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1、体液及排泄物检查 刘丽 2019 1 脑脊液检查 正常脑脊液外观无色 透明 比重1 003 1 008 平均1 005 PH为7 35 7 40 呈弱碱性 脑脊液PH较血PH稳定 脑脊液的酸碱状态主要受以下因素影响 血液和脑脊液间在不同部位的CO2弥散量 通过血脑屏障H 和HCO 2的分布 从脑脊液神经细胞释放的酸性代谢产物的速度等 2019 2 脑脊液检查 脑脊液细胞的来源及功能 在正常情况下 脑脊液中的细胞很少 其中大多数为淋巴细胞 少数为单核细胞 偶见中性粒细胞 这些细胞一方面可提示不同原因所致的病变存在 另一方面也反映了脑脊液细胞在各种疾病状态下的作用 脑脊液细胞的功能因细胞种类不同而
2、功能不同 淋巴细胞及其各种亚群是免疫反应的主要活性细胞 参与体液和细胞免疫反应 并对免疫反应有调节作用 单核吞噬细胞除具有吞噬作用外 还具有抗原的提纯 免疫调节及分泌等重要的生物学功能 中性粒细胞在许多类型的感染过程中首当其冲 2019 3 脑脊液检查 标本处理 标本收集后立即送检 一般不超过1小时 将CSF分别收集于3个无菌试管 每管1 2ml 第一管 细菌培养 无菌 第二管 化学或免疫第三管 一般形状和显微镜检查注意 收到标本立即检查 久置细胞破坏 影响计数和分类 葡萄糖降低 病原菌破坏或溶解 细胞计数避免标本凝固 遇高蛋白标本时EDTA抗凝 2019 4 脑脊液检查 一般性状检查 主要观
3、察颜色与透明度 白细胞200 l或红细胞400 l可致轻微混浊 白雾状混浊 微黄混浊 黄绿混浊 灰白混浊 1 红色标本为血性 区别蛛网膜下隙出血或穿刺损伤 将血性脑脊液试管离心沉淀 1500r min 黄色 超过4h 约90 的患者12h内发生出血 无色 多为穿刺损伤或因病变所致新鲜出血 红细胞皱缩 陈旧性出血 在穿刺外伤引起出血时也可见到 因脑脊液渗透压较血浆高所致 2019 5 脑脊液检查 一般性状检查 2 黄色 陈旧性出血 脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留 黄疸患者 171 257 脑脊液蛋白 1 5g L 红细胞 100 109个 L也可呈黄色 3 米汤样 脓细胞增多 各种化脓性细菌引起的脑膜
4、炎 4 绿色 绿脓假单胞菌 肺炎链球菌 甲型链球菌引起脑膜炎 高胆红素血症和脓性脑脊液 5 褐色或黑色 见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素瘤 2019 6 脑脊液检查 蛋白定性 潘氏实验原理 脑脊液中球蛋白与苯酚结和 可形成不溶性蛋白盐而下沉 产生白色浑浊或沉淀 试剂 5 酚溶液 取纯酚25ml 加蒸馏水至500ml 用力振摇 置37度温箱1 2天 待完全溶解后 置棕色瓶内保存 操作 取试剂2 3ml 至于小试管内 用毛细滴管滴入脑脊液1 2滴 衬以黑色背景 立即观察结果 判断 阴性 清晰透明 不显雾状 极弱阳性 微呈雾状 在黑色背景下才能看到 阳性 灰白色云雾状 2 白色混浊 3 白色浓絮状沉
5、淀 4 白色凝块 临床意义 正常时多为阴性或极弱阳性 有脑组织和脑脊髓膜疾患时常呈阳性反应 如化脓性脑脊髓膜炎 结核性脑脊髓膜炎 梅毒性中枢神经系统疾病 脊髓灰白质炎 流行性脑炎等 脑出血时常呈强阳性反应 如外伤性血液混入脑脊液中 亦可呈阳性反应 2019 7 脑脊液检查 有形成分检查 1 细胞总数对澄清的脑脊液混匀后直接滴入计数池 计数10个大方格内红 白细胞数 其总和即为每微升的细胞数 例如 细胞总数200 l再换算成每升脑脊液中的细胞数 2 混浊或带血脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀脑脊液20 l加入含红细胞稀释液0 38ml的小试管内 混匀后滴入计数池 低倍镜计数4个大方格的细胞总数 乘
