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1、亚能生物亚能生物 HPVHPV 产品培训手册产品培训手册 开发篇开发篇 目目录录 一 宫颈癌背景介绍 3 二 宫颈癌常见筛查方法及评价 3 1 细胞学检查 3 2 HPV DNA 检测 4 三 HPV 分型检测的临床应用 4 1 用于宫颈癌筛查 更好地判断宫颈病变风险 4 2 用于 ASCUS 的分流与管理 5 3 用于宫颈病变治疗后的随访 5 4 指导 HPV 疫苗的研制和使用 5 四 亚能生物 HPV 基因分型产品介绍 5 1 技术原理 5 2 产品优势 6 3 试剂盒组成及有效期 6 4 产品用途 7 5 操作流程 7 6 结果判读 7 7 证书及荣誉 8 五 HPV 基因分型检测实验室
2、要求 8 1 实验室分区及布局 8 2 仪器设备配置 11 六 临床收费标准 12 七 HPV 主要竞品对比分析 12 1 亚能生物与凯普 HPV 基因分型检测对比分析 13 2 HC2 杂交捕获二代 14 3 PCR 荧光探针法 15 4 酶切信号放大法 16 5 流式荧光杂交法 17 八 扩展阅读 20 亚能生物亚能生物 HPV 产品培训手册产品培训手册 开发篇开发篇 一一 宫宫颈颈癌癌背背景景介介绍绍 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一 发病率在女性恶性肿瘤中居第二位 仅次于乳腺 癌 据世界范围统计 每年估计有 50 万的宫颈癌新发病例 其中 80 的病例发生在发展中 国家 我国目前宫颈癌患
3、者约 40 万人 为宫颈癌高发国家 每年新增宫颈癌患者 10 万 占世界新增病例总数 1 5 我国每年 3 万妇女死于宫颈癌 居女性癌症死亡率第二位 特 别在西部地区 宫颈癌居女性癌症死亡率之首 近年来 宫颈癌患病呈年轻化和上升趋势 所以 提早预防 诊断和治疗子宫颈癌就成为了维护妇女健康的重要问题 1995 年 世界卫生组织 国际癌症研究所 WHO IARC 专题讨论会认为 HPV 感染是 宫颈癌的主要病因 后来的进一步研究发现 几乎所有宫颈癌患者 99 7 的病理样本中 均能找到 HPV 从而印证了 HPV 是宫颈癌的主要病因 也使宫颈癌成为目前人类所有癌症 病变中唯一病因明确的癌症 宫颈癌
4、有一系列的癌前病变 临床研究表明 从 HPV 感染到 宫颈癌前病变到最终发展为宫颈癌大约需要 5 10 年的时间 而且子宫颈具有有利的解剖学 基础 易于暴露 便于观察 触诊和取材 如在癌前病变被确诊 即可进行进一步的治疗 与监测 因此 通过筛查可以达到早诊早治 降低子宫颈浸润癌的发病率和死亡率 筛查 是实现宫颈癌早诊早治的关键 通过筛查 将造福于千千万万的女性 二二 宫宫颈颈癌癌 常常见见 筛筛查查方方法法及及评评价价 1 细细胞胞学学检检查查 细胞学检查包括传统巴氏涂片和液基细胞学 人们常说 TCT 传统巴氏涂片的准确 性受许多因素的影响 如取材方法 涂片制作 染色技巧 阅片水平等 不可避免
5、地导致 假阴性的出现 假阴性率高达 40 近些年发展起来的液基细胞学检测改变了常规涂片的 操作方法 标本取出后立即放入细胞保存液中 细胞经过均匀化等处理后再进行制片 提 高了细胞学检查的灵敏度和特异性 但无论是传统巴氏涂片还是液基细胞学 都需要非常 专业的细胞学医生 而且细胞学医生对结果的判读带有较强的主观性 重复性差 2 HPV DNA 检检测测 现已明确 HPV 感染是宫颈癌的主要病因 因而加强防治和监控 HPV 的感染状态已成 为预防和诊治宫颈癌及癌前病变的主要手段 2005 年 世界卫生组织 国际癌症研究所 WHO IARC 提出 有充足的证据表明 HPV DNA 检测可作为子宫颈癌的
