《胶原酶组织金属蛋白酶抑制剂-1免疫活性及其在慢性阻塞性肺疾病肺结构改变中的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胶原酶组织金属蛋白酶抑制剂-1免疫活性及其在慢性阻塞性肺疾病肺结构改变中的作用（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 论 著 胶 原 酶!组 织 金 属 蛋 白 酶 抑 制 剂#免 疫活 性 及 其 在 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病肺 结 构 改 变 中 的 作 用陈 涛 吴 亚 梅重 庆 医 科 大 学 附 属 第 一 医 院 肺 科 （ 重 庆 $%#&）【 摘 要 】 目 的 观 察 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病 （ ()*） 大 鼠 模 型 支 气 管 肺 组 织 中 胶 原 酶 间 质 胶 原 酶（ +)#） 、 多 形 核 细 胞 胶 原 酶 （ +),） 及 其 天 然 抑 制 因 子 组 织 金 属 蛋 白 酶 抑 制 剂 #（ -.+)#） 的 表 达情 况 ， 探 讨 胶 原 酶 在
2、 ()* 发 病 中 的 作 用 。 方 法 选 用 #% 周 龄 /01234 大 鼠 随 机 分 为 对 照 组 及 模 型组 ， 通 过 气 道 内 注 入 脂 多 糖 （ 5)6） 结 合 烟 熏 法 建 立 ()* 大 鼠 模 型 。 测 定 肺 功 能 后 ， 取 肺 组 织 石 蜡切 片 78 染 色 ， 观 察 肺 组 织 病 理 改 变 ， 免 疫 组 织 化 学 法 检 测 +)#、 +), 和 -.+)# 在 肺 泡 和 支 气管 的 表 达 。 结 果 模 型 组 大 鼠 肺 组 织 类 似 于 人 的 ()* 病 理 学 改 变 ； 光 镜 下 表 现 为 小 叶 中
3、 央 型 肺气 肿 ， 单 位 面 积 肺 泡 数 减 少 ， 肺 泡 面 积 增 大 。 肺 功 能 98:%;0） 、 呼 气相 气 道 阻 力 （ ?） 增 加 。 （ ） +)#、 +), 和 -.+)# 在 两 组 支 气 管 和 肺 组 织 均 有 表 达 ， 表 达 细 胞 为上 皮 细 胞 、 巨 噬 细 胞 、 中 性 粒 细 胞 及 肺 实 质 细 胞 ； 与 对 照 组 比 较 ， 模 型 组 支 气 管 中 +)#、 +), 和-.+)# 表 达 增 强 ， 在 肺 组 织 中 三 种 酶 蛋 白 的 表 达 亦 增 强 （ ! A %;%B） 。 肺 泡 面 积 和
4、肺 组 织 +)#、+), 免 疫 活 性 强 度 呈 正 相 关 ， 与 -.+)# 则 无 显 著 相 关 。 +)# 和 -.+)# 的 表 达 活 性 强 度 与 支 气管 平 滑 肌 层 面 积 呈 正 相 关 ， +), 无 显 著 相 关 性 。 结 论 ()* 大 鼠 支 气 管 和 肺 组 织 表 达 +)#、+), 和 -.+)# 增 多 ， 二 者 间 表 达 可 能 不 平 衡 ， 参 与 了 ()* 肺 结 构 重 塑 的 过 程 。【 关 键 词 】 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病 ； 胶 原 酶 ； 组 织 金 属 蛋 白 酶 抑 制 剂 #； 重 塑通 讯 作
5、者 陈 涛 8C30D： EFFE2G10H3IEJCIEH!#$% & () *&+), &- .)*,./+ 0&+/1)/,) /$ .,#)2.(.3.&*, 4)/+&5*&)./,)26 . () */ 4&$)+ &-0(*&.0 &3,*#0.7) 5#+4&/*% $.,)/,) #$% &(， )* +,-./ 0-123,-43 (5 6-71.23(28 9-:.;.4-， &55.?.3-: #(71.3?， ?1S04 402 34? +?N， JP?CT?4 %$， :JD;3?6【 )*+ ,-.】 =-*%&$, %.#*0,#$( 3?） 是 成 人 尤 其
