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1、第十六章细胞因子与黏附分子检测 医学技术学院免疫教研室 齐齐哈尔医学院免疫 复习 1 T细胞增殖试验的原理 刺激物 2 T细胞增殖试验的主要方法 3 T细胞介导的细胞毒试验主要方法 掌握 细胞因子 粘附分子概念 临床常用的测定方法熟悉 细胞因子的特性与功能 了解 其他 齐齐哈尔医学院免疫 第一节概述第二节临床常用的测定方法第三节细胞因子与黏附分子测定的临床应用 齐齐哈尔医学院免疫 第一节概述 细胞因子 cytokine 是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌 通过结合细胞表面的相应受体 在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或多肽 齐齐哈尔医学院免疫 掌握 1 细胞因子的种类白细胞介素 IL 干
2、扰素 IFN 集落刺激因子 CSF 肿瘤坏死因子 TNF 生长因子 GF 趋化因子 一 细胞因子及其受体的特性与功能 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 自分泌 内分泌 远距离作用 旁分泌 作用于比邻细胞 细胞因子发挥作用的三种方式 作用于分泌细胞自身 2 细胞因子的共同特性与生物学功能 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 高效性 多效性 重叠性 网络性 协同性 拮抗性迅速高效性非特异性 2 细胞因子的共同特性 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 肥大细胞 胸腺细胞 B IL 4 活化 增殖 分化 增殖 增殖 多效性 齐齐哈尔医学院免疫 IL 2 IL 4 IL 5 IL 4 IL 5 IL 4 IFN 拮抗性 重叠性 协
3、同性 均有刺激B细胞增殖的功能 更有效地诱导IgE类别转换 IL 4阻断IFN 诱导类别转化的作用 B B B 齐齐哈尔医学院免疫 2 细胞因子的生物学功能 参与调控免疫细胞的发育 分化和功能参与调控免疫应答抗感染抗肿瘤诱导细胞凋亡 齐齐哈尔医学院免疫 了解 3 细胞因子受体的共同特性 细胞因子发挥作用 细胞因子与靶细胞表面特异性受体结合细胞因子受体结构 胞膜外区 跨膜区和胞质区组成细胞因子家族 型细胞因子受体家族 型细胞因子受体家族 肿瘤坏死因子受体超家族 免疫球蛋白受体超家族 趋化因子受体家族 齐齐哈尔医学院免疫 了解 齐齐哈尔医学院免疫 二 黏附分子的特性与功能 黏附分子 AM 是介导细
4、胞间或细胞与细胞外基质间相互结合的分子 齐齐哈尔医学院免疫 掌握 1 黏附分子的特性 黏附分子均为跨膜糖蛋白 由胞膜外区 跨膜区和胞质区三部分组成 根据其结构特点可分为免疫球蛋白超家族 整合素家族 选择素家族和钙黏蛋白家族 齐齐哈尔医学院免疫 了解 2 黏附分子的主要生物学功能 参与细胞的信号转导与活化 细胞分化及发育参与免疫应答和炎症反应 淋巴细胞归巢 伤口愈合与血栓形成 调节细胞凋亡等功能 齐齐哈尔医学院免疫 了解 B细胞与Th细胞间信号转导的细胞粘附分子 齐齐哈尔医学院免疫 第二节临床常用的测定方法 一 酶联免疫吸附试验方法二 化学发光酶免疫试验三 流式细胞分析法四 酶联免疫斑点试验五
5、免疫学测定方法学评价 齐齐哈尔医学院免疫 基因水平 PCR技术 检测水平生物活性测定蛋白水平免疫学测定 第二节临床常用的测定方法 掌握 齐齐哈尔医学院免疫 生物活性测定 测活性 灵敏性高 特异性低蛋白水平ELISA免疫学测定化学发光酶免疫试验 含量 流式细胞术酶联免疫斑点试验 第二节临床常用的测定方法 掌握 齐齐哈尔医学院免疫 一 酶联免疫吸附试验 一 基本方法 1 直接法 双抗体夹心法 测CK最常用方法 2 间接法3 抗原竞争法 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 敏感性偏低不能区分细胞因子的生物学活性 二 方法学评价 特异 简便成本低 易于推广和标准化等优点可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理细胞
6、因子测定的首选方法 缺点 优点 齐齐哈尔医学院免疫 了解 二 化学发光酶免疫试验 是以发光剂作为酶免疫测定的底物 通过发光反应增强测定的灵敏度 一 基本方法双抗体夹心法 二 方法学评价特异性好 灵敏度高 线性范围宽 试剂稳定 可自动化检测 齐齐哈尔医学院免疫 了解 三 流式细胞术 flowcytometry FCM 分离和培养待检细胞细胞破膜与固定封闭非特异性结合位点染色与分析 基本方法 了解 方法学评价 优点 特异 高效 灵敏 应用 对单个细胞水平CK或AM检测 检测细胞内CK 膜上AM CK受体同一细胞内两种以上细胞因子表达 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 四 酶联免疫斑点试验 ELISPOT
