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1、1艾滋病病毒抗体检测外部质控参考品制备和应用【摘要】 目的 制备艾滋病抗体检测的外部质控参考品，以保证艾滋病筛查实验室的检测质量。方法 用人类免疫缺陷病毒（HIV ）抗体阴性血清稀释阳性对照的方法，经过国产试剂检测，制备出弱阳性标本的质控参考品，并绘制质控图。结果 根据 HIV 抗体弱阳性的标准，确定按照 18 稀释度制备外部质控血清，其质控物吸光度值/ 临界值（S/CO）为 2.54，变异系数为 15.2%。结论 自行制备的 HIV 抗体弱阳性标本质控参考品用于 HIV 筛查实验室的质量控制和评价是经济可行的。 【关键词】 人类免疫缺陷病毒 抗体 质量控制 ABSTRACT Objectiv
2、eTo make AIDS virus antibody preparation for quality control reference and ensure the quality of AIDS screening. MethodsWeakly positive anti-HIV quality control reference was prepared by diluting the positive control of domestic reagent with normal negative serum, and mapped quality control chart.Re
3、sultsAccording to the standard of weakly positive anti-HIV, external quality control reference was prepared by the dilution of 18, its S/CO value was 2.54, and detected together with clinical samples and its coefficient of variation was 15.2%. ConclusionIt is economic and feasible to prepare weakly
4、2positive anti-HIV quality control reference for laboratory screening of HIV. KEY WORDSHuman immunodeficiency virus; Antibody; Quality control 随着艾滋病流行形势的日趋严峻,新发现的感染者数量不断增加,艾滋病检测也显得越来越重要。目前，国内检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的方法主要是酶联免疫法(ELISA)，而其检测结果受到试剂的质量、检验人员的操作水平以及实验室条件等诸多因素的影响。制备 HIV 抗体质控血清是对艾滋病初筛实验室进行全面质量评价的重要
5、手段，对于提高检测工作水平具有重要的意义。为了探讨自制弱阳性标本质控参考品的可行性，本文采用 HIV 抗体阴性血清稀释阳性对照的方法，经过国产试剂检测，制备出弱阳性标本的质控参考品，用于艾滋病初筛实验室的质量控制和质量评价，现报告如下。1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 美国 Bio-Rad 公司生产 Coda 全自动酶标仪；芬兰 Wellwash plus 洗板机；北京万泰 HIV（1+2 型）ELISA 抗体诊断试剂盒（双抗原夹心法） 。 1.2 方法 1.2.1 外部对照的制备 使用同一批号的试剂盒，将同一批号的 HIV 型和 HIV 型阳性对照等量混合 ,然后经 3 000 r/min
6、 离心 15 min 去除蛋白质沉淀，56 加热 30 min 灭活处理，3取正常查体者（所有肝炎标志物及 HIV 均阴性）血清对上述阳性对照做 5100 倍系列稀释，测定 HIV 抗体的滴度和各稀释度的质控物吸光度值/临界值(S/CO)，每稀释度平行做 3 孔，取其平均值。按照 HIV 抗体弱阳性(S/CO=2.02.9)的标准，确定外部质控血清的稀释度。将外部质控血清用 0.2 m 滤膜过滤除菌，按每天试验用量分装、标记、封口，-20 冻存于非自动除霜冰箱中。 1.2.2 绘制质控图 根据外部对照质控血清连续检测 20 d 所测得的 S/CO 值计算出 xs，以试验日期为横坐标 (X 轴)
7、、以 S/CO 值为纵坐标(Y 轴)绘制质控图。从第 21 次起，将每次质控血清的检测结果依次绘入该质控框架图中，检验进入质控状态。将自行制备的外部质控品每天与临床标本同时进行 HIV 抗体检测，计算室内质控变异系数（CV） 。 1.2.3 稳定性试验 将制备的质控品-20 冰箱分别保存2、4 、6 、 8、10 、12 月后再进行抗 HIV 抗体检测。 2 结 果 2.1 HIV 抗体不同阳性程度的稀释度 将 HIV 抗体阳性对照用 HIV 抗体阴性血清进行 5100 倍稀释，进行 HIV 抗体检测并计算 S/CO 值，当稀释度为 15110 时，其 S/CO 值为 2.103.91；稀释度
8、 1151100 时，S/CO 值范围为 0.571.36。按照 HIV 抗体弱阳性(S/CO=2.02.9) 的标准，确定外部质控血清的稀释度为 15110，根据此稀释度进一步进行倍比稀释，18 稀释时 S/CO 值为 2.54，确定 18 为制备室内4外部质控品稀释度。20 d 后计算 S/CO 平均值为2.760.42，S/CO 质控范围为 2.323.18，CV 值为 15.2%。 2.2 稳定性试验 将制备的质控品在-20 冰箱冻存，每两个月进行一次稳定性检测，S/CO 波动范围为 2.462.80，没有超出质控范围。 3 讨 论 质量控制是质量管理的一部分, 分为分析前的质量控制、
9、分析中的质量控制及分析后的质量控制，总称总质量控制或全面质量控制1 。制备 HIV 抗体质控血清是对艾滋病初筛实验室进行全面质量评价的重要手段，对于提高检测工作水平具有重要的意义。 质量评价通常是使用外来已知的标本对被评价的实验室进行评价与监控，是对实验结果的综合评定，良好的质量保证和质量控制措施是取得好的质量评价结果的前提和保证。ELISA 法检测 HIV 抗体的室内质控，可用吸光度值表示，也可用质控物 S/CO 值表示。李金明2认为，使用较强阳性的质控物作图时，以上两种方法均可采用；而用中、弱阳性质控物作图时，用 S/CO 值表示更科学、更精确。多年以来,基层医院检验科对 ELISA 法检
10、测 HIV 抗体的室内质控一直不够重视，认为不像生化定量那样有具体、直观的数字结果，且试剂盒内已有阴、阳性对照，结果明了，认为没有必要和没有好办法进行质控。 我们实验室一直采用 S/CO 值进行室内质控并收到良好的效果，自行研制抗 HIV 抗体外部质控参考品，经临床应用变异系数小于520，又进行为期 1 年的稳定性试验，1 年后外部质控品 S/CO 值在质控范围内，表示外部质控品处于良好稳定状态。建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，如更换不同厂家的试剂盒，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图，且使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。另外，使用新批次的外部
11、对照质控物时，必须重新绘制质控图。 由于少数 HIV 携带者正处于感染以后 13 个月的窗口期，此时的抗体浓度不高，检测可能出现弱阳性结果，因此，HIV 抗体检测S/CO 值对 HIV 感染者的早期诊断、动态观察和治疗效果都有重要的临床意义。强阳性外部对照血清的稀释注意要用正常人的血清，最好不用生理盐水或其他缓冲液稀释，以保证蛋白质处于天然的浓度和状态，不加任何防腐剂，同时制备足够的量以维持一定的时间，建议每年制备一次。 由于大量天然的 HIV 抗体强阳性、中等阳性和弱阳性血清很难得到，我们采用 HIV 抗体阴性血清稀释阳性对照的方法，经过国产试剂检测，制备出弱阳性标本的质控参考品，可用于艾滋病初筛实验室的质量控制和质量评价。 【参考文献】 1 田润华,徐文华,李馨,等. 医学检验本科生实习期实践全面质量控制过程的意义J. 青岛大学医学院学报, 2007,43(3):275-276. 62 李金明. 临床分子诊断质量保证的重要性J. 检验医学杂志, 2003,26:652-653.