6、初筛手段 并 可以降低子宫颈癌的发病率和死亡率 大量研究表明 HPV DNA 检测的灵敏度显著高于 细胞学检查 因而 与细胞学相比 HPV 检测更适合宫颈癌的初级筛查 三三 HPV 分分型型检检测测的的临临床床应应用用 1 用用于于宫宫颈颈癌癌筛筛查查 更更好好地地判判断断宫宫颈颈病病变变风风险险 同一高危型同一高危型 HPV 持续感染风险更高持续感染风险更高 现已明确 与不同 HPV 基因型的反复感染相比 同一 HPV 持续感染者患宫颈病变 的风险更高 HPV 基因分型检测有助于判断患者是同一基因型的持续感染 还是 不同基因型的反复感染 不同高危型不同高危型 HPV 感染的临床处理方案不同感
7、染的临床处理方案不同 2009 年美国阴道镜和宫颈病理学会 ASCCP 发布的 HPV 基因分型检测指南中明确指 出 对于宫颈细胞学检查正常而 HPV 检测阳性的 30 岁以上妇女 如果为 HPV16 或 HPV18 阳性 应立即进行阴道镜检查 如为其他高危型 HPV 阳性 则 12 个月 后可重复 HPV 基因分型检测和细胞学检查 详见下图 2 用用于于 ASCUS 的的分分流流与与管管理理 对于未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞 ASCUS HPV 检测是分流方法的首选 方案 把潜在的患宫颈癌风险病例分离出来 指导阴道镜的合理使用 提高诊断率 降低 漏诊率 3 用用于于宫宫颈颈病病变变治治
8、疗疗后后的的随随访访 大量研究表明 对于宫颈病变治疗后的随访 HPV 检测的性能优于细胞学检查 在宫 颈病变治疗后的随访中 HPV 基因分型检测有助于判断患者是同一基因型的持续感染 还 是不同基因型的反复感染 4 指指导导 HPV 疫疫苗苗的的研研制制和和使使用用 不同国家 不同人群引起宫颈病变的 HPV 基因型及感染率均有差异 据此结果可指导 HPV 疫苗研制及使用 四四 亚亚能能生生物物 HPV 基基因因分分型型产产品品介介绍绍 1 技技术术原原理理 亚能生物 HPV 基因分型检测采用 PCR 反向点杂交法反向点杂交法 使用自行设计的 HPV 基因组中 的特异性引物 对待测样品中可能存在的
9、 HPV 基因型进行 PCR 扩增并进行生物素标记 再 将 PCR 扩增产物与固定在芯片上的特异性探针进行特异性的分子杂交 并通过化学显色方 式判读结果 如下图所示 探探针针DNA 核核酸酸分分子子杂杂交交 化化学学显显色色 PCR扩扩增增 基基因因芯芯片片技技术术原原理理 2 产产品品优优势势 精确分型 能实现对 HPV 多种基因型的精确分型 通量大 可同时检测临床常见的 23 种 HPV 基因型 包括 18 种高危型 16 18 31 33 35 39 45 51 52 53 56 58 59 66 68 73 82 83 和 5 种低危型 6 11 42 43 81 可检测多种临床标本
10、宫颈脱落细胞 液基细胞学标本 疣体组织 石蜡组织切片等 效率高 单次检测标本数量可达 96 份 通用设备 如普通 PCR 仪和杂交仪 适应于大 中 小型实验室 准确性高 特异性强 重复性好 均高于 98 3 试试剂剂盒盒组组成成及及有有效效期期 组成成分组成成分数量数量规格规格保存条件保存条件 试剂盒 试剂盒 PCR 反应液25 管20 L 18 以下 膜条25 张 POD1 管75 L TMB1 瓶10mL 裂解液1 管1 5mL 试剂盒试剂盒 II 30 H2O21 管75 L 2 8 有效期 有效期 6 个月 个月 4 产产品品用用途途 对人乳头瘤病毒 HPV 的感染情况进行定性检测并加
11、以分型 能够 1 检测 23 种 HPV 基因型 直接提示感染 HPV 的基因型 2 包括 18 种高危型 HPV16 18 31 33 35 39 45 51 52 53 56 58 59 66 68 73 82 83 和 5 种低危型 HPV 6 11 42 43 81 3 可用于临床 HPV 感染的辅助诊断 5 操操作作流流程程 6 结结果果判判读读 实验结果有效的前提 实验结束后 每张膜条在 PC 位点必须出现蓝色信号 根据蓝色 斑点显现的位置即可断定相应的 HPV 基因型 参见以下示意图 阴性 阴性 仅膜条的 PC 位点显示蓝色斑点 如图 1 所示 图 1 阴性结果 单一感染 单一感
