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1、科研训练论文论文题目 热处理对苹果采后青霉病的控制 和品质的影响 目 录摘要3关键词3前言31 材料与方法31.1 材料31.2 方法42 结果与分析62.1热处理后接种扩展青霉（Penicillium expansum）对果实病斑直径的影响62.2热处理后接种扩展青霉（Penicillium expansum）对果实苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响72.3 热处理后接种扩展青霉（Penicillium expansum）对果实丙二醛含量的影响82.4 热处理后接种扩展青霉（Penicillium expansum）对果实
2、总酚和类黄酮含量的影响82.5损伤接种扩展青霉（Penicillium expansum）后热处理对果实病斑直径的影响92.6 损伤接种扩展青霉（Penicillium expansum）后热处理对果实苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD） 活性的影响92.7损伤接种扩展青霉（Penicillium expansum）后热处理对果实丙二醛含量的影响 112.8损伤接种扩展青霉（Penicillium expansum）后热处理对果实果实总酚和类黄酮含量的影响112.9热处理对果实可溶性固形物(SSC) 、硬度(Firmness)、可滴定酸
3、(TA)含量的影响123 讨论13参考文献14致谢16热处理对苹果采后青霉病的控制和品质的影响原苗苗 火艳丽（甘肃农业大学 食品科学与工程学院 07级生物工程）摘要：本文研究了热处理对苹果果实损伤接种扩展青霉（Penicillium expansum)后与抗性相关的酶及主要产物和品质的影响。结果表明：45/7min热处理后接种P.expansum和损伤接种P.expansum后50/5min热处理均能明显降低青霉病的发病率和病斑直径，表明热处理有诱抗和杀菌作用，热处理提高了果实苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD）等抗性酶的活性，同时也提高
4、了苯丙烷代谢主要产物如总酚、类黄酮的含量，降低MDA的含量。P.expansum损伤接种可进一步增强处理PAL 、PPO、 POD和SOD活性，提高总酚、类黄酮含量。同样热处理对果实品质也有影响，热处理对保持果实品质有一定作用，热处理后果实的可溶性固形物含量和硬度要比对照组高，苹果在热处理后酸度都有不同程度的降低，能较好的保持贮藏过程中的品质。关键词:苹果；热处理；青霉病；诱导抗性；品质 苹果 (Malus domestica Borkh.) 是我国北方重要的水果虽然苹果具有良好的贮藏性，但在贮藏后期腐烂病发生率仍然较高。由扩展青霉（P. expansum）引起的青霉病是苹果采后的主要病害，虽
5、然采用化学杀菌剂可有效控制该病的发生1 但均存在农药残留、环境污染和病原菌产生抗药性等问题，因此急需寻找新的、更安全有效的控制方法2 。采后热处理具有可延缓果蔬冷害的作用 ,抑制某些生理病害 ,保持果实品质 ,控制病虫害等作用的非化学药物控制果蔬采后病害的有效方法，它无毒、无农药残留。据报导，采用热空气处理可显著降低苹果青霉病的病斑直径及发病率4-5。本文拟探讨采后热水处理对苹果青霉病的诱抗效果，分析处理后果实体内的抗性生化指标变化，同时研究热处理对苹果品质的影响。1 材料与方法1.1 材料供试红富士苹果(Malus domestica Borkh. cv. Fuji)于2008年10月采自天
6、水市清水县永清镇,单果包纸，纸箱包装后运抵本校室温(152)下贮藏待用；供试P.expansum分离自自然发病果实，PDA培养基上保存待用。1.2 方法1.2.1热处理经前期试验选定：热处理后接种的最适条件是45处理7min，接种后热处理的最适条件是50处理5min。选取大小均匀一致，无任何损伤果实在恒温水浴锅（HH4金坛市荣华仪器制造有限公司 江苏）中45下浸泡处理7min, 以室温水处理为对照，取出晾干后进行损伤接种。每处理用果实6个，重复3次。再将热处理后的苹果装入标准箱并用聚乙烯(PE)膜包裹保湿，室温下贮藏，备用。将损伤接种P.expansum后的苹果在恒温水浴锅（HH4金坛市荣华仪
7、器制造有限公司 江苏）中50下浸泡处理5min, 以室温水处理为对照，每处理用果实6个，重复3次。再将热处理后的苹果装入标准箱并用聚乙烯(PE)膜包裹保湿，室温下贮藏，备用。1.2.2 损伤接种孢子悬浮液的配置参照刘红霞等方法并修改6。先将28下在PDA上培养4d的P. expansum孢子用含0.01%Tween-80的无菌水用玻璃棒刮下，然后转入50ml三角瓶中，在混合器上振荡15秒，再用双层纱布过滤，滤液用血球计数板计数算出孢子悬浮液的浓度，最后稀释至所需浓度（2106 个/mL）。果实损伤接种参照刘红霞方法并修改6。果实经75%酒精表面消毒后，用灭菌铁钉（直径3mm）在表面等距离刺孔8
8、个（深3mm，其中赤道部位4个，上下萼洼附近各处2个），取20l上述孢子悬浮液接入孔内。稍作晾干后入包装箱，塑料薄膜覆盖保湿，于(182)，RH 85%90%下贮藏观测病斑直径。1.2.3 生化分析取样 参照Bi et al.7方法。处理样品于处理后0、2、4、6、8、10d用直径5mm打孔器打取皮下2-8mm处果肉组织3g。损伤接种样品则取接种后0、2、4、6、8d、10d病斑以外5-10mm皮下2-8mm处果肉组织3g。铝箔纸包裹，液氮冷冻，在80超低温冰箱中保存待用。1.2.4抗性酶活性测定1.2.4.1 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性测定 参照Assis8方法并修改。290nm下测定吸光