6、 是 老 年人 常 见 的 呼 吸 系 统 慢 性 疾 病 ， 近 年 来 呈 逐 年 上 升 趋势 ， 严 重 威 胁 人 们 的 健 康 和 生 活 7， B。 目 前 认 为=3?是 以 气 流 阻 塞 为 特 征 的 慢 性 支 气 管 炎 和 C或肺 气 肿 。 关 于 其 发 病 机 制 学 说 众 多 ， 现 普 遍 认 为 在=3? 慢 性 炎 症 引 起 小 气 道 和 肺 泡 组 织 结 构 的 重 构中 ， 蛋 白 酶 4抗 蛋 白 酶 系 统 失 衡 起 重 要 作 用 D。 细 胞外 基 质 （ E=2） 是 存 在 于 细 胞 间 的 动 态 网 状 结 构 ， 是
7、维 持 组 织 和 器 官 正 常 结 构 的 基 础 。 E=2 的 降 解 和沉 积 失 衡 是 导 致 气 道 壁 结 构 异 常 构 建 、 肺 实 质 破 坏 、基 底 膜 增 厚 及 间 质 增 生 的 重 要 原 因 ， 以 胶 原 为 主 的E=2 在 气 道 壁 的 过 度 沉 积 是 =3? 气 道 重 塑 的 重 要病 理 改 变 ， 是 引 起 气 道 壁 纤 维 化 及 气 流 阻 塞 的 主 要原 因 之 一 。 而 肺 组 织 E=2 降 解 过 度 则 致 肺 泡 结 构破 坏 ， 肺 气 肿 形 成 F。!、型 胶 原 构 成 GHI的 肺实 质 胶 原 网
8、络 成 份 。 研 究 发 现 ， =3? 患 者 肺 间 质中!、型 胶 原 增 多 ， 以!型 胶 原 增 加 为 主 。 胶 原 酶 间 质 胶 原 酶 （ 22347） 、 多 形 核 细 胞 胶 原 酶（ 22345） 、 胶 原 酶 47D（ 22347D） 是 降 解!、型 胶 原的 主 要 水 解 酶 ， 而 体 内 对 胶 原 酶 活 性 起 主 要 抑 制 作用 的 是 组 织 金 属 蛋 白 酶 抑 制 剂 47（ 892347） J， 在 肺气 道 重 塑 过 程 中 892347 通 过 对 223. 活 性 的 抑 制 ，可 能 抑 制!、型 胶 原 等 E=2 的
9、 降 解 ， 导 致 E=2 的降 解 和 沉 积 失 衡 ， 促 进 =3? 的 形 成 和 发 展 。 本 实验 通 过 检 测 223. 和 8923. 的 蛋 白 定 位 及 表 达 ， 探讨 胶 原 酶 22347、 22345 和 892347 在 =3? 气 道 及肺 组 织 结 构 重 塑 中 的 作 用 。材 料 与 方 法一 、 材 料7H 周 龄 二 级 雄 性 K$.#* 大 鼠 ， 体 重 （ 7LH M BH） :，由 重 庆 医 科 大 学 动 物 中 心 提 供 。 脂 多 糖 （ N3O， H7774PF， O$:/ 公 司 ） ； 山 城 牌 过 滤 嘴 香
10、 烟 ： 每 支 含 焦 油7J /:， 烟 气 烟 碱 7QF /:（ 重 庆 卷 烟 厂 ） ； 22347、892347 及 22345 兔 多 克 隆 抗 体 （ 博 士 德 公 司 ） 。二 、 方 法7Q 建 立 =3? 大 鼠 模 型 ： 实 验 动 物 随 机 分 为 对照 组 和 模 型 组 ， 每 组 7F 只 。 参 照 文 献 L 的 方 法 ， 取模 型 组 大 鼠 ， 分 别 于 第 7 和 7J 1 给 予 7HI乌 拉 坦（ 7H /NCR:） 腹 腔 内 注 入 麻 醉 后 ， 暴 露 喉 头 ， 以 静 脉 穿刺 套 管 针 替 代 气 管 导 管 行 气