7、包被有待测细胞因子抗体的微孔板分泌相应细胞因子的待测细胞有或无刺激物培养细胞因子被板上的特异性抗体捕获后续的反应如同ELISA 一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞 斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关 基本原理 了解 齐齐哈尔医学院免疫 方法学评价 比常规ELISA法的灵敏度提高200倍应用 检测分泌特定细胞因子的细胞 熟悉 五 免疫学测定方法学评价 优点 特异性高操作简便 快速 无需依赖细胞株影响因素较少且易控制 重复性好 方法容易标准化 缺点 所测定含量 与其生物活性不一定呈正比结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系敏感性相对较低标本中可溶性受体 会影响特异性抗体对细胞因子结合 熟
8、悉 第三节细胞因子与黏附分子测定的临床应用 1 特定疾病的辅助诊断2 机体免疫状态的评估3 临床疾病治疗效果的监测和指导用药4 疾病预防的应用 熟悉 一 临床应用原则 方法选择和结果判断作出综合考虑 异质性功能交叉性和多样性来源的复杂性组织细胞的非特异性 细胞因子和粘附分子 全身免疫或炎症状态 血浆 血清炎症局部细胞因子的水平 局部分泌液细胞分泌细胞因子的特性 外周单个核细胞细胞表面细胞因子受体或黏附分子定位检测疾病疗效观察和预后判断 1 标本的适当选取 敏感性高 特异性低 废弃物难处理活性测定 不能精确蛋白定量基因分析 操作繁琐 有助于疾病分析多种方法 综合分析 正确评价 2 方法的联合应用
9、 意义 细胞因子具有网络状调节的特点级联效应或相互抑制作用的网络系统有助于提供有效的疾病诊断和机体免疫状态信息举例 免疫细胞分泌 IL 1 IL 2 IFN 和GM CSFTh1 Th2细胞平衡状态 IL 2 IL 4 IL 10和IFN 3 细胞因子的联合检测 二 特定疾病的辅助诊断 一 细胞因子与疾病1 细胞因子风暴 IL 1 IL 2 IL 6 IFN 等引发全身炎症反应综合征2 变态反应性疾病 哮喘IL 4促进IgE合成3 自身免疫病 类风湿性关节炎 TNF IL 1 IL 6 IL 8 MCP 1 一 细胞因子与疾病 4 免疫缺陷病 IL 2R 基因缺陷 重症联合免疫缺陷病 IL 6
10、 浆细胞瘤 膀胱癌 5 器官移植排斥反应 TNF IL 1 IL 2 IL 6 IFN 水平升高6 恶性肿瘤 检测IL 2 IL 6 IFN 水平用于疗效的评估 二 黏附分子与疾病1 动脉粥样硬化 ICAM P 选择素2 肾脏疾病 ICAM3 肝脏疾病 VCAM 1 ICAM 1 IL 14 自身免疫病 SLE E 选择素 ICAM 1 类风湿关节炎 E 选择素 三 评估机体的免疫状态 机体免疫应答的强弱作为观察治疗效果和判断预后的重要指标对保证治疗效果具有指导意义 四 疾病疗效检测及指导用药 根据患者相关细胞因子水平或免疫状态的检测结果选择细胞因子的种类和剂量 细胞因子水平过表达 可溶性黏附
11、分子增高使用相应的细胞因子拮抗剂或抗体 1 细胞因子和细胞粘附分子的概念 细胞因子可分为几类 2 临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检测方法有哪些 3 细胞因子及黏附分子检测的临床意义是什么 思考题 1 细胞外可溶性黏附分子主要测定法是 A ELISAB 酶免疫组化法C 荧光免疫法D 流式细胞仪测定法E 时间分辨荧光免疫法2 下列对FCM检测细胞因子的描述中错误的是 A 灵敏度高B 可测细胞内细胞因子C 特异性高D 单细胞水平分析E mRNA表达水平3 用ELISA方法测定细胞因子 错误的是 A 特异性高B 可测活性C 操作简便D 可定量分析E 时间短4 在检测可溶性黏附分子中 EL
12、ISA常用 A 直接法B 间接法C 夹心法D 竞争法E 组化法 A E B C 5 不属于细胞因子特点的是 A 分泌型蛋白质B 自分泌C 低分子量D 不受MHC限制E 半衰期长6 黏附分子作用是 A 细胞信号传导与活化B 细胞的伸展与转移C 细胞的生长与分化D 创伤的愈合E 以上都是7 慢性肝炎的急性期和活动期水平显著升高 而稳定期和恢复期有明显下降的细胞因子 A TNF和IL 6B TNF和IL 10C TNF和EPOD GM CSF和EPOE GM CSF和IL 6 E E A 8 细胞因子生物学测定法最重要的优点是 A 高特异性B 操作简单C 低灵敏性D 活性测定E 实验成本低9 关于细胞因子免疫学测定 错误者 A 是目前CK检测最常用方法B 可对CK进行定量分析C 可测CK活性D 可测可溶性CK和细胞内CKE 包括ELISA ELISPOT和流式10 可测定单个细胞分泌细胞因子的方法 A ELISAB RIAC 凝集反应D ELISPOTE 免疫比浊 C D D
