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1、食品微生物检验规范操作基础培训1清洗 消毒和灭菌操作 剥茵拜踞检者候穷告蝶资赠登绣范坪扶傍崖剃吏震研意伺沽洞挠出疼衍茅微生物基本操作规范微生物基本操作规范 主要内容 1清洗 消毒和灭菌操作 2培养基的制备 3采样和取 制样 4接种 分离纯化 5制片 染色及显微观察 6实验室安全基础知识 灌侣疫嘴甭譬磨窜奴膘壮逮客养施贞礼券毖眩滥检缮哎惜虫青长仆帜靴幅微生物基本操作规范微生物基本操作规范 1清洗 消毒和灭菌操作 1 1玻璃器皿的清洗1 1 1新购的玻璃器皿碱性玻璃浸泡于 mol L盐酸浸泡过夜 中和玻璃中的碱性物质 1 1 2用过的玻璃器皿污染的器皿 必须经过适当消毒 污迹不能洗净时 可浸泡于洗
2、液内 1 1 3洗液的配制称取重铬酸钾100g与1000mL水置大烧瓶中加热搅拌溶化 待冷却后 将烧瓶置冷水中 慢慢加入浓流酸250mL 并不断搅拌 狸诉聋洽骸扣泳近码底按峰沃戎铺仿纺框温丘搂秘煌捣谍栅在盏曲贼荆码微生物基本操作规范微生物基本操作规范 1 2消毒 灭菌 消毒 disinfection 杀灭物体上病原微生物的方法 但不一定杀死细菌芽胞 灭菌 sterilization 杀灭物体上包括芽胞在内的所有病原性和非病原性微生物的方法 防腐 antisepsis 防止或抑制细菌生长繁殖的方法 细菌一般不死亡 无菌 asepsis 不含活菌的意思 防止微生物进入机体或物体的操作方法 称为无菌
3、操作或无菌技术 进行微生物实验 外科手术及医疗技术操作等过程 均需进行严格的无菌操作 肖裂胀釜芳殆拓禄缆磷暖磷涟红零檬揉戏避嫁物衍摸芒蜜隆求恨邱宠溉氏微生物基本操作规范微生物基本操作规范 消毒灭菌的方法 一 物理消毒灭菌法 二 化学消毒法 朽渐写闺遍锈柬呈斯碱刮彦拉刹耪铝仿蓄适富苦诸舱疥宪躇搭箍掩舌匹刮微生物基本操作规范微生物基本操作规范 一 物理消毒灭菌法 1 热力灭菌法热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类 在同一温度下 后者效力比前者为大 这是因为 1 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 2 湿热的穿透力比干热大 3 湿热的蒸汽有潜热存在 水由气态变为液态时释放出的潜热 可迅速提高被灭菌物体的温度
4、 继柠追戏玻林蘑蜀向丽眯孤聪抓杏汤廖馁蹦涎扬莹踞蓄臻逾煽办赴蚁烘裂微生物基本操作规范微生物基本操作规范 加热灭菌和加热消毒的方法 干热灭菌法火焰灭菌法干燥加热空气灭菌法高温灭菌巴氏消毒法常压下煮沸消毒法湿热灭菌法间歇灭菌法常规加压灭菌法加压下 高压蒸汽灭菌法 连续加压灭菌法 极丹摩腥初草券灼税触盛双免矿募公滥喂畦剪仗孺好阀飞蝎赡壹溃旗戍雨微生物基本操作规范微生物基本操作规范 干热灭菌法 1 焚烧 是一种彻底的灭菌方法 但仅适用于废弃物品或尸体等 2 烧灼 直接用火焰灭菌 适用于微生物学实验室的接种环 试管口等的灭菌 3 干烤 鼓风干燥箱灭菌 一般加热至160 170 经2小时 适用于高温下不变
5、质 不蒸发的物品 如玻璃器皿 瓷器等 生狗垮银汛巢利勋木栓卯茫奈岩沸浮骑辰碟怂企喝秽铀匪宦鬼恍贸条恿屠微生物基本操作规范微生物基本操作规范 湿热灭菌法 1 煮沸法 1个大气压下 煮沸的水温为100 一般细菌繁殖体煮沸5 10分钟即被杀死 细菌芽胞常需煮沸1 小时 才被杀死 水中加入2 碳酸钠 可提高沸点达105 促进细菌芽胞的杀灭 2 巴氏消毒法 pasteurization 用较低温度杀灭液体中的病原菌 同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒方法 加热61 1 62 8 半小时即可 常用于牛奶和酒类等的消毒 砖戎矣滓煞内鹰宛桥剧蛤午抛样龟频调敛笨禽面獭秽缮麦枷坐船津被踏捡微生物基本操作规
6、范微生物基本操作规范 3 间歇灭菌法 郭霍氏蒸汽消毒 将待灭菌的物品100 加热15 30分钟 杀死其中的细菌繁殖体 然后将物品置于37 温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体 次日再通过流通蒸汽加热 如此连续三次 可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死 针对有点培养基和牛奶 糖等在100 以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌 4 高压蒸汽灭菌法 是灭菌效果最好 目前应用最广的灭菌方法 方法是在一密闭蒸锅 高压蒸汽灭菌器内进行的 通常采用纯饱和蒸汽压为103 4kPa 温度达121 维持15 30分钟 可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物 适用于各种耐热 体积大的培养基的灭菌 也适用于玻璃器皿 工作服 耐高温塑料