11、管 插 管 ， 向 气 道 内 注 入N3O（ BHH#:C只 ） ， 其 余 时 间 每 天 B 次 ， 间 隔 L -将 大 鼠置 于 密 闭 玻 璃 染 毒 箱 中 注 入 JI左 右 浓 度 烟 雾 ， 使大 鼠 被 动 吸 烟 ， 持 续 DH /$& 后 将 大 鼠 移 出 ， 共 DB 1，因 麻 醉 意 外 和 感 染 各 死 亡 F 只 。BQ 肺 功 能 测 定 ： 7HI 乌 拉 坦 腹 腔 内 注 射 麻 醉后 ， 行 气 管 切 开 、 插 入 导 管 ， 应 用 小 动 物 肺 功 能 检 测分 析 系 统 （ 北 京 航 天 新 概 念 软 件 有 限 公 司 ）
12、 ， 记 录 大鼠 5 个 呼 吸 周 期 ， 获 得 气 道 压 力 （ 3） ， 容 积 变 化 （ S） ，相 应 得 到 呼 气 相 气 道 阻 力 （ A(） 、 吸 气 相 气 道 阻 力（ A$） 。 快 速 向 气 道 内 注 入 L /N 空 气 造 成 大 鼠 被 动深 呼 吸 ， 即 刻 测 定 TS=， TESHQD（ 相 当 于 人 的 TES7） 。腹 腔 静 脉 放 血 处 死 动 物 ， 右 下 肺 横 贯 取 材 放 入 7HI甲 醛 溶 液 中 固 定 ， 脱 水 ， 二 甲 苯 透 明 ， 石 蜡 包 埋 J#/切 片 。DQ 病 理 学 检 查 ： 石
13、蜡 包 埋 切 片 UE 染 色 后 ， 置 于图 像 分 析 仪 下 进 行 分 析 。$支 气 管 上 皮 层 面 积 及 管壁 平 滑 肌 层 面 积 测 量 ： 测 量 标 本 中 所 有 的 支 气 管 ， 为排 除 斜 切 的 支 气 管 ， 凡 长 径 与 短 径 比 大 于 B 者 舍 去不 测 ；%肺 泡 测 量 ： 每 张 切 片 分 别 随 机 选 取 无 折 叠 的区 域 ， 7HH 倍 光 镜 下 取 D 个 视 野 ， 测 定 肺 泡 面 积 ， 计数 每 视 野 下 肺 泡 个 数 。FQ 免 疫 组 化 检 测 支 气 管 肺 组 织 22347、 22345及
14、 892347 的 蛋 白 表 达 ： 右 下 肺 石 蜡 切 片 常 规 脱 蜡 至水 ， DI过 氧 化 氢 DV W孵 育 7H /$&， HQH7 /%!CN 3PO 冲洗 J /$&XD 次 ， HQH7 /%!CN 枸 橼 酸 钠 缓 冲 液 中 微 波 修复 7H /$&， 室 温 下 冷 却 ， 山 羊 血 清 封 闭 ， DV W孵 育DH /$&， 倾 去 血 清 ， 加 入 7Y7HH 稀 释 的 22347、 22345和 892347 兔 多 克 隆 一 抗 ， 3PO 代 替 一 抗 做 阴 性 对 照 ，F W过 夜 ， 3PO 冲 洗 J /$& X D 次 ，
15、 滴 加 生 物 素 标 记 的第 二 抗 体 ， DV W孵 育 BH /$&， 3PO 冲 洗 J /$& X D 次 ，滴 加 过 氧 化 氢 酶 标 记 的 链 霉 卵 白 素 工 作 液 ， DV W孵育 DH /$&， 3PO 冲 洗 J /$& X D 次 ， ?ZP 镜 下 显 色 ， 自来 水 冲 洗 ， 7I盐 酸 4乙 醇 分 色 ， 流 水 冲 洗 ， 苏 木 素 轻度 复 染 ， 梯 度 乙 醇 脱 水 、 二 甲 苯 透 明 、 中 性 树 胶 封 片 。每 张 切 片 随 机 选 取 小 支 气 管 B 根 ， 于 BHH 倍 光 镜 下55D 中 国 呼 吸 与
16、 危 重 监 护 杂 志 BHHF 年 77 月 第 D 卷 第 L 期 =-$& A(.对 照 组 )?/- A/1( B/.- (/9B 9./9.- ?/A9B模 型 组 B./C)- ?/C? 9C/9A(- C/B? 9C/)9- 1/).?$ 值 0 ./.( 0 ./.( ./.(A9二 、 病 理 学 检 查(/ 光 镜 观 察 ： D7 切 片 发 现 正 常 对 照 组 大 鼠 肺细 支 气 管 及 肺 泡 结 构 正 常 。 模 型 组 大 鼠 支 气 管 黏 膜增 厚 、 脱 落 ， 基 底 细 胞 排 列 紊 乱 ， 上 皮 层 及 平 滑 肌 层增 厚 ， 肺 泡 结 构 紊 乱 ， 肺 泡 管 、 肺 泡 囊 及 肺 泡 扩 大 ， 肺泡 壁 断 裂 ， 见 部 分 肺 泡 融 合
