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1、杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:/AidQuick PCR Purification KitPCR 产物纯化回收试剂盒目录号：DR02 适用范围：适用于PCR反应产物、酶切产物DNA 片段、探针标记纯化回收，DNA样品浓缩等。 试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成 保存 50 次（DR0101） 100 次（DR0202） 200 次（DR0203）平衡液 室温 5 ml 10 ml 20 ml结合液 BB 室温 30 ml 60 ml 100ml漂洗液 WB 室温 15 ml 25 ml 50 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液 EB 室温 10 ml 15 ml 20 m
2、l吸附柱 EC 室温 50 个 100 个 200 个收集管（2ml） 室温 50 个 100 个 200 个本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。储存事项: 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在 37水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温 储存于低温（4或者20）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15-25）进行。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍：在高离序盐存在的情况下，DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗离
3、心的步骤，去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、 TRIpure Reagent 抽提指南 目录号 RP02 使用手册 实验室使用，仅用于体外 TRIpure Reagent 抽提指南 目录号 RP02 使用手册 实验室使用，仅用于体外 TRIpure Reagent 抽提指南 目录号 RP02 使用手册 实验室使用，仅用于体外杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:/酶等杂质去除，最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。 产品特点：1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端
4、。2. 使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。3. 结合液加酚红调制成为了黄颜色，便于监测 pH 值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。4. 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。 注意事项1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。2. 结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间
5、，过长、过短片段的回收效率迅速降低。4. 回收DNA的量和起始DNA的量，洗脱体积，DNA 片断大小有关。一般1-15g， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达95。5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH 大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在20。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0） ，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 关于平衡液的使用1. 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘
6、埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:/憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至 37使沉淀完全消失。2. 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取 100l 的平衡液至柱子中。13000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。 操作步骤提示：第一次使用前请先在漂洗液 WB
7、中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!1. 每 100l PCR 扩增后体系或者酶切后体系加入 500l 结合液 BB，充分混匀。 （如果初始体系小于 100l，请事先用双蒸水调整至 100l） 。平衡液预处理吸附柱：使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”2. 将上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中（吸附柱放入收集管中） ，室温放置 1 分钟，12,000rpm 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液。过滤下的结合液和收集管内残存的强碱性平衡液结合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色，此为酚红 PH 指示剂碱性条件下的正常颜
8、色变化。3. 加入 600l 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!） ，12,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。4. 加入 600l 漂洗液 WB，12,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。 5. 将吸附柱 EC 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。6. 取出吸附柱 EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50l 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65-70水浴中加热效果更好） ，室温放置 2 分钟，12,000rpm 离心 1 分钟。如果需要较多量 DNA，可将得到的溶液重新加入吸附杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:/柱中，离心 1 分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于 25l，体积过小降 DNA 洗脱效率，减少产量。
