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1、1金线莲乙酸乙酯提取物降血糖作用的研究作者：刘青 刘珍伶 肖兵 叶静 【摘要 】 目的 探讨金线莲乙酸乙酯提取物的降血糖作用及其机制。方法 将正常和糖尿病小鼠随机分为 5 组，14 d 后，测定各实验组小鼠肝糖原、血糖等指标。结果 金线莲乙酸乙酯提取物能显著降低糖尿病小鼠的血糖，使糖尿病小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性升高，丙二醛（MDA ） 、三酰甘油 (TG)、总胆固醇（TC）的含量显著降低,小鼠肝糖原含量明显增加。结论 金线莲乙酸乙酯提取物有降血糖作用，其降糖机制可能与其调节血脂水平、增加外周组织对葡萄糖的利用及提高糖尿病小鼠的抗氧化能力有关。【关键词】 金线莲；乙酸乙酯提取物；血
2、糖；血脂；抗氧化 Abstract:Objective To study the hypoglycemic effect and mechanisms of the ethyl acetate extract from Anoectochilus formosanus. Methods The healthy mice and the hyperglycemic mice induced by streptozotocin (STZ) were divided into five groups. After 14 days, the blood glucose level, the blood
3、 lipid, the activity of the superoxide dismutase (SOD), and the content of maleic dialdehyde (MDA) were examined. Results The ethyl acetate extractive from 2Anoectochilus formosanus can decrease the blood glucose levels, the content of triglyceride (TG), and total cholesterol (TC). The ethyl acetate
4、 extractive from Anoectochilus formosanus can activate SOD and decrease the content of MDA significantly. Conclusion The ethyl acetate extract from Anoectochilus formosanus has obvious hypoglycemic effect and the mechanisms are involve in the regulation of lipid metabolism, improving glucose utiliza
5、tion, and increasing the activity of the antioxidant enzymes. Key words:Anoectochilus formosanus; the ethyl acetate extract; blood glucose; blood lipid; antioxidant 金线莲是我国传统中药，常用于治疗糖尿病、关节炎等疾病1 。金线莲具有低毒的特点同时又含有多种氨基酸2 ，民间有药食同源的悠久历史，因而金线莲有很好的开发应用前景。有学者对金线莲做过初步研究，认为其降糖作用的有效成分主要存在于金线莲的大极性组分中即水溶性成分，而中等极性及
6、低极性组分无降糖作用3 。此外，关于金线莲的降血糖作用机制的研究还有待深入。 本课题组对金线莲做了系统研究，分离出金线莲的大、中、小极性成分，对其成分进行活性研究并对其作用机制做深入探讨。本文总结了金线莲的中等极性成分的降糖作用及机制，为进一步从金线莲中等极性成分中分离有效成分提供实验依据。 31 材料与方法 1.1 材料与仪器 金线莲（Anoectochilus formosanus）植物标本由福建中医学院中药鉴定室杨成梓教授鉴定, 金线莲乙酸乙酯提取物由兰州大学功能有机分子化学国家重点实验室提取并提供；盐酸二甲双胍片为深圳市中联制药有限公司产品（批号 0707201） ；链脲佐菌素（str
7、eptozotocin,STZ）为 Sigma 公司产品；血糖、肝糖原、超氧化物歧化酶（SOD）活性升高，丙二醛（MDA） 、三酰甘油 (TG)、总胆固醇（TC）试剂盒购自南京建成生物工程研究所；其余均为市售分析纯试剂。 实验动物为昆明种清洁级小鼠，雄性，体质量（252）g，由福州海王福药制药有限公司提供。许可证号：SCXK（闽）20050003。 752N 紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司） ；TDL60B 台式离心机 (上海安亭科学仪器厂) ；BS124S 分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司) ；HHS 数显恒温水浴锅(常州市国立试验设备研究所)；XHC 旋涡混合器(常州市国
8、立试验设备研究所)。 1.2 链尿佐菌素（STZ）糖尿病小鼠模型的建立及分组 建模按文献4 。小鼠禁食 12 h 后按 200 mgkg-1 ip STZ (用 0.1 molL-1，pH 4.5 柠檬酸缓冲液配制为 20 gL-1 的溶液)，72 h 后，测定小鼠空腹血糖，选取血糖值大于 11.1 mmolL-1 小4鼠作为糖尿病模型小鼠。 将正常小鼠和 STZ 诱导成功的糖尿病小鼠随机分为正常对照组、模型组、二甲双胍组（200 mgkg-1） 、金线莲乙酸乙酯提取物高、低剂量组（600 mgkg-1、300 mgkg-1） 。正常组与模型组小鼠 ig 生理盐水，每天记录小鼠质量。实验连续
