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1、新生儿溶血病 HDN 免疫 血液学试验标准检测流程 新疆医科大学第一附属医院输血科 宋 小 川 2011年10月在北京由中国医师协会 输血科医师分会举办了全国首届输 血系统新生儿溶血病标准化操作研 讨会 我国开展HDN研究30年以来 临床已召开过数次HDN专题研讨 会 而输血科实验室工作30年来却 从来没有召开过研讨会 全国首届HDN实验室工作者研讨会内 容 v 大会交流 v专家讲座 HDN临床和实验室研究的 国内外进展 v 研讨 1 研讨内容 样本采集 实验项目及操作 结果判定或解释 2 研讨要达到目的 三化 v 实验方法的规范化 v 临床导向科学化 v 不同实验室的结果互相可比化 我国HD
2、N实验室检查存在的 问题 一 产前检查 试剂 实验方法不统一 不同实验 室 测定IgGABO抗体效价差别大 IgGABO抗体效价与产后发病预测价 值 太低 Rh抗体效价与产后发病概率资料不 全 二 产后检查 v 新生儿血型鉴定困难 v 三项试验 分析判断 与临床不 吻合 v 三项试验试剂 方法不统一 不 同实验室结果不一致 v 不同实验室对产后HDN三项试验的 分析标准不统一 三 医疗纠纷的潜在隐患 全国已有许多案例 为产前免疫性抗体效价高者开药 如 果分娩后 新生儿为O型 或Rh阴性 怎 么办 新生儿生理性黄疸与HDN不易区别时 如果两个实验室三项试验结果不一致 怎么办 各实验室HDN结果无
3、可比性 存在潜在 的医疗纠纷隐患 新生儿溶血病 HDN 免疫 血液学试验检测标准 一 HDN产前免疫血液学试验检测标准 二 HDN产后免疫血液学试验检测标准 三 HDN换血治疗中血液及血型选择标准 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v一 检查对象 v 有不良妊娠史 输血史及HDN史的 孕前妇女 v Rh阴性孕前妇女 v 孕妇血型为0型 配偶血型为非O 型者 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v二 标本采集时间 v 有不良妊娠史 输血史及HDN史的 孕前妇女和Rh阴性孕前妇女的标本采 集时间为怀孕前 v 孕妇血型为0型 配偶血型为非O型 者 标本采集时间为怀孕后 HDN产前免疫血液学试验检测
4、 标准 v 1 第一次检测 一般可在妊娠第12 16周进行 以此作为抗体基础水平 如果检测到ABO以外抗体 或高效价的 IgG抗A B 抗体 建议每月复查一次 v 2 第二次检测在妊娠28 30周做 以后每隔2 4周重复测定一次 了解抗 体增加速度 抗体效价上升快 提示 HDN的可能性大 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 第二次检测时可以使用第一次的 冻存标本做平行对照 有助于排除 实验技术和试剂红细胞的干扰 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v三 标本要求 v 第一次检查 采集夫妇双方EDTA抗 凝血各3 5毫升 v 复查检查 采集夫妇双方EDTA抗凝 血3 5毫升 v 如果无配偶的血液
5、标本 则无法检 测孕妇是否有针对其配偶特有的 低 频率抗原所产生的免疫性抗体 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v四 检查项目 v 夫妇ABO Rh D 血型鉴定 v 孕妇 孕前妇女血液中IgG抗A B 抗体效价检测 v孕妇 孕前妇女是O型 若配偶是A型或 B型 检测孕妇 孕前妇女相应的IgG抗A B 抗体效价 若配偶是AB型 分别 检测孕妇 孕前妇女IgG抗A B 抗体效 价 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v 孕妇 孕前妇女血液中ABO以外抗 体检测 v需要使用抗体筛选细胞和其配偶红 细胞进行ABO以外抗体和针对其配偶 特有的 低频率抗原所产生的免疫 性抗体的筛选 如有抗体要进行抗
6、体特异性鉴定和效价测定 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v五 检测方法 查看Word文件 v六 试验报告 v 试验报告至少包括以下内容 v 1 实验室名称和联系方式 v 2 被检者姓名和唯一性编号 v 3 送检医院 v 4 样本接受 采集日期和报告日期 HDN产前免疫血液学试验检测 标准 v 5 试验方法 v 6 试验结果 v 7 实验者 复核者签名 v 8 如需复查 复查时间需注明 v 9 参考值范围 v 七 试验报告参考格式 查看Word 文件 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 新生儿溶血病产后血清学检测的目的 v一 确定新生儿血型是否与母亲不 合 v二 证实患儿血清中是否有来自于