9、度变化，以每小时内OD290变化0.01为1个活性单位（U）。酶活性单位为Umg protein-1。1.2.4.2 过氧化物酶（POD）活性测定 参照Chance and Maehly9方法并做修改。在470 nm测定吸光度值的变化,以每分钟内OD470变化0.01为1个活性单位（U）。酶活性单位为Umg protein-1。1.2.4.3 多酚氧化酶（PPO）活性测定 参照Chen et al10方法并做修改。在420 nm测定吸光度值的变化，以每分钟内OD420变化0.01为1个活性单位（U）。酶活性单位为Umg protein-1。1.2.4.4 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定参考O
10、berley and Spitz（1985）11方法并做修改。于560 nm处测定吸光度值。SOD活性以每毫克蛋白抑制氮蓝四唑（NBT）光化还原的50%为一个酶活性单位（U）表示。酶活性单位为Umg protein-1。1.2.4.5 蛋白含量测定 参照Bradford12方法测定，以牛血清蛋白（BSA）为标准蛋白作标曲，计算蛋白含量。1.2.5 苯丙烷代谢主要产物含量测定1.2.5.1 总酚和类黄酮含量测定 参照Pirie and Mullins13方法并修改。分别于280和325nm测定总酚和类黄酮含量。总酚含量以OD280g FW-1表示；类黄酮含量以OD325g FW-1表示。1.2.
11、5.2 MDA含量测定 参照Hodges et al.（1999）14方法并修改。分别测定反应液在450 nm、532 nm和600 nm处的吸光度值，按下式计算反应混合物中MDA的浓度，然后计算出果实样品中MDA含量。MDA含量用每克鲜重所含的TBARS钠摩尔数表示（nmol TBARSgFW-1）。反应液中MDA（mmol/L）=6.45（OD532-OD600）-0.56OD4501.2.6 热处理对采后苹果品质的影响用筛选出的最佳温度，在最佳时间下用热水处理的苹果以及室温下未经过热处理的苹果进行测定1.2.6.1果实硬度测定用GY-1型果实硬度计测定。围绕果实中部均匀取三个点测定。每处
12、理每次测定10个果实。重复3次。1.2.6.2可溶性固形物（SSC含量测定）采用曹建康（2005）15方法并修改。用阿贝折光仪（WYA型）测定在果实的阴、阳面中部削去果皮后的果肉可溶性固形物。每个果实测点3个，每处理用果10个，重复3次。1.2.6.3可滴定酸（TA）含量的测定参考韩雅珊（1992）16方法并改进。用打孔器打取皮下果肉样品3.0g，研成匀浆后离心（10,000g，10 min），取3 mL上清液，再加入5 mL蒸馏水和2 滴1%酚酞溶液，用0.01 M NaOH滴定。果实可滴定酸含量以苹果酸（折算系数为0.067）进行计算。1.2.7全部试验数据用DPS7.55数据处理系统和M
13、icrosoft Excel 2003进行Duncans多重差异显著分析和标准偏差(SE) 计算。2 结果与分析2.1 热处理后损伤接种扩展青霉（P. expansum）对果实病斑直径的影响 处理后天数(d)图1 热处理后损伤接种P. expansum对果实病斑直径(图1)的影响。图中不同字母代表差异显著(P 0.05)。图中竖线表示标准误（SE）。Fig1. Effect of heat treatment and challenge with P. expansum on growth of lesion diameter in inoculated fruit. Bars with th
14、e different letters represent values that were significantly different (P 0.05). Bar indicated standard error（SE）.热处理及损伤接种P. expansum病斑直径与对照有明显差异(图1)，热处理及损伤接种P. expansum明显抑制了病斑直径的扩展。热处理后损伤接种的病斑直径均低于对照，第8d和第10d病斑直径分别是对照的50%和61%。2.2热处理后损伤接种扩展青霉（P. expansum）对果实苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶
15、（SOD）活性的影响 BA DC 处理后天数(d)图 2 热处理后损伤接种P. expansum对 PAL（A）、POD（B）、PPO（C）和SOD（D）活性的影响。图中竖线表示标准误（SE）。Fig. 2 Effects of heat treatment and challenge with P. expansum on the enzyme activity of PAL（A） 、POD（B） 、PPO（C） and SOD（D）in fruit. Bar indicated standard error（SE）. 热处理果实的PAL活性略高于对照（图2A），处理后第6d两者差异达到最大，处理比对照高出12.48%。P.expansum损伤接种可进一步显著提高处理和对照的
