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1、1肝细胞癌并门静脉癌栓组织 PDGFR 的表达及意义【摘要】 目的 探讨肝细胞肝癌(HCC)并门静脉癌栓（PVTT）组织中血小板衍生生长因子受体（PDGFR）的表达与微血管密度 (MVD)的相关性及其临床意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 36 例HCC 并 PVTT 组织、12 例正常肝脏标本中 PDGFR 的表达与 MVD计数。结果 HCC 并 PVTT 组织中 PDGFR 的表达阳性率及 MVD计数明显高于癌旁组织及正常肝组织(2=4.732、6.321， t=5.432、6.852 ，P0.05)。PDGFR 在TNM A 期肿瘤组织中的阳性率明显高于 TNM 期(P=0.008)。
2、分化差、肿瘤直径5 cm 和 TNM A 期肿瘤组织 MVD 计数明显高于分化好、肿瘤直径 5 cm 和 TNM 期者 (t=5.8426.764 ，P0.01)。PDGFR 表达阳性肿瘤组织的MVD 明显高于 PDGFR 表达阴性组织(t=7.236，P0.01) 。结论 HCC 并 PVTT 中 PDGFR 表达上调，可能通过促进肿瘤血管形成而参与 HCC 并发 PVTT 的发生和发展。 【关键词】 肝肿瘤 受体 血小板源生长因子 门静脉癌栓 微血管密度 ABSTRACT Objective To study the expressions of plateletderived growt
3、h factor receptor (PDGFR) in hepatocellular carcinoma (HCC) and portal vein tumor thrombus (PVTT) and their relationship with the microvessel 2density (MVD). MethodsExpressions of PDGFR were investigated via immunohistochemical technique in 36 cases of HCC and PVTT and 10 of normal controls. The MVD
4、 was measured. Results The PDGFR positive staining rate and MVD in HCC and PVTT tissues were significantly higher than those in the adjacent liver tissue and normal tissues (2=4.732,6.321;t=5.432,6.852;P0.05). The expression rate of PDGFR was significantly higher in TNM -A stage than in TNM (P=0.008
5、). MVD was significantly higher in poorly differentiated,larger tumor (5 cm) and TNM -A stage than in well differentiated,smaller tumor (5 cm) and TNM stage (t=5.842-6.764,P0.01). MVD in the PDGFR positive tissue was also significantly higher than that in the PDGFR negative ones (t=7.236,P0.01). Con
6、clusion Overexpression of PDGFR in HCC and PVTT tissue may be associated with the pathogenesis of HCC and PVTT through increasing neovascularization. KEY WORDS Tumour of liver; Receptor, plateletderived growth factor alpha; Portal vein tumor thrombus; Microvessel density 血小板衍生生长因子(PDGF)是细胞生存微环境中的重要一
7、员1，有研究表明，血小板衍生生长因子受体(PDGFR)表达失调可导致细3胞增殖及恶变2；PDGFR 表达可维持组织血管的结构及功能，而过度表达则可加速肿瘤组织血管的形成及管径变化，以适应癌变组织细胞快速生长需要3。己知肝癌（HCC）并门静脉癌栓(PVTT)组织中存在新生肿瘤血管的形成4，本文对 PDGFR 在多血管性肿瘤HCC 并 PVTT 组织中的表达及其与 MVD 的关系进行了探讨。现将结果报告如下。 1 材料和方法 1.1 标本及其来源 选取 20002006 年青岛市市立医院及华中科技大学附属同济医院手术切取的、临床病理资料完整的 HCC 并 PVTT 病人石蜡标本 36 例，均经病理
8、检查证实为肝细胞癌。其中男 26 例，女 10 例；年龄 3869 岁，平均 54.9 岁。 按 UICC(1997)分期标准：期15 例，期 19 例，A 期 2 例。病人肝功能按 Child 分级：A 级20 例，B 级 16 例。以 12 例因肝外伤切除的正常肝脏标本作为对照组。标本常规切片，厚度 4 m。 1.2 方法 1.2.1 PDGFR 表达的检测 采用免疫组织化学染色方法。兔抗人 PDGFR 多克隆抗体( 一抗)由 Santa Cruz 公司提供，工作浓度 1100。鼠抗人 vWF mAb(一抗)由 Dako 公司提供，工作浓度 1200。抗兔、鼠二抗(Dako Envisio
