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1、GB4789 7 2013副溶血性弧菌检验 一 概述二 生物学特性三 检测方法 副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus于1950年从日本一次暴发性食物中毒中发现 该菌存在于近海海水 海底沉积物和鱼类 贝壳等海产品中 在37 pH7 7 3 4 NaCl环境中生长最好 一 概述 概述 本菌嗜盐畏酸怕冷 在无盐环境不能生长 3 6 盐水繁殖迅速 低于0 5 或高于10 盐水中停止生长 对酸敏感 在2 醋酸或50 食醋中1min即死亡 不耐热 56 5min可杀死 90 1min灭活 对高盐浓度抵抗力甚强 5 以下容易死亡 分类 属弧菌科 Vibrio 弧菌属 分布 主要存在于近海
2、岸的海水 海底沉积物和鱼类 虾类 贝类 牡蛎等海产品中 人多因食用被本菌污染而又未煮熟的海产品和其他食品而引起中毒 流行病学 季节分布 8 9月为高峰期中毒食品 主要为海产品 其次为水产制品 淹制品 咸菜及污染食品地区分布 沿海地区居多临床症状 主要有腹痛 腹泻 恶心 呕吐 发热潜伏期 10小时左右 致病作用 主要引起胃肠炎 最常见的是食物中毒和感染性腹泻 由于病菌在食品中大量繁殖 侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素 引起剧烈的胃肠炎 二 生物学特性 菌体形态及染色特征 革兰氏阴性杆菌 无芽孢0 3 0 7 2 6 m两端浓染呈多形态 棒状 弧状 球状 卵圆形等 排列不规则液体培养基生长单鞭
3、毛 固体培养基常有周生鞭毛 侧毛 二 生物学特性 培养特性 需氧兼性厌氧在含NaCl3 4 的培养基中生长良好无盐和NaCl10 的培养基中均不生长最适培养温度为 30 37 最适pH范围 pH7 4 pH8 2 在固体培养基上 菌落通常隆起 圆形半透明 表面光滑 湿润 一般不产生色素 在血平板和嗜盐性平板上 菌落生长良好 肉汤 琼脂 生化管都应含有3 4 的NaCl含量 神奈川现象 Kanagawaphenomenon KP 在特定条件下 某些菌株在含高盐 7 的人O型血球或兔血球及以D甘露醇作为碳源的我妻琼脂平板上产生 溶血的现象神奈川现象与本菌的致病性密切相关 血清分型 O抗原 耐热的菌
4、体抗原 O1 O13共13种K抗原型 荚膜抗原 K1 K71共65种H抗原 鞭毛抗原 无特异性 三 检测程序 食品安全国家标准副溶血性弧菌检验GB4789 7 2013 GB4789 7 2013 1 样品制备 食品样品鱼类 表面组织 肠 鳃贝类 全部内容物 贝肉和体液 甲壳类 动物的中心部分 包括肠 鳃水产制品如为带壳贝类或甲壳类 应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分 然后以无菌操作打开外壳 按上述要求取相应部分 2 增菌 3 氯化钠碱性蛋白胨水 定性 取样品25g mL 加入3 氯化钠碱性蛋白胨水225mL 定量 选择3个适宜的连续稀释度 每个稀释度接种3支含有9mL3 氯化钠碱性蛋白胨水
5、的试管 每管接种1mL 置36 1 恒温箱内 培养8h 18h 3 分离 TCBS平板 弧菌显色平板 对所有显示生长的增菌液 用接种环在距离液面以下1cm内沾取一环增菌液 于TCBS平板或弧菌显色培养基平板上划线分离 一支试管划线一块平板 于36 1 培养18h 24h TCBS平板上典型特征 典型的副溶血性弧菌在TCBS上 呈圆形 半透明 表面光滑的绿色菌落 TCBS平板上典型特征 2020 5 7 21 可编辑 科玛嘉弧菌显色平板 紫色菌落 4 纯培养挑取3个或以上的可疑菌落 划线3 氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板 36 1 培养18h 24h 5 初步鉴定氧化酶试验涂片镜检3 氯化钠三糖铁嗜
6、盐性试验 底层变黄不变黑 无气泡 斜面颜色不变 有动力 6 确定鉴定 甘露醇发酵试验 含3 氯化钠的培养基赖氨酸脱羧酶试验V P试验ONPG试验 采用3 氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行副溶血性弧菌 甘露醇 赖氨酸脱羧酶 V P ONPG ONPG试验 挑取1满环新鲜培养物接种于0 25mL3 氯化钠溶液 在通风橱中 滴加1滴甲苯 摇匀后置37 水浴5min 加0 25mLONPG溶液 36 培养观察24h 阳性结果呈黄色 阴性结果则24h不变色 ONPG 邻硝基酚 D 半乳糖苷 可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统 API20E 7 选做试验 血清学分型 11种O抗原血清神奈川试验 我妻氏血琼脂平板 8 结果与报告 根据检出的可疑菌落生化性状 报告25g mL 样品中检出副溶血性弧菌 如果进行定量检测 根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数 查最可能数 MPN 检索表 报告每g mL 副溶血性弧菌的MPN值 ThankYou 2020 5 7 41 可编辑