7、母亲的抗体 v三 患儿红细胞是否被来自母亲的 免疫性抗体所致敏 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v一 标本要求 v 采样时间建议 v 1 可疑ABO不合HDN患儿血清学 检查最好在出生后1 7天之内 v 2 可疑Rh等其他血型系统血型 不合应在出生后尽早为好 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v 采样部位 静脉血 脐血标本均 可 v注 因为母婴ABO血型不合的新生儿 脐带血大约有20 血清学常规三项试 验为阳性 但临床上并无新生儿溶血 症状 血清胆红素也未见升高 摘自 王羽主编 全国临床检验操作规程 第3版 268页 若条件允许 产后 血液学试验推荐使用静脉血 HDN产后免疫血液学试验检
8、测 标准 v 采样量 v 1 父亲抗凝血2ml v 2 母亲不抗凝血4ml分离血清 抗 凝血2ml v 3 患儿抗凝血3ml以上 不抗凝血 1ml 新生儿如果采样困难 应尽量 保证抗凝血样本 v 抗凝剂选择 EDTA抗凝 枸橼酸钠 抗凝 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v二 试剂与设备 查看Word文件 v三 检测方法 v 产妇血样检测 v同 HDN产前免疫血液学试验 孕妇血 样检测条目 v 患儿血样检测 v 1 红细胞 ABO正定型 RhD血型 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v说明 新生儿ABO定型 多数专家 认为反定型没有意义 v 2 红细胞直接抗人球蛋白试验 DAT v检测患儿
9、红细胞上有无致敏的免疫 性抗体 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v 3 患儿红细胞放散试验 v 进一步验证患儿红细胞上是否存 在致敏的免疫性抗体 v 4 患儿血清游离抗体检测 v检测新生儿血清中有无来自于母亲 的免疫性抗体 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v 5 结果分析 v 阴性对照应无凝集 阳性对照应 有3 4 的凝集 v 仅与患儿同型的A或B型红细胞出 现凝集 为免疫性抗A 抗B抗体 v 酶处理红细胞或加入增强剂的阴 性对照管应无凝集 否则视为处理过度 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v 与抗筛细胞或同型细胞出现阳 性结果 可能存在不规则抗体 推 荐使用谱细胞 选择同样试验条
10、件 鉴定其特异性 v 根据增加的患儿相应抗原检测 确定免疫性抗体的特异性 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v 患儿体内检测到的抗体特异性 应与母亲一致 且患儿红细胞相应 抗原为阳性 若母亲体内检测到的 免疫性抗体是患儿所没有的 且患 儿抗原阴性 应该考虑它来自于以 往的妊娠或输血 可以肯定该抗体 不是引起本例HDN的原因 新生儿溶血三项试验结果分析及提示临 床意义 DAT 游离试验试验放散试验试验 结结果分析 提示临临床意义义 有游离抗体 红细红细 胞致敏 具备发备发 生ABO系统统HDN的条 件 红细红细 胞致敏 具备发备发 生ABO系统统HDN的条 件 有游离抗体 红细红细 胞致敏 直
11、 抗假阴 具备发备发 生ABO系统统HDN的条 件 有游离抗体 红细红细 胞致敏 放 散假阴 具备发备发 生ABO系统统HDN的条 件 只有游离抗体 红细红细 胞未致敏 不完全具备发备发 生ABO系统统 HDN的条件 红细红细 胞致敏 直抗假阴 有可能具备发备发 生ABO系统统 HDN的条件 可疑 直抗假阳 不完全具备发备发 生ABO系统统 HDN的条件 无抗体 不具备发备发 生ABO系统统HDN的 条件 HDN产后免疫血液学试验检测 标准 v 五 实验报告内容及格式 v 新生儿溶血病检查报告单 v 查看Word文件 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v一 标本要求 v EDTA抗凝的母亲