9、nTM+system，HRPR)由 Dako 公司提供。用免疫4组织化学两步法分别做 PDGFR、vWF 免疫组化、空白对照和苏木精 伊红染色。切片常规脱蜡至水，以 30 mL/L H2O2 封闭 30 min，1 g/L 胰蛋白酶消化 30 min，滴加一抗(兔抗人 PDGFR 多克隆抗体和鼠抗人 vWF mAb)，4 过夜，37 孵育 1 h，PBS 液震洗后，滴加抗兔、鼠二抗(Dako EnvisionTM+system，HRPR)，37 孵育 30 min，DAB 显色，苏木精复染，脱水、二甲苯透明，封固阅片。用已知阳性的肝细胞癌切片作阳性对照，用 PBS 液代替一抗做空白对照。 PD
10、GFR 阳性表达结果的判断：细胞呈黄色或棕黄色颗粒或线网状染色为阳性细胞。根据切片中阳性细胞比例及染色强度判断表达的强弱。切片中无阳性细胞为 0 分，阳性细胞占总细胞数 50%计 3 分；染色强度以切片中占多数细胞为准，无着色细胞计 0 分,黄色计 1 分，棕黄色计 2 分，棕褐色计 3 分；再计算两项指标的总分， 0 分计为（- ） ，1 2 分计为（+） ，34 分计为（ ） ，56 分计为（ ） ，其中（ ）和（ ）为强阳性表达。 1.2.2 微血管密度（MVD）检测 采用免疫组织化学染色方法。参照 WEIDNER5的标准，先在低倍镜下找到肿瘤组织的微血管区，即染色呈棕黄色的单个内皮细胞
11、或内皮细胞簇均作为一个血管计数, 每张切片观察 3 个血管密集区, 再于 200 倍的高倍镜下随机计数 5 个视野的微血管数 ,取其平均值作为该例组织的 MVD 值。 51.3 统计学处理 组间比较用 2 检验、精确检验法及 t 检验。 2 结 果 2.1 HCC 并 PVTT 组织中 PDGFR 表达和 MVD 计数 HCC 并 PVTT 组织中 PDGFR 的表达阳性率及 MVD 计数明显高于癌旁组织及正常肝组织，差异有显著性(2=4.732、6.321， t=5.432、6.852 ，P0.05) 。见表 1。表 1 HCC 并 PVTT组织中 PDGFR 的表达及 MVD 计数（略）
12、2.2 PDGFR 阳性表达和 MVD 计数与临床病理特征之间的关系 PDGFR 阳性率与原发性肝癌的分化程度、肿瘤最大径、有无包膜、肝硬化程度及肝功能分级之间无明显关系(P0.05)；但TNM A 期肝癌组织的 PDGFR 阳性率明显高于 TNM 期, 两者比较差异均有显著性(P=0.008)。分化差、肿瘤直径 5 cm 和 TNM A 期肝癌组织 MVD 明显高于分化好、肿瘤直径 5 cm 和 TNM 期者(t=5.8426.764，P0.01)。见表 2。表 2 PDGFR 阳性表达和 MVD 计数与临床病理特征的关系临床病理特征（略） 2.3 PDGFR 阳性表达与 MVD 计数之间的
13、关系 HCC 并 PVTT 组织中 PDGFR 阳性表达者的 MVD 为672.613.6，阴性表达者为 59.615.2,二者比较差异有显著性（t=7.236,P0.01)。 3 讨 论 恶性肿瘤的增殖与转移依赖于肿瘤血管的生成，新生血管形成是癌细胞生长和转移所必需的，新生血管的形成取决于肿瘤和（或）浸润细胞产生的血管生成因子的作用，肝细胞癌是典型的多血管性肿瘤6，主要通过门静脉播散，即使是小肝癌也可能发生门静脉癌栓，伴有门静脉癌栓的肝细胞癌预后差。 目前已证实有几种血管生长因子参与了微血管的形成，其中包括血管内皮生长因子、血小板源性内皮细胞生长因子、上皮生长因子、转移生长因子 和 碱性或酸
14、性成纤维细胞生长因子、血管生成因子等7。肝癌外周血血小板源性内皮细胞生长因子升高，肝癌组织中 VEGF mRNA 表达较非癌组织增高8。有研究结果表明，HCC并 PVTT 者的 PDGF mRNA 表达显著高于无门静脉癌栓者，提示PDGF 在肝细胞癌肿瘤血管生成侵袭和转移以及门静脉癌栓形成中起重要作用4。PDGF 是重要的促血管生成因子，能通过与其特异PDFGR 结合促进血管内皮细胞增殖分化9 。肿瘤细胞还可自分泌PDGF，通过与靶细胞膜上 PDGFR 结合促进肿瘤血管生成。本文研究结果表明，HCC 并 PVTT 组织中 PDGFR 表达阳性率明显高于癌旁组织及正常肝组织，TNM A 期组织明
15、显高于 TNM 期。提示 PDGFR 与肝癌细胞侵袭、转移、门静脉癌栓形成以及 TNM分期有关。 7近年来研究结果显示，恶性肿瘤组织中 MVD 计数高者极易发生转移或复发，预后较差10。本文研究结果也表明，HCC 并 PVTT组织中 MVD 计数明显高于癌旁组织及正常肝组织；分化差、肿瘤直径5 cm 和 TNM A 期者 MVD 计数明显高于分化好、肿瘤直径5 cm 和 TNM 期者。表明 MVD 较高的病例具有较强的浸润与转移能力，与门静脉癌栓形成和 TNM 分期有关。 本文结果还显示，HCC 并 PVTT 组织 PDGFR 阳性表达者 MVD明显高于阴性表达者，这进一步表明了 PDGFR 在 HCC 并 PVTT 组织中有促进血管生成的作用，其过度表达与 MVD 有关；PDGFR 促进肝癌细胞侵袭、转移和门静脉癌栓形成，在晚期 HCC 并 PVTT 组织中，其作用尤为明显。 【参考文献】 1HELDIN C H, WESTERMARK B. Mechanism of action and in vivo role of plateletderived growth factorJ. Physiol Rev, 1999,79(4):12831316. 2TSATSANIS C,