9、14 d，末次给药 2 h 后取血，分离血清检测血糖、血脂及抗氧化指标，并检测小鼠肝糖原含量。 1.3 统计学处理 实验结果以(s)表示，进行组间 t 检验，以 P0.05 为差异有显著性。 2 结 果 2.1 对小鼠体质量的影响 实验开始时各组小鼠的体质量无明显差异，正常组小鼠的体质量随实验时间的延长而增加，模型组小鼠与正常组小鼠质量相比明显减轻（P0.01） 。各给药组小鼠与模型组比较，体质量无明显差异（表 1） 。广东药学院学报， 2008，24(5)第 5 期 刘青,等.金线莲乙酸乙酯提取物降血糖作用的研究表 1 各组小鼠体质量 2.2 对小鼠血糖的影响 实验开始时，正常对照组小鼠的血
10、糖与模型组相比差异显著（P0.01） ，模型组小鼠血糖明显升高，表明糖尿病模型建立成功。14 d 后，金线莲乙酸乙酯提取物组小鼠血糖与模型组相比明显降低（P0.01, P0.05）, 见表 2。 表 2 金线莲提取物对小鼠5血糖的影响 2.3 对小鼠血脂的影响 由表 3 可见，模型组小鼠血清中 TC 和 TG 含量明显高于正常组（P0.01） ，给予药物治疗后，二甲双胍组及金线莲乙酸乙酯提取物组小鼠血清中 TC、TG 值有下降趋势，其中金线莲乙酸乙酯提取物高剂量的作用较强。提示金线莲乙酸乙酯提取物对糖尿病小鼠血脂有调节作用。表 3 金线莲提取物对小鼠血脂的影响 2.4 对小鼠抗氧化作用的影响
11、模型组小鼠血清中 SOD 活性与正常组相比明显降低（P0.01） ，MDA 含量则明显升高（P0.01） ，表明糖尿病模型小鼠的抗氧化能力明显弱于正常小鼠。而二甲双胍组及金线莲乙酸乙酯提取物组小鼠的 SOD、MDA 有恢复趋势，其中二甲双胍组、金线莲乙酸乙酯提取物高剂量组能够显著升高 SOD 活性，降低MDA 含量，与模型组比较差异有显著性。表明金线莲乙酸乙酯提取物能增强糖尿病小鼠的抗氧化能力（表 4） 。表 4 金线莲提取物对小鼠抗氧化指标的影响 2.5 对小鼠肝脏糖原含量的影响 由表 5 所示，模型组小鼠肝糖原含量与正常组相比显著减少（P0.01） ，二甲双胍组及金线莲乙酸乙酯提取物组小鼠
12、肝糖原含量与模型组比差异显著（P0.01 ，P0.05） 。提示金线莲乙酸乙酯提取物有增强糖尿病小鼠肝糖原含量的作用。 表 5 金线莲提取物对小鼠肝糖原含量的影响 63 讨 论 注射 STZ 后，小鼠体质量逐渐减轻，血糖值与正常组小鼠相比显著升高，说明糖尿病小鼠模型是成功的。给予金线莲乙酸乙酯提取物 14 d 后，小鼠血糖明显下降，提示金线莲乙酸乙酯提取物有降血糖作用。 肝脏是糖代谢的主要器官，通过促进糖原合成、葡萄糖利用及抑制糖异生等途径使血糖降低。糖尿病小鼠体内胰岛素水平下降时，肝脏糖代谢出现紊乱，糖原合成降低，葡萄糖利用减少，糖异生加强，血糖升高。金线莲乙酸乙酯提取物能明显提高肝糖原的含
13、量，改善糖尿病小鼠糖代谢紊乱，促进肝糖原的合成，从而降低血糖。 脂代谢紊乱是糖尿病发病中的重要方面，糖尿病时机体内的脂肪合成减少，分解加速。脂质代谢紊乱引起血脂增高，甚至导致大血管和小血管动脉硬化，临床出现高脂血症、脂肪肝、高血压等并发症。此外，过度增加脂肪分解，就会产生酮体，酮体超过机体的利用限度，就会诱发酮血症及酮尿症。本实验表明，金线莲乙酸乙酯提取物对糖尿病小鼠血清中三酰甘油、血清胆固醇的异常升高具有缓解作用，能有效降低小鼠血脂水平。 近年来发现糖尿病及其并发症的发生与机体的氧化应激增加有关，抗氧化剂用于糖尿病的治疗已经开始起步5，6 ，糖尿病患者体内存在糖的多种代谢产物，常导致机体自由
14、基过量生成，而引起胰岛 细胞被破坏，分泌胰岛素能力下降。SOD 是机体主要7的抗氧化酶，可清除细胞中的超氧阴离子自由基，而 MDA 是脂质过氧化物的最终产物，能反映细胞损伤的程度。本实验中，金线莲乙酸乙酯提取物能提高小鼠血清 SOD 活力，降低 MDA 含量，提高糖尿病小鼠体内抗氧化水平，提示可能与改善 细胞的功能而降低血糖有关。 本实验中的乙酸乙酯部分含有金线莲植物的中等极性成分的提取物，如甾醇、三萜、甙类等，实验结果表明有较好的降糖作用，此结果与文献3报道的的实验结果不同。丙酮提取物与乙酸乙酯提取物，两者的有效成分是否存在差异，本课题还在进一步研究中。本实验结果为进一步从乙酸乙酯成分中分离
15、有效成分提供了实验依据。 【参考文献】 1 马志杰，胡宏友. 民间药材金线莲研究动态J. 亚热带植物科学，2002, 31(增刊): 27-31. 2 赖应辉, 吴锦忠. 金线莲中无机元素及糖类的分析J . 中药材, 1997, 20 (2): 84-85. 3 陈卓，黄自强. 金线莲及其提取物降血糖实验研究J . 福建医科大学学报，2000, 34 (4): 350-351. 4 周巧霞, 张经硕, 茅彩萍，等. XGY 对糖尿病小鼠的降血糖作用及其机制研究J. 苏州大学学报：医学版，2006, 26 (4): 8575-578. 5 郭婷，逢键梁，王晓波，等. 氧自由基与胰岛素依赖型糖尿病发病机制J. 国外医学：生理病理学与临床分册， 1999，19 (4): 320-332. 6 VENUGOPAL S K, DEVARAJ S, YANG T, et al. Alphatocopherol decreases superoxide anion release in human monocytes under hyperglycemic conditions via inhibition of protein kinase CalphaJ. Diabetes, 2002, 51 (10): 3049-3054.
