遗症 四 防治原则 第二节乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 hepatitisBvirus HBV 属嗜肝DNA病毒科 hepadnaviridae HBV是乙型肝炎病原体 主要经输血 注射 性行为和母婴传播 起病徐缓 部分患者可转为慢性 少数还可导致肝硬化和肝癌 HBV感染的分布 小球形颗粒 直径22nm 成分HBsAg 不含HBVDNA和DNA聚合酶 无感染性 管形颗粒 直径22nm 长度在50 700nm之间 成分HBsAg 大球形颗粒 即Dane颗粒 直径42nm 具有感染性的完整病毒颗粒 一 生物学性状 1 形态与结构 乙肝病毒的三种颗粒 小球形颗粒 大球形颗粒 Dane颗粒 管形颗
7、粒 完整的HBV颗粒亦称Dane颗粒 具有双层核衣壳结构 由内向外分为分为三部分 核心 DNA和DNA多聚酶 内衣壳 为HBcAg 在酶和去垢剂作用下可暴露HBeAg 外壳 包膜 厚7nm 双层脂质蛋白质 含有HBsAg PreS1和PreS2 核心蛋白HBcAg HBsAgS蛋白 2 HBV基因结构HBVDNA是由长链L 负链 和短链S 正链 组成的不完全双链环状DNA 短链的长度相当于长链的50 85 HBVDNA长链载有病毒蛋白质的全部密码 有4个开放读码框架 ORF 分别称为S C P和X区 能编码全部已知的HBV蛋白 3 病毒蛋白 外壳蛋白 帮助HBV吸附至肝细胞受体 具有抗原性 在
8、病毒繁殖和复制过程中发挥重要作用 能刺激机体产生保护性抗体 HBsAg最早出现的血清学标志之一是HBV感染的基本标志HBsAg阳性见于乙肝的潜伏期 急性期慢性乙肝病毒携带与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌注意HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染 S基因突变或低水平表达 HBsAb 特异性中和抗体 保护性抗体HBsAb阳性可见于乙型肝炎恢复期 在HBsAg消失后间隔一定时间HBsAb出现隐性感染的健康人 自身产生了免疫力注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白 HBIG 后 产生的主动或被动免疫 3 病毒蛋白 核壳蛋白HBcAg C基因编码 结构蛋白 具有较强的免疫原性 仅存在感染的细胞中 H
9、BeAg 前C基因编码 非结构蛋白 可溶性蛋白 使HBV逃避宿主机体的免疫清除 得以在携带者体内长期存在 可被分泌到血清中 HBcAg不能从血清中直接检出Dane颗粒经去垢剂处理HBcAg释放检测HBcAb非中和抗体 分IgM和IgG主要见于慢性感染和既往感染HBcAbIgM通常在出现症状时即可检出 一般持续约6个月 提示HBV复制 是急性感染的重要指标 也是慢性活动性肝炎的重要标志HBcAbIgG在抗 HBcIgM下降及消失后出现 可伴随感染者终生存在 HBeAg 几乎与HBsAg平行出现 HBeAg可作为HBV复制及血清具有传染性的标志 HBeAb阳性主要见于HBsAg阳性的患者 急性乙型
10、肝炎进入恢复期时HBeAg消失 HBeAb阳性 但HBeAb亦见于携带者及慢性乙型肝炎血清中 检测HBV抗原 抗体检测的项目主要是HBsAg和HBsAb HBeAg和HBeAb 以及HBcAb 俗称的 两对半 必要时也可检测PHSA PreS1和PreS2的抗原和抗体 上述各项检查组成一套乙型肝炎病毒抗原抗体检测系统 HBV血清标志 病毒抗原抗体系统检测结果分析 4 血清HBVDNA检测核酸分子杂交及PCR技术检测HBVDNA可用于乙型肝炎的诊断及流行病学调查 常用斑点杂交法将特异的HBVDNA探针与患者血清进行杂交检测血清中HBVDNA 方法敏感 特异 能测出0 1 1pg核酸 用PCR技术
11、检测患者血清中HBVDNA 在临床上也已用于辅助诊断 特别是定量PCR能测出DNA拷贝数量 可做为药物疗效的考核指标 动物模型与细胞培养 黑猩猩是研究HBV的最佳动物模型 动物模型 树鼩 土拨鼠 地松鼠 HBV尚不能在细胞培养中分离培养 目前采用病毒DNA转染肝癌细胞系 乙肝防治 临床特点 1 潜伏期 2 6个月 急性感染 慢性乙型肝炎 肝硬化 2 临床类型 抵抗力 HBV对外界环境的抵抗力较强 对低温 干燥 紫外线均有耐受性 自然条件下 可以停留在一些物体表面一周而不失去感染性 60 10小时 100 10分钟 感染性消失不被70 乙醇灭活煮沸30分钟 121 高压20分钟 可灭活 HBV进
