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1、1血卟啉-赫赛汀光敏免疫偶联物的制备及光敏免疫疗效研究作者：陈璐，罗荣城，李黎波，严 晓，丁雪梅 【关键词】 血卟啉 摘要：目的 制备光敏剂血卟啉（HP）- 单克隆抗体赫赛汀的光敏免疫偶联物，并观察偶联物对 BT-474 人乳腺癌细胞的杀伤及凋亡作用。 方法 以碳二亚胺为缩合剂，化学制备 HP-赫赛汀光敏免疫偶联物。给予波长 630 nm 激光照射后，用 MTT 法、FCM 检测比较免疫偶联物和游离 HP 对 BT-474 人乳腺癌细胞的杀伤及凋亡作用。 结果 含同剂量 HP 的偶联物较游离 HP 对 BT-474 细胞的杀伤及凋亡效果明显增强（P0.05 ） 。 结论 成功制备 HP-赫赛汀
2、光敏免疫偶联物，该偶联物对 BT-474 人乳腺癌细胞的杀伤作用强于游离 HP。 关键词：光免疫疗法；血卟啉；赫赛汀；光敏免疫偶联物；BT-474；乳腺肿瘤 Abstract: Objective To prepare the photoimmunoconjucate of hematoporphyrin (HP) and 2herceptin, and study its killing and apoptosis-inducing effect on tumor cells BT-474. Methods HP-herceptin photoimmunoconjugate was synt
3、hesized with EDCI as the condensator. After exposure of the cells to 630 nm laser, the killing effect of the conjugate and cell apoptosis were evaluated by MTT assay and flow cytometry. Results Compared with free HP at equivalent dose, the immune reactivity, killing effect and the apoptosis-inducing
4、 effect of HP-herceptin immunoconjugate on BT-474 cells was enhanced (P0.05） （图 1） 。 2.3 对 BT-474 细胞杀伤作用比较（MTT 法） 将各实验组药物分别加入同一块接种有 BT-474 细胞的 96 孔板中，同时进行测定，结果见图 2。在 HP 剂量相同的情况下，HP-赫赛汀偶联物对 BT-474 细胞的杀伤效果明显优于游离 HP 及单纯赫赛汀组（P0.05 ） 。显微镜下观察，偶联物组细胞死亡比例也远高于其他实验组，并且随着药物浓度的增加，细胞死亡率增加。7图 1 HP-赫赛汀与赫赛汀单抗免疫活性比较
5、 Fig.1 Comparison of immune activities between HP-herceptin immunoconjugate and herceptin mAb 图 2 MTT 法检测偶联物对 BT-474 细胞的杀伤作用 Fig.2 Killing effect of photoimmunoconjucate on BT-474 cells assessed with MTT method 2.4 对 BT-474 细胞杀伤作用的比较（流式细胞术） 偶联物组的杀伤作用和 MTT 法所测一致，明显高于游离 HP组及赫赛汀单抗组，总体凋亡率依次为 79.8、68.7和1
6、6.9（P0.05，图 3） 。图 3 流式细胞术检测偶联物对 BT-474 细胞的杀伤及凋亡作用 Fig.3 Killing effect and apoptosis-inducing effect of hotoimmunoconjucate on BT-474 cells assessed with flow cytometrya: Control group; b: HP-herceptin; c: HP; d: Herceptin 3 讨论 单克隆抗体靶向制剂属于主动靶向给药系统，其中抗体既能将偶联后的药物特异性地导向靶细胞，同时又能发挥其药物储库作用，使药物在靶区释放时间延长，维持
7、靶区有效的药物浓度而发挥其抗肿瘤作用，又能降低药物在其他组织的分布所引起的副作用。国外先后有学者用 Chlorin(e6)与特异性抗体制备偶联物用于卵巢癌、结直肠癌的肝转移，m-THPC 与单克隆抗体偶联物治疗卵巢癌等 6-8，均证实偶联物有效提高了肿瘤光敏杀伤效应，减少光副作用。 8本研究制备方法简单可行，利用碳二亚胺为缩合剂，把光敏剂 HP 及单克隆抗体赫赛汀进行缩合反应，并用双波长法对偶联物进行定量分析，且可通过控制 HP 与赫赛汀的反应投料比而得到含不同摩尔比的偶联物。溶血实验和 ELISA 法证明通过此方法所得的偶合物保留了赫赛汀的免疫活性和 HP 的光敏活性。在同等 HP 剂量条件下，光敏免疫偶联物对靶细胞的杀伤作用及总体凋亡率较游离 HP 及单纯赫赛汀显著提高。由于赫赛汀的导向作用，使更多 HP浓集于肿瘤细胞。有文献报道光敏剂的作用机制与其引起细胞的凋亡有关，而单纯赫赛汀