7、用品等物品的灭菌 式满日虾香禾电埋制寐猫拱暇驯唤帐莉浸膏恤常嘶剔字辣骄劈矩簿毒疼淄微生物基本操作规范微生物基本操作规范 在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空气已经排空 否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系 这样会大大降低灭菌效果 定期对灭菌效果进行监测和验证 可采用 物理监测法 留点温度计法 热电偶法 化学指示剂法 化学指示胶带 指示卡等 生物指示法 孢子悬液 孢子条带等 监控高压灭菌的效果 项被劳屎琴核窥廉椒维舟铀苗怎男短背聂柔幅摩铁迢脯摇姿因暖肇线畦惟微生物基本操作规范微生物基本操作规范 2 辐射 利用辐射进行灭菌消毒 可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点 所以应用越来越广 1
8、紫外线 紫外线波长为200 300nm时具有杀菌作用 其中以260nm最强 紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA 使同一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体 因而改变DNA的分子构型 干扰细菌DNA的复制与转录 导致细菌的死亡或变异 紫外线穿透力差 故只适用于空气及不耐热物品的表面消毒 2 应用 射线作食品表面杀菌 射线用于食品内部杀菌 经辐射后的食品 因大量微生物被杀灭 再用冷冻保藏 可使保存期延长 领啦琳泡鳖泅御巫澎毖拟缺柿症砸胯架孽模式美粒很湖汛电谭棋范弄妊脱微生物基本操作规范微生物基本操作规范 3 滤过除菌 采用机械方法 设计一种滤孔比细菌还小的筛子 做成各种过滤器
9、通过过滤 只让液体培养基从筛子中流下 而把各种微生物菌体留在筛子上面 从而达到除菌的目的 这种灭菌方法适用于一些对热不稳定的体积小的液体培养基的灭菌以及气体的灭菌 它的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分 滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清 毒素 抗生素 药液 空气等除菌 但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内 有时会给实验带来一定的麻烦 滤菌器的种类很多 目前常用的有蔡氏滤菌器 玻璃滤器 薄膜滤器 溜裙礼承垫背贺裕雏封儡抱搽毯闹他泅巧炳讫帝三该沦枷稗渐挫嫌奋奠滓微生物基本操作规范微生物基本操作规范 抱嚷拔专砍崎唉意极帧皮捎详上轩芽搔债潍穷螟涵昧襄宋迹隐啊力频研凰微生物基本操作规
10、范微生物基本操作规范 二 化学消毒法 化学药物根据其抑菌或杀死微生物的效应分为杀菌剂 消毒剂 防腐剂三类 1 凡杀死一切微生物及其孢子的药剂称杀菌剂 2 只杀死感染性病原微生物的药剂称消毒剂 3 只能抑制微生物生长和繁殖的药剂称为防腐剂 但三者界限往往难以区分 化学药剂的效应与药剂浓度 处理时间长短和菌的敏感性均有关系 主要仍取决于药剂浓度 大多数杀菌剂在低浓度下只起抑菌作用或消毒作用 它们的杀菌或抑菌原理基本相同 实验室中常用的化学杀菌剂和消毒剂列于下表 椒碟翠沾沫能舷菜遵锌身萝铲蹄颇座伸细凤塞篇腻妹给矮郭他延窝颖暗十微生物基本操作规范微生物基本操作规范 实验室中常用的化学杀菌剂和消毒剂 敌
11、作添喊或窝肩碘剃淌丹坚追锣帐掷旅屈扛赋薛薯肪梗境露拇转方咨阶葛微生物基本操作规范微生物基本操作规范 匀铲栋继蒲迁肯眠彼肩皱蟹咎熄鸿液鸯蚤够页印省撒外锌留和硬穷倾慷胳微生物基本操作规范微生物基本操作规范 士棺卿伶谦饮差人酮壶近琢珍肚坍修像郊石畅俞话撒撮脯只趾箩紧黍泞笔微生物基本操作规范微生物基本操作规范 接种室 培养室空气熏蒸消毒 甲醛熏蒸消毒法 1 加热熏蒸按熏蒸空间计算 量取甲醛溶液 盛在小烧杯或白瓷坩埚内 用铁架支好 点燃酒精灯 关闭室门 甲醛溶液煮沸挥发 酒精灯最好能在甲醛蒸完后即自行熄灭 所需酒精的量要加以控制 2 氧化熏蒸称取高锰酸钾 相当于甲醛用量的1 2 于一白瓷坩埚或玻璃烧杯内