12、入血液的主要途径 母婴垂直传播 我国现有HBsAg阳性者约1 4亿人 其中85 通过母婴传播 垂直传播是我国乙型肝炎蔓延和高发的主要原因 也有少数为父婴传播者 母婴传播主要是通过产道感染或宫内感染 血液或血制品传播 被HBV污染的血制品如白蛋白 血小板或血液输给受血者 多数会发生输血后肝炎 另外血液透析 肾透析时也会感染HBV 医源性传播 被HBV污染的医疗器械 如手术刀 牙钻 内窥镜 腹腔镜等 均可传播HBV 家庭内密切接触 主要指性接触 日常生活密切接触 如同用一个牙刷 毛巾 茶杯和碗筷 均有受HBV感染的可能 HBV可通过破损粘膜进入密切接触者的体内 公共场所 理发店 美容院等容易被HB
13、V污染 如浴池 剃刀等均可传染HBV 防治原则 控制传染源 切断传播途径人工自动免疫 疫苗 血源性 基因工程 人工被动免疫 高效价人血清球蛋白 HBIg 防治原则 基因工程疫苗 优点 效果出现抗 HBs的阳性率80 3 96 2 Becloned Yeast Inlargefermenters HBsAgprotein vaccine FirstrecombinantantigenvaccineHepatitisBvaccine HBsAg Purified induce Protectiveantibodies IfyouhaveneverhadhepatitisB youcanget3sh
14、ots andgetlonglastingprotection HepatitisBcanbeprevented 6monthsold HepatitisBVaccine BabyShotsforHepatitisBifthemotherhasHepatitisB 1 2monthsold HepatitisBVaccine Birth H BIG HepatitisBVaccine 2008 5 19 第一个WORLDHEPATITISDAYAmInumber12 全球每12人中就有一个是乙肝或丙肝病毒携带者 婴幼儿感染幅度下降过半成人无乙肝抗体 15 59岁 乙肝抗病毒治疗 1 干扰素 普
15、通干扰素 长效干扰素 该类药物的优点是有固定疗程 不产生病毒耐药 HBeAg HBsAg血清转换率高且应答持久 具有调节免疫和抗病毒双重功效 缺点 需皮下注射 价格较高 不良反应较多等 乙肝抗病毒治疗 2 核苷 酸 类似物这类药物的优点是 三性 有效性 易行性 安全性 但是也有疗程不固定 易发生病毒耐药 停药后易复发等的缺点 拉米夫定 阿德福韦酯 替比夫定 恩替卡韦 替诺福韦酯 克拉夫定等 第三节丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒 HepatitisCvirus HCV 引起丙型肝炎 HCV主要经血或血制品传播 目前占输血后肝炎的80 90 在我国丙型肝炎流行率为2 1 其临床和流行病学特点类似乙型肝炎
16、 但症状较轻 演变为慢性者多见 部分患者可发展为肝硬化或肝癌 一 生物学性状 HCV属于黄病毒科 flaviviridae 丙型肝炎病毒属 其生物学性状及基因结构与黄病毒相似 HCV呈球形 其直径约为30nm 60nm 外有脂蛋白包膜 核酸为 ssRNA 5 端UTR核酸序列保守性强 病毒株间差异小 可用于诊断 包膜蛋白区和非结构蛋白1区基因易变异 包膜蛋白抗原性变异 不被抗体识别 病毒持续存在 易发展成慢性 至今HCV的细胞培养尚未成功 黑猩猩是HCV唯一易感动物 HCV对一般理化消毒剂敏感 对氯仿 乙醚等有机溶剂敏感 紫外线照射 100 5min 20 次氯酸 福尔马林 1 1000 均可使HCV失活 HCV主要通过输血或血制品 注射和母婴传播 潜伏期为2 26w 平均7 4w 但由输血或血制品引起的丙型肝炎潜伏期较短 大多数在输血后5 12w发病 大多数患者不出现症状或症状较轻 多为无黄疽型 50 的患者演变为慢性肝炎 部分发展为肝硬变 甚至原发性肝癌 关于HCV感染的慢性化机制 目前认为HCV并不直接引起肝细胞损害 而主要是通过免疫病理损伤和细胞凋亡导致肝细胞破坏 二 致病性和
