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1、书山有路病毒中和试验测定法1 固定病毒稀释血清法 法 本法用于抗血清的中和价 试验需先滴定病毒毒价 试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID50 再将待检血清倍比稀释加等量200个TCID50 ml的病毒液 混匀后37 1h 每一稀释度接种24孔细胞培养板4孔 每孔0 2ml 5 C02培养箱培养一定时间后 记录出现CPE孔数 以不出现CPE数和接种数的比为中和比值 按Karber法计算中和价 其公式如下 LogTCID50 L d S 0 5 TCID50用对数计算 L为病毒最低稀释度的对数 d为组距 即稀释系数 在10倍系列稀释则为 1 S为各组CPE与接种数比值之和 50 中和试验
2、举例 1 L 1 d 0 3 S 4 4 4 4 4 4 4 4 2 4 4 5代入Karber公式 LogND50 1 0 3 4 5 0 5 2 2该抗血清ND50 半数中和单位 为10 2 2 即1 160 则其中和价为160ND50 ml 可以简写成160 2 固定血清稀释病毒法 法 本法用于测定抗血清的中和指数 将病毒原液10倍系列稀释 分列于2排无菌管 第一排加等量正常血清 对照组 第二排加待检血清 中和组 混匀后 置37 1h 分别接种细胞板孔 或鸡胚 实验动物 进行培养 记录CPE 鸡胚 动物死亡数 计算TCID50 或LD50 按下式计算中和指数 中和组TCID50 或LD50 中和指数 对照组TCID50 或LD50 查反对数 即得该待检血清的中和指数 通常中和指数 50者判为阳性 10 49为可疑 10者为阴性 例如 对照组滴度的LD50 10 6 5 书山有路中和组滴度的LD50 10 4 5中和指数 10 6 5 4 5 102 0 100中和指数的对数Log Log100 2 0一般来说 以10倍稀释进行滴度测定 Log10 1 因此小于10 11 7 则是有意义的 2