12、静脉血液标本和 患儿静脉血液标本 标本是清晰的 惟一的患者身份确认标识 v 母亲血样4ml 患儿血样2 4ml v 不建议使用脐带血 中性分离胶 试管及其它不抗凝血液标本 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v二 ABO Rh D 血型鉴定 v 选用经国家批准且批批检测合格的 单克隆抗 A 抗 B 抗 D IgM 和A B 型标准试剂红细胞 v ABO血型鉴定 母亲血样做正反定 型 患儿血样只做正定型 推荐使用 试管法和微柱凝胶血型卡 不推荐使 用纸片或玻片法 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v RhD血型鉴定 用IgM抗 D做RhD 血型 推荐使用试管法和微柱凝胶 血型卡 不推荐使用
13、纸片或玻片法 v DAT强阳性的患儿红细胞可能会 干扰RhD血型定型 建议将红细胞做 放散试验后再做RhD血型鉴定 放散 试验方法推荐使用二磷酸氯喹放散 法 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v 有宫内输血史的患儿应慎重定血 型 注意定型时的混合外观现象 一 般宫内输血选择的是O型RhD阴性血 因此新生儿ABO和RhD定型时可能出现 混合外观现象 对ABO血型无法确定 的患儿输血应选择O型洗涤红细胞 AB型血浆 对RhD血型无法确定的患 儿输血时应选择RhD阴性血 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v 患儿首次换血属于大量输血 再次 换血做血型时会出现混合外观现象 应 参考首次血型结果
14、和换入血液的血型 患儿再次换血时 需做交叉配血 v三 抗体筛选及鉴定 v 选用国家批准的抗体筛选细胞 抗 人球蛋白试剂 抗 IgG C3d或抗 IgG均 可 抗人球蛋白微柱凝胶卡 LISS Coombs卡 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v 选用抗人球蛋白法 试管法 微 柱凝胶卡 对母 子 血样做抗体筛 选试验 v 母 子 血液标本抗体筛选阳性 者 建议用谱细胞做抗体鉴定 鉴定 抗体的特异性及抗体类别 IgM IgG 有助于换血时的血液选择 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v 建议将无法鉴定出抗体特异性的血 液标本送各地血液中心血型参比实验 室做确认 v 对无法鉴定出抗体特异性的患
15、儿 但其病情急需换血可直接交叉配血 选择配血相合的血液输用 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v 患儿母亲如果是稀有血型产生了抗 高频抗原抗体 建议在患儿母亲家族中 寻找相合血液或求助于中国稀有血型库 如果找不到相合血液 应启动输血科 紧急输血程序 由临床医生判断延迟输 血的风险 经医院临床输血管理委员会 同意 患儿家属签署输血知情同意书后 选用交叉配血 最小不相合 血液输 注 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v四 交叉配血 v 推荐使用抗人球蛋白法做交叉配 血 试管法和微柱凝胶法均可 v 按新生儿溶血病换血治疗血液的 选择原则 选择适合的血液成分 v 母子ABO血型相同或选用O型洗
16、涤 红细胞时 用母亲血浆做主侧交叉配 血 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v 只有患儿血样或选择ABO血型同患 儿的红细胞时用患儿的血浆做主侧交 叉配血 v 不做次侧交叉配血 对AB型献血 者的血浆做抗体筛选代替次侧交叉配 血 v五 新生儿溶血病换血治疗血液的选 择原则 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v因为新生儿A B抗原比成年人弱且 做ABO血型时不做反定型 所以此时 定的新生儿ABO血型不完全可靠 建 议新生儿换血 输血 首选O型洗涤 红细胞 AB型血浆 v新生儿换血选择CPD抗凝采集后7天 内的新鲜红细胞悬液 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 v ABO血型系统HDN选用 vRhD血型同患儿的O型洗涤红细胞 抗体筛选阴性的AB型血浆 v Rh血型系统HDN选用 v 1 抗 D抗体 HDN换血治疗中血液及血型选择 标准 vO型RhD阴性洗涤红细胞 首选 ABO血型同患儿的RhD阴性洗涤或悬浮 红细胞 次选 抗体筛选阴性的AB 型血浆 如果没有RhD阴性血 而患 儿急需换血治疗 可以选择RhD阳性 血 启动输血科紧急输血程序 首 选 次选同前 HDN换血治疗中血液及