6、以50即为每微升脑脊液的细胞总数 3 白细胞计数 非血性标本 小试管内放入冰乙酸1 2滴 转动试管 使内壁沾有冰乙酸后倾去 然后滴入混匀脑脊液3 4滴 计数白细胞数 血性标本 将混匀的脑脊液用1 乙酸溶液稀释后进行计数剔除因出血而来的白细胞数用下式校正 脑脊液白细胞校正数 脑脊液白细胞测定值 出血增加的白细胞数出血增加的白细胞数 外周血白细胞数 脑脊液红细胞数 外周血红细胞数 2019 8 脑脊液检查 4 细胞分类直接分类法 白细胞计数后 将低倍镜换为高倍镜 直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞 淋巴细胞和单核细胞 和多核细胞 数100个白细胞以百分率表示 若白细胞少于100个直接
7、写出单核 多核的具体数字染色分类法 如果直接分类不易区别细胞时 应将脑脊液离心沉淀 取沉淀物2滴加正常血清1滴 推片制成均匀薄膜 待干 瑞氏染色后 用油镜分类 参考区间 正常脑脊液中无红细胞 仅有少量白细胞 白细胞计数 成人0 8 106 L淋巴40 80 单核15 45 中粒0 6 儿童0 15 106 L新生儿0 30 106 L淋巴5 35 单核50 90 中粒0 8 以淋巴细胞及大单核细胞为主 两者之比7 3 偶见内皮细胞 2019 9 脑脊液检查 革兰染色临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时应作细菌性涂片检查 将脑脊液立即2000r min离心15min 取沉淀物涂片2张 涂
8、片应在室温中或置37 温箱中干燥 切勿以火焰烤干 已干燥涂片经火焰固定后 一张涂片用0 5 1 亚甲蓝染色30s 另一张作革兰染色 注意细胞内外的细菌形态 报告时应予以描述 抗酸染色临床怀疑为结核性脑脊髓膜炎时应作抗酸染色 真菌检查取脑脊液以2000r min离心15min 取沉淀物涂片 加优质经过过滤的细墨汁1滴 混合 加盖玻片检查 先用低倍镜检查 如发现圆形透光小点 中间有一细胞大小的圆形物质 转高倍镜仔细观察 新型隐球菌直径5 20 m 可见明显厚荚膜 有出芽的球形孢子 每次镜检中空白墨水滴作对照 以防墨汁污染 新型隐球菌病人约有50 阳性率 2019 10 脑脊液检查 临床意义 中枢神
9、经系统病变的脑脊液 细胞数可增多 其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关 中枢神经系统病毒感染 结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时 细胞数可中度增加 常以淋巴细胞为主 细菌感染时 化脓性脑脊髓膜炎 细胞数显著增加 以中性粒细胞为主 脑寄生虫病时 可见较多的嗜酸性粒细胞 脑室或蛛网膜下隙出血时 脑脊液内可见多数红细胞 2019 11 精液检查 标本收集在3个月内检查2次至数次 二次之间间隔应 7天 但不超过3周 采样前至少禁欲3天 但不超过7天 采样后1h内送到检验科 用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液 不宜采用避孕套内的精液 某些塑料容器具有杀精子作用 但是否合适应事先做试验 应将射精精液全部送检
10、 传送时温度应在20 40 容器必须注明患者姓名和 或 识别号 标本号或条码 标本采集日期或时间 和所有体液一样 精液也必须按照潜在生物危害物质处理 因为精液内可能含有肝炎病毒 人类免疫缺陷 病毒 和疱疹病毒等 2019 12 精液检查 一般性状检查一般性状检查包括记录精液量 颜色 透明度 黏稠度和是否液化 外观 正常精液呈灰白色或乳白色 不透明 棕色或红色提示出血 黄色可能服用某种药物 精子浓度低时精液略显透明 正常精液是一种均匀黏稠的液体 射精后立即凝固 30min后开始液化 若液化时间超过60min考虑为异常 应记录这种情况 量 用刻度量筒或移液管测定 正常一次全部射精精液量约2 5ml
11、 精液量过多或过少是不育的原因之一 黏稠度 在精液全部液化后 用Pasteur滴管吸入精液 然后让精液依靠重力滴落 并观察拉丝长度 正常精液呈水样 形成不连续小滴 黏稠度异常时 形成丝状或线状液滴 长度大于2cm 也可使用玻璃棒或注射器测定黏稠度 酸碱度 用精密试带检查 正常人pH为7 0 8 0 平均7 8 2019 13 精液检查 精子存活率 精子存活率用活精子比例来反映 伊红染色法试剂 5g L伊红Y染色液 伊红Y0 5g 加生理盐水至100ml 操作 1 在载玻片上加新鲜精液和伊红溶液各1滴 混匀后 加上盖玻片 30s后在高倍镜下观察 活精子不着色 死精子染成红色 2 计数200个精子