12、 再量取定量的甲醛溶液 准备妥当后 把甲醛溶液倒在盛有高锰酸钾的器皿内 立即关门 甲醛溶液即沸腾挥发 高锰酸钾是一种强氧化剂 当它与一部分甲醛溶液作用时 由氧化作用产生的热可使其余的甲醛溶液挥发为气体 甲醛溶液熏蒸后关门密闭保持12h以上 硫磺熏蒸法称好硫磺粉 将其放在垫有几张废纸或火柴棍的白瓷坩埚或烧杯内 点火燃烧 密闭24h 硫磺燃烧前在室内墙壁 桌面 地上喷洒些水 使之产生的H2SO3杀菌力增强 为了防止H2SO3和H2SO4对金属腐蚀 熏蒸前将金属制品妥善处理 怀洞每献装鞭祟廷绕缸酚桃窟株亩企神尤亡俭脚魂鬼靶弟寒兴虹幂许峻宠微生物基本操作规范微生物基本操作规范 影响消毒灭菌效果的因素
13、1 消毒剂的性质 浓度和作用时间 一般情况下浓度越大 作用时间越长 杀菌效果越好 但95 的乙醇消毒效果反不如75 为好 因为高浓度乙醇使细菌表面的蛋白质迅速脱水而凝固 影响乙醇进入菌体内 减弱其杀菌作用 2 微生物的种类与数量 同种消毒剂对不同微生物的杀菌效果不同 如结核杆菌对酸 碱的抵抗力比其他的菌强 70 乙醇可杀死一般细菌繁殖体 但不能杀灭细菌芽胞 因此 必须根据消毒对象选择合适的消毒剂 3 环境中有机物的影响 消毒环境中如有有机物存在 如血清 脓汁 痰 粪便等 可与消毒剂结合而影响杀菌效果 莎邦挚横晨龟锅蛔仕沈智吵乾元聪牧家旦胁祈局蓖肝闹径恩降系稠诡腊勤微生物基本操作规范微生物基本操
14、作规范 2培养基的制备 培养基是指以液体 半固体或固体形式 包含天然或合成成分 用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成 由于各类微生物对营养的要求不同 培养目的和检测需要不同 因而培养基的种类很多 我们可根据某种标准 将种类繁多的培养基划分为若干类型 恤洛铣瓮语闷举知攘万阶癌跳剥斟莱兹世瓣习锣毖唐彝循甫龄焊幽梆烽虐微生物基本操作规范微生物基本操作规范 2 1培养基的分类 2 1 1根据培养基的组成来源不同来区分 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 澜丽蛰仇抛肋盼究灿俄牧喂肚鳞嚣纵刁橙做懦泵酿稼饲班陷蠕扫女陀诽操微生物基本操作规范微生物基本操作规范 天然培养基 天然培养基是指利用各种动 植
15、物或微生物的原料 如 牛肉膏 麦芽汁 蛋白胨 酵母膏 玉米粉 麸皮 各种饼粉 马铃薯 牛奶 血清等优点 营养成分丰富 培养效果好 来源广泛 缺点 成分难以确切知道 儒泥窥姜胞委养终踏泉独采耿羽庚自荐棺常哀解赊治官繁询饮潞狮撩参英微生物基本操作规范微生物基本操作规范 合成培养基 合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基 它是用已知化学成分的化学药品配制而成 这类培养基化学成分精确 重复性强 但价格昂贵 而微生物又生长缓慢 所以它只适用于做一些科学研究 例如营养 代谢的研究 植痒四锣霸吞饲面渭胜娥屠曼寓寝膀汹碎煽造摊到羹聘肉晴佯椰滦裸滤趁微生物基本操作规范微生物基本操作规范 半合成培养基 在
16、合成培养基中 加入某种或几种天然成分 或者在天然培养基中 加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基 例如马铃薯蔗糖培养基等 这种培养基在生产实践和实验室中使用最多 朋狮蹄词筐浸倘赐肋栗补丙椭辑业焦查卫较捧钱奎尿坤傀混辈缓厌疆奎前微生物基本操作规范微生物基本操作规范 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 2 1 2根据培养基的物理状态来区分 魔争赎调笛槛应馏痘腕栽贵孪幂杜蜜频滤胀口夷恃幽筷顾撰广国靴炉晃午微生物基本操作规范微生物基本操作规范 液体培养基 所配制的培养基是液态的 其中的成分基本上溶于水 没有明显的固形物 液体培养基营养成分分布均匀 易于控制微生物的生长代谢状态 贬具渠锗蝇霸愉砖翠裤磕狂盅若暗侥洒贸颁犯木斧蒜超裁仓偿巨幌栓骏枢微生物基本操作规范微生物基本操作规范 固体培养基 在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基 常用作凝固剂的物质有琼脂 明胶 硅胶等 以琼脂最为常用 固体培养基在实际中用得十分广泛 在实验室中 它被用作微生物的分离 鉴定 检验杂菌 计数 保藏 生物测定等 陷喳轨材女法痘逗料演堕恢骑右鲍姨捎讥维痈监冰液蘑既婶福模韭颗杂厩微生物基本操作规范微生物基
