荧光原位杂交(FISH)的优劣

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荧光原位杂交(FISH)的优劣优点:1、应用广泛,不仅可用于已知基因或序列的染色体定位,也可用于未克隆基因或遗传标记,染色体变异,基因突变,基因拷贝数变化的检测。既可用于DNA检测也可用于RNA检测,一定程度上即可反应基因水平变化,也可间接反应蛋白水平变化。2、荧光试剂和探针经济、安全,探针稳定,一次标记后可在两年内使用;3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。缺点:1、 步骤繁多,容易造成信号丢失,造成假阴性结果;2、 只能定性检测,不能定量;3、 RNA检测只能间接反应检测基因的表达情况,会与蛋白质水平检测结果不一致;4、不能达到100%杂交,特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。

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