12、染 除膜条的 PC 位点显示蓝色斑点外 在膜条的其他位置出现单个蓝色斑点 如 图 2 所示 图 2 HPV18 感染 多重感染 多重感染 除膜条的 PC 位点显示蓝色斑点外 在膜条的其他位置出现 2 个及 2 个以上的 蓝色斑点 如图 3 所示 图 3 HPV35 59 66 复合感染 7 证证书书及及荣荣誉誉 唯一获 WHO IARC 中国研究项目临床验证的 HPV 分型产品 2010 年成为卫生部 探索建立适合我国可持续发展的宫颈病变规范化防治体系及多中 心临床研究项目 的指定产品 2011 年 国家重点新产品 2011 年 广东省自主创新产品 2011 年 深圳市自主创新产品 五五 HP
13、V 基基因因分分型型检检测测 实实验验室室要要求求 1 实实验验室室分分区区及及布布局局 标准 HPV 基因检测实验室由四个工作区组成 试剂准备区 标本制备区 PCR 扩增区 和产物分析区 在四个工作区前各设置一个缓冲区 见图 4 基础 HPV 检测实验室由三个工作区组成 标本制备区 PCR 扩增区和产物分析区 见 图 5 如无法满足三分区配置 至少需要两个工作区 即标本制备区 PCR 扩增 产物分析 区 见图 6 图 4 标准 HPV 基因检测实验室布局图 图 5 基础 HPV 基因检测实验室布局图 图 6 一般 HPV 基因检测实验室布局图 2 仪仪器器设设备备配配置置 HPV 项目检测仪
14、器设备及耗材总表 常见的两分区实验室 项目检测仪器设备及耗材总表 常见的两分区实验室 仪器仪器 耗材耗材型号型号 规格及参数要求规格及参数要求数量数量备注备注 生物安全柜或超净 工作台 1 电磁炉 2 干式恒温器 1 选配 如有 2 台电磁炉 则可不配备干式恒温器 台式高速离心机 转速 13000rpm 转子规格 1 5mL 1 手掌型离心机转子规格 0 2 mL1 冰箱双温区 2 8 20 2 PCR 扩增仪0 2 mL 48 或 96 孔1 杂交仪 控温范围 环境温度 5 80 可调 转速 0 r min 25r min 单次杂交标本量可达 48 个以上 1 漩涡振荡器 1 脱色摇床 1
15、0 5 10 L 或 1 10 L 2 3 支 10 100 L2 3 支微量加样器 100 1000 L2 3 支 数量视实验室分区情况 而定 每工作区一套 计时器 2 胶头滴管2mL 消耗品 1 个样本用 1 个 离心管1 5mL 消耗品 1 个样本用 1 个 15mL 消耗品 1 个样本用 1 个 杂交管 50mL 消耗品 约 4 个样本用 1 个 10 L 200 L 微量加样器吸头 1000 L 消耗品 每份标本约消 耗每种规格的吸头 2 个 通常 1000 个 包 记号笔 消耗品 塑料手套 消耗品 乳胶手套 消耗品 一次性口罩 消耗品 一次性帽子 消耗品 实验服 可根据实验室不同格
16、局 配备多件 六六 临临床床 收收费费标标准准 以广东省物价收费为例 具体收费标准请参考当地的标准 项目编项目编 码码 项目名称项目名称 单单 位位 第一档第一档 价格价格 第二档第二档 价格价格 第三档第三档 价格价格 第四档第四档 价格价格 项目内项目内 涵涵 250403 066 人乳头瘤病毒 HPV 核酸 检测 项 000 250403 066 1 人乳头瘤病毒 HPV 核酸 检测 PCR 法 项165156 8148 5132 250403 066 2 人乳头瘤病毒 HPV 核酸 检测 杂交捕获法 项345327 8310 5276 包括分 型检测 七七 HPV 主主要要竞竞品品对对比比分分析析 1 亚亚能能生生物物与与凯凯普普HPV 基基因因分分型型检检测测对对比比分分析析 亚亚 能能凯凯 普普 PCR 反向点杂交PCR 膜杂交法 实质为 PCR 反向点杂 交 技术原理技术原理 采用经典杂交方法导流杂交 通过外力抽吸加压 人为缩短杂交时间 单次检测单次检测 标本数量标本数量 可达 96 份受配套设备 医用核酸分子快速杂交仪 限制 每批最多 15 份 杂交操作杂交操作 时间时
