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1、 微生物基础知识培训 宁波安联检测有限公司 微生物的定义 微生物 microorganism microbe 存在于自然界中的一群体型细小 结构简单 肉眼看不见 必须借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物按其结构 化学组成及生活习性可分为 原核类 仅有原始核质 无核仁或核膜 细胞器很不完善 如细菌 放线菌 支原体 立克次氏体 衣原体 螺旋体 真核类 细胞核的分化程度较高 有核膜 核仁和染色体 细胞器完整 如真菌 酵母菌和霉菌 原生动物 藻类 非细胞类 体积微小 能通过除菌过滤器 如病毒和朊病毒等按其致病性可分为 病原性微生物 非病原性微生物 微生物的特点 个体小 面积大 小于0 1mm 肉眼
2、不可见 分布广 种类多 10万多种 自然界中到处都有 如水 空气 土壤等 土壤中的数量最多 代谢强 转化快 发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重1000 10000倍的乳糖 产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍生长旺 繁殖快 微生物有惊人的繁殖速度 大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代适应性强 易变异 耐药性产生的原因 葡萄球菌 酵母菌 芽痕 棒状杆菌 大肠杆菌 弧状菌 链球菌 菌落单位 菌落单位 CFU由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉眼可见的菌落 每个菌落就是1CFU 微生物的分布 土壤 是微生物生活的最适环境水 仅次于土壤的微生物分布 定居的第二场所空气 空气中的微
3、生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘 这类微生物大多数是腐生性的 还来源于人和动物 它们大多数是通过呼吸道排出的 其中也包含有病原微生物 悬浮在大气中 微生物的类群和形态结构 一 细菌细菌是一类细胞细而短 结构简单 细胞壁坚韧 以二分裂方式无性繁殖的原核微生物 分布广泛 细菌的形态与结构 1 球菌多数球菌直径在1微米左右 外观呈球形或近似球形 由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排列方式 分为双球菌 链球菌 葡萄球菌等 2 杆菌形态多数呈直杆状 也有的菌体稍弯 多数呈分散存在 也有的呈链状排列 分为棒状杆菌 链状杆菌 球杆菌等 3 螺形菌菌体弯曲 呈弧形或螺旋形 如幽门螺杆菌 细菌虽小 仍具
4、有一定的细胞结构和功能 细胞壁 细胞膜 细胞质和核质等各种细菌都有 是细菌的基本结构 球菌 coccus 脑膜炎奈瑟菌 杆菌 bacillus 不同杆菌的大小 长短 粗细很不一致 细菌的繁殖 细菌生长速度很快 一般约20min分裂一次 若按此速度计算 细菌群体将庞大到难以想象的程度 但事实上由于细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗 有害代谢产物的逐渐积累 细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖 经过一段时间后 细菌繁殖速度逐渐减慢 死亡菌数增多 活菌增长率随之下降并趋于停滞 热原与内毒素 许多细菌 病毒和真菌 如酵母菌 都能产生热原 热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称 主要物质为细菌内毒素
5、 胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物 半抗体原物质和某些药物 类固醇 等 1 细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分 主要是脂多糖 2 细菌内毒素生物学活性可分为两类 一是致病作用 一是保护性反应 3 其他理化特性 耐热性 120 加热4h 可破坏98 180 加热2h或250 加热30min 才可彻底破坏 滤过性 其体积小 约在1 5nm之间 故能通过滤器进入滤液中 具有水溶性及不挥发性 能被强酸 强碱和氧化剂破坏 消毒与灭菌 下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度消毒 杀死物体上病源微生物的方法 并不一定能杀死细菌的芽胞 消毒所用的试剂称为消毒剂 灭菌 杀灭物体上所有微生物的
6、方法 灭菌比消毒要求高 包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物 抑菌 抑制体内或体外细菌的生长繁殖 常用的抑菌剂为各种抗生素 可抑制细菌的繁殖 防腐 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 细菌一般不死亡 同一种化学药品在高浓度时为消毒剂 低浓度时常为防腐剂 无菌 不存在活的细菌 防止细菌进入人体或其他物品的操作技术 为无菌操作 消毒与灭菌 辐射灭菌法1 紫外线 波长200 300nm的紫外线具有杀菌作用 穿透物质的能力很差 一般要求紫外灯距离照射物不超过1 0米为宜2 电离辐射高速电子 X射线 射线3 微波波长1mm 1m 热力灭菌法 使蛋白质 酶及核酸永久性破环 细胞膜溶解 导致细胞
7、发生不可逆转的死亡 1 干热灭菌法 采用灼烧或干热空气灭菌 使用方便 适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 2 湿热灭菌法 利用热蒸汽杀死微生物 高压蒸汽灭菌 利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法 蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生物 包括细菌的芽孢 真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体 最可靠最适用最广泛的灭菌方法 水质微生物采样 自来水 现将自来水龙头用火焰烧灼3min 灭菌 再打开水龙头防水5min 常用的水龙头可以防水2 3min 采样水置于无菌锥形瓶中 采样总量占锥形瓶的80 左右 以便摇匀 水源水 选取可疑及有代表性的水域 一般距离水面10 15cm采样 河道水采样时 将瓶口朝向
8、水流方向 在指定位置打开瓶盖 采样结束后 样品冷藏运输 尽快检测 样品处理 实验准备 实验步骤及报告详见作业指导书 染色 革兰氏染色法 革兰染色法是丹麦内科医生ChristainGram于1884年创立的一种细菌复染色方法 已有130多年的历史 仍在广泛使用 通透性学说 等电学说 化学学说 鉴别细菌 把细菌分成G 和G 两大类 选择抗菌药物 例如G 球菌对青霉素敏感 G 杆菌耐药 了解细菌的致病机理 G 菌大多产生外毒素 G 菌产生内毒素 革兰染色的步骤涂片 干燥 固定 染色紫碘酒红 分分半半 意义 灭菌接种环 细菌合适 细菌较多 接种环取盐水3ul 2滴 水滴间距小于2cm 取菌苔少许 1mm小菌落半个 与盐水混匀 涂成大于1cm2均匀涂膜 涂毕 环移至涂膜中央侧立 待环内菌膜破裂 接种环烧灼灭菌 固定Fixation 涂片smear 干燥dry 手持载玻片一端 涂膜朝上 两个涂膜快速通过火焰外层3次 时间2 3秒钟 促使菌体蛋白质凝固 固定在载玻片上 以免染色水洗的时候 细菌被水洗掉 Thanks