12、 计算未着色 活精子 的百分率 2 伊红 苯胺黑染色法试剂 1 10g L伊红Y染色液 伊红1g 加蒸馏水至100ml 2 100g L苯胺黑染色液 苯胺黑10g 加蒸馏水至100ml 操作 1 取小试管 加新鲜精液和伊红溶液各1滴 混匀 2 30s后 加苯胺黑溶液3滴 混匀 3 30s后 在载玻片上 加精液 伊红 苯胺黑混合液1滴 制成涂片 待干 4 油精下观察 活精子为白色 死精子染成红色 背景呈黑色 计数200个精子 计算未着色活精子百分率 2019 14 精液检查 精子存活率精子低渗膨胀试验 HOS 试剂 膨胀液 枸橼酸纳0 735g 果糖1 351g 加蒸馏水至100ml 分装 20
13、 冷冻保存 使用前解冻 并充分混匀 操作 1 取小试管 加1ml膨胀液 37 预温5min 2 加0 1ml液化精液 轻轻搅匀 在37 孵育至少30min 3 在相差显微镜下观察精子 膨胀精子为尾部形状发生变化的精子 即活精子 计数200个精子 计算膨胀精子的百分率 参考区间 在排精30 60min内 约有70 以上精子应为活动精子 精子低渗膨胀试验应有60 以上精子出现尾部膨胀 2019 15 精液检查 精子活力WHO推荐一种无需复杂设备而能进行简单精子活力分级的方法 操作 取10 l标本涂片 连续观察至少5个视野 对200个精子进行分级 首先计数a级和b级精子 随后在同一视野内计数c级和d
14、级精子 结果判断 根据下述标准把精子活力分为a b c d四级 a级 快速前向运动 37 时速度 25 m s 或20 速度 20 m sb级 慢速或呆滞的前向运动 c级 非前向运动 5 m s d级 不动 参考区间 正常精液采集后60min内 a级 b级精子达50 以上 2019 16 精液检查 精子计数 试剂 精子稀释液 碳酸氢钠5g 40 甲醛溶液1ml 蒸馏水100ml 待完全溶解过滤后使用 操作 1 于小试管内加精子稀释液0 38ml 吸液化精液20 l 加入稀释液内摇匀 2 充分混匀后 滴入改良Neubauer血细胞计数池内 静置1 2min 待精子下沉后 以精子头部作为基准进行计
15、数 3 如每个中央中方格内精子少于10个 应计数所有25个中方格内的精子数 4 如每个中央中方格内精子在10 40个 应计数10个中方格内的精子数 5 如每个中央中方格内精子多于40个 应计数5个中方格内的精子数 结果判断 精子数 计数结果 25 1 20 103 ml计数中方格数计数池高度 计数结果 1 5 105 ml计数中方格数计数池高度 参考区间 正常男性 20 106 ml 2019 17 精液检查 精子形态观察 试剂 改良巴氏染色液 Shorr染色液 Diff Quik快速染色液 商品化染色液一般质量均佳 但实验室也可自行配制 操作 1 在载玻片上滴1滴精液 约5 20 l 采用压
16、拉涂片法或推片法制片 2 待干后 巴氏染色法用等量95 乙醇和乙醚混合液固定5 15min Shorr染色法用75 乙醇固定1min Diff Quik快速染色法用甲醇固定15s 3 作改良巴氏 Shorr或Diff Quik染色 然后在油精下观察 4 精子头部顶体染成淡蓝色 顶体后区域染成深蓝色 中段染成淡红色 尾部染成蓝色或淡红色 细胞质小滴位于头部后面或中段周围 巴氏染色染成绿色 结果判断 评估精子正常形态时应采用严格标准 只有头 颈 中段和尾部都正常的精子才正常 所有形态学处于临界状态的精子均列为异常 异常精子可有 头部缺陷 颈段和中段缺陷 尾部缺陷 参考区间 正常人精液中正常形态者 30 异常精子应少于20 超过20 为不正常 2019 18 精液检查 精子形态观察所有形态学处于临界状态精子均列为异常 异常精子可有 头部缺陷 大头 小头 锥形头 梨形头 圆头 无定形头 有空泡头 双头 顶体过小头 颈段和中段缺陷 颈部弯曲 中段非对称性的接在头部 粗的或不规则中段 异常细的中段 尾部缺陷 短尾 多尾 发卡形尾 尾部断裂 尾部弯曲 尾部宽度不规则 尾部卷曲 2019 19 精液检
