《野菊花抑菌和抗病毒作用实验研究_任爱农》由会员分享，可在线阅读，更多相关《野菊花抑菌和抗病毒作用实验研究_任爱农（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、药 物 生 物 技 术 Pharmaceutical Biotechnology 1999 6 4 241 244 野菊花抑菌和抗病毒作用实验研究 任爱农 王志刚 卢振初 王礼文 1 吴亦伦 江苏省中医药研究院 南京 210028 1 安徽省医学科学研究所 合肥 230061 摘 要 对野菊花水提物与挥发油的抑菌和抗病毒活性实验研究结果表明 二者均具抑菌和 抗病毒活性 对金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 绿脓假单胞菌 福氏志贺菌的抑制作用及抗病毒活 性 水提物强于挥发油 而对肺炎链球菌 则相反 关键词 野菊花 抑菌 抗病毒 中药材野菊花临床上功用主治为 清热解 毒 主治痈肿 疔疮 目赤 痢疾 湿疹
2、温热头痛 等 1 其水提物对金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 绿脓杆菌有抑制作用 2 但挥发油的抑菌试验 及抗病毒试验未见报道 我们分别对野菊花的 挥发性成分和水提物同时进行了抑菌和抗病毒 实验研究 为临床用药提供依据 1 材 料 1 1 原药材鉴定 野菊花采集于南京老山 经南京中医药 大学刘训红副教授鉴定为野菊 Chysanthe mum indicum L 的头状花序 1 2 细菌 肺炎链球菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球 菌 绿脓假单胞菌及福氏志贺菌由江苏省中 医院检验科提供 1 3 病毒 细胞 流行性感冒病毒A3 汉防 359 95 H3N2 狗肾传代细胞 MDCK 引自国家流感中心 1 4 药
3、品 病毒唑注射液 由上海禾丰制药有限公 司 0 1g ml 生产 2 方 法 2 1 野菊花水提物和挥发油的制备 取阴干的头状花序 用水蒸气馏法提取 挥发油 经硫酸钠脱水 得蓝绿色挥发油 每 ml 挥发油含生药材 300g 再取其去油后的 野菊花加水煎煮 滤取煎煮液 浓缩至适当浓 度 真空干燥 得水提物干膏 每克干膏含生 药 5g 临用前挥发油和干膏加水配制成所 需浓度 2 2 抑菌试验 2 2 1 琼脂打洞扩散法 将肺炎链球菌 1010个 ml 大肠埃希菌 105个 ml 福氏 志贺菌 105个 ml 绿脓假单胞菌 105个 ml 和金黄色葡萄球菌 105个 ml 分别涂 布于厚约 6mm
4、的药皿平板上 然后在其中 打成直径约6mm 的孔若干 加满野菊花水提 物 1 16g 干膏 ml 和野菊花挥发油 37 培养 24h 观察抑菌圈大小 2 2 2 琼脂扩散法 在血平板上加入野菊 花水提物及挥发油 取水提物干膏加水溶 解 使水提物 以干膏重量克计 浓度分别为 0 2g ml 0 1g ml 0 05g ml 0 025g ml 0 0125g ml 再取挥发油加水稀释 加适量 乳化剂 用剪切乳化机高速搅拌得到均匀的 乳化液 其浓度 以含油量 ml 计 分别为 5 2 5 1 25 0 625 0 325 0 156 然后在血平板上点种肺炎链球菌 1010 ml 大肠埃希菌 105
5、个 ml 福氏志 241 收稿日期 1999 10 06 贺菌 105个 ml 绿脓假单胞菌 105个 ml 和金黄色葡萄球菌 105个 ml 37 培养 24h 分别观察野菊花水提物和挥发油的抑制 生长的最低药物浓度 MIC 2 3 抗病毒试验 2 3 1 病毒毒力测定 MDCK 细胞 96 孔 板 用无血清培养液洗两次 加入病毒 10 倍 系例稀释液 每稀释度接种 4 孔 35 5 CO2中吸附 2h 后弃去病毒液 换入维持液 不含牛血清 含 2 g ml 胰酶 继续培养 3d 观察细胞病变情况 CPE 测定该病毒半数 感染量 TCID50 2 3 2 药物对细胞毒性测定 MDCK 细胞
6、96孔板 加入 2 倍系列稀释药液 水提物 0 4g ml 挥发油 各 7 个浓度 每稀释度 4 孔 35 5 CO2培养 3d 观察 CPE 找出药 物最大无毒浓度 TCD0 2 3 3 抗病毒实验 MDCK 细胞 96 孔培 养板 加入 10TCID50病毒液 病毒液作 10 3 稀释 35 5 CO2吸附 2h 弃去病毒液 加入最大无毒浓度药液 2 倍系列稀释液各 6 个浓度 每一稀 释度 3 孔 培养 3d 观察 CPE 测定药物对 CPE 的抑制 同时设病毒 对照 不加药液 细胞对照 不加病毒 药物 对照 细胞不加病毒 加以不同浓度药液 3 结 果 3 1 抑菌试验 3 1 1 琼脂
7、打洞扩散法 琼脂打洞扩散法 抑菌试验结果见表 1 Tab 1 Bacteriostatic result by agar punch diffusion Bacteria Diameter of bacteriostatic circle Aqueous extract mm VolutiLe oil mm Streptococcus pneumoniae 1010cells ml 814 Staphylococcus aureus 105cells ml 1215 Escherichia coli 105cells ml 813 Pseudomonas pyocyanea 105cells
8、ml 910 Shigella dysenteriae 105cells ml 1013 由表 1 可知 野菊花水提物及挥发油均形 成一定直径的抑菌圈 显示有较强的抑菌作用 3 1 2 琼脂扩散法 琼脂扩散法抑菌试验 结果见表 2 Tab 2 Bacteriostatic result by agar diffusion Bacteria Minimum inhibitory concentration Aqueous extract VolutiLe oil Streptococcus pneumoniae 1010cells ml 0 10 156 Staphylococcus aureu
9、s 105cells ml 0 0250 3125 Escherichia coli 105cells ml 0 10 625 Pseudomonas pyocyanea 105cells ml 0 052 5 Shigella dysenteriae 105cells ml 0 0250 625 由表 2 进一步可知 野菊花水提物及挥 发油的最低抑菌浓度 其中对金黄色葡萄球 菌 大肠埃希菌 绿脓假单胞菌 福氏志贺菌 的抑制作用水提物强于挥发油 而对肺炎链 242 药物生物技术 第 6 卷第 4 期 球菌 则挥发油强于水提物 3 2 抗病毒试验 3 2 1 病毒毒力 病毒毒力实验结果见表 3
10、Tab 3 Determination of virus virulence Virus concentrationRatio of infectional foramen 10 14 4 10 2 4 4 10 34 4 10 42 4 10 5 0 4 10 60 4 由表 3 可知 该病毒的 TCID50为 10 4 3 2 2 药物对细胞毒性测定 药物对细胞 毒性测定结果见表 4 Tab 4 Determination of cytotoxicity by drug Drug concentration Ratio on foramen of cytotoxicity Aqueous
11、extra Volutile oil Virazole 1 644 44 44 4 1 1284 44 40 4 1 2564 44 4 1 5124 44 4 1 10240 44 4 1 20484 4 1 40964 4 1 81920 4 由表 4 可知 野菊花水提物 TCD0 1 1024 挥发油 TCD0 1 8192 病毒唑 TCD0 1 128 3 2 3 药物的抗病毒试验 药物的抗病毒 试验结果见表 5 Tab 5 Determination of CPE inhibition by drug Drug Concentration Ratio of CPE inhibitio
12、n foramen Aqueous extract Volutile oil Virazole Virus control Drug control Cell control 13 33 33 3 1 23 33 33 3 1 43 30 33 3 1 80 30 33 3 1 160 30 33 3 1 320 30 30 3 由表 5 可知 抑制 10TCID50病毒引起的 CPE 的各组药物浓度为 野菊花水提物 1 4096 挥发油 1 6384 病毒唑 1 2048 4 讨 论 4 1 抑菌作用 由琼脂打洞扩散法和琼脂扩散法抑菌试 验结果表明 野菊花水提物与挥发油均具有 较强的抗菌作用
13、 但对金黄色葡萄球菌 大 肠埃希菌 绿脓假单胞菌和福氏志贺菌的作 用 水提物明显强于挥发油 而对肺炎链球菌 的作用则相反 4 2 抗病毒作用 由病毒毒力和药物对细胞毒性测定试验 结果表明 病毒的 TCID50为 10 4 药物对细 胞的 TCD0 野菊花水提物 1 1024 挥发油1 8192 病毒唑 1 128 在此基础上 药物对 CPE 抑制测定试验结果又表明 可以抑制 10TCID50病毒引起 CPE 的各药物组的浓度 分别为 野菊花水提物 1 4096 挥发油 1 6384 病毒唑 1 2048 由此可见野菊花水 提物具较强抗病毒活性 参 考 文 献 1 江苏新医学院编 中药大辞典 上
14、海 上海人 民出版社 1977 2128 2 刘应国 野菊花的药理研究及临床应用概况 时珍国药 1991 2 3 103 243 任爱农等 野菊花抑菌和抗病毒作用实验研究 Study on Bacteriostasis and Antivirotic Activity ofFlos Chrysanthemum Indici Ren Ainong Wang Zhigang Lu Zhengchu Wang Liwen 1Wu Yilun Jiangsu province Research fellow of Traditional Chinese Medicament Nanjing 21002
15、8 1 Anhui province Research Institute of Medical Scitasis Antiviroticences Hefei 230061 Abstract Study of bacteriostasis and antivirotic activity by aqueous extract and volutile oils of Flos Chrysanthumum Indici It is concluded that the aqueousextract is stronger than the volutile oils for Staphylococcus aureus Escherichia coli Pseudomonas pyocyanea Shigella dysenteriae and antivirotic activity But it is inverse for Streptococcus pneumoniae Key Words Flos Chrysanthemum Indici Bacteriostasis Antivirotic activity 244 药物生物技术 第 6 卷第 4 期
