《日本囊对虾黏着斑激酶和adp核糖基化因子的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《日本囊对虾黏着斑激酶和adp核糖基化因子的研究（106页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、厦门大学 硕士学位论文 日本囊对虾黏着斑激酶和ADP核糖基化因子的研究 姓名：张名昌 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：徐洵 20090601 覆瓣犬学颈圭学位论文攘要 摘要 本研究论文对日本囊对虾的黏着斑激酶( M i F A K ) 及小G 蛋白A D P 核糖基 纯因子( M j A r f 4 ) 进行了初步研究，同时建立一套有效的噬菌体展示库筛选方法 以寻找与它们相互作用的蛋白，为今后研究M j F A K 及小G 蛋白在W S S V 感染中 的信号转导机制奠定基础。 F A K 是一类菲受体酪氨酸激酶，在高等生物中已经被广泛报道参与细胞的 粘附、抗凋亡、a
2、 c t i n 重组以及肿瘤的发生。我们首次在甲壳纲动物中克隆到翩足。 序列分析发现M j F A K 中间含有保守的P T K 结构域和C 端的F A T 结构域。M j F A K 的T y r 3 9 9 ，T y r 5 7 9 被涯实发生磷酸化。另外，在W S S V 病毒感染日本囊对虾的 早期，其血细胞M j F A K 蛋白的表达水平上调，引起M j F A K ( p Y 3 9 9 ) 和 M j F A K ( p Y 5 7 9 ) 水平的上升。研究感染病毒的血细胞对F n ( F i b r o n e c t i n ) 的粘附情 况还发现，盘细胞对& 的糙附与M
3、j F A K 磷酸化水平褶关。因此，我们推断对 虾血细胞M j F A K 在病毒入侵及宿主防御中都扮演重要角色。 A r f s 属于R a s 家族的小G 蛋白，我们从日本囊对虾中克隆一个属于C l a s s I I 的A r f ( 命名隽M j A r f 4 ) 。研究发现，W S S V 感染7 2h 蜃，M j A r f 4 的表达水平 显著上升，提示M j A r f 4 与病毒感染有着密切联系。进一步研究发现在M j A r f 4 启 动予1 8b p 处含有个保守的C R E ( c A M Pr e s p o n s ee l e m e n t ) ，启动子活
4、性分析表 嚼该C 跹在转录调控中可能有抑制M j A r f 4 转录的作用。将M j A r f 4 转染入H i 醢 F i v e 昆虫细胞发现，M j A r f 4 可能定位在高尔基体中，活性突变分析表明M j A r f 4 的分布是G T P 依赖性的。体外病毒吞噬实验发现B F A 并不影响血细胞对病毒的 吞噬。这些结果表明M j A r r 4 在W S S V 感染后期发挥着重要作用。 关键谓：F A K ；觚W S S V 嚣秘太攀羲学整谂文 A b s t r a c t I no u rr e s e a r c 蛾w ea r ei n t e r e s t e
5、di nt h ec h a r a c t e r i z a t i o no fF A K ( f o c a la d h e s i o n k i n a s e ) a n dA r f ( A D Pr i b o s v l a f i o nf a c t o r ) ，a n dw e a l s oe s t a b l i s h e d8 t ne f f i c i e n tm e t h o d o fp h a g ed i s p l a ys c r e e n i n gt os e e kf o rt h e i rp o s s i b l eb
6、i n d i n gc a n d i d a t e s , w h i c hw i l l p a v et h ew a y t Os t u d yt h es i g n a l i n gm e c h n i s mo fM j F A Ka n di t sd o w n s t r e a ms m a l lG p r o t e i n si nt h eW S S V i n f e c t i o n F o c a la d h e s i o nk i n a s e K X 盏m e m b 髅o fn o n - r e c e p t o rt y r
7、o s i n e ”k i n a s e , i s e x t e n s i v e l ya d d r e s s e da sp i v o t a lr o l e si nc e l la d h e s i o n , a n t i m a p o p t o s i s , a c t i na s s e m b l y , t u m o rf o r m a t i o na n dp r o g r e s s i o n 。H e r eM j F A KW a Sc h a r a c t e r i z e d 憝t h ef i r s tF A K f
8、 a m i l yp r o t e i n w t y r o s i n e l ( i n a s ei nc r u s t a c e a n s S e q u e n c ea n a l y s i sd i s p l a y e dt h a t M j F A Ks h a r e ds t r o n gs i m i l a r i t yt oF A K 融越p r o t e i n - t y r o s i n e 聂n a s e , i n c l u d i n g c o n s e r v e dt y r o s i n ep h o s 曲o
9、r y l a t i o ns i t e s , P T Kd o m a ma n dF A Td o m a i n T y r 3 9 7a n d T y r 5 7 7w e r ef o u n dt ob ep h o s p h o r y l a t e di nv i v o M o r e o v e r , p M j F A Ki n c l u d i n g M j F A K ( p Y 5 9 7 ) a n dM j F A K ( p Y 5 7 7 ) i n c r e a s e da t t h e e a r l yi n f e c t i
10、 o ns t a g e , a c c o m p a n i e db ya ni n c r e a s eo fh e m o c y t ea d h e s i o na c t i v i t yo ff i b r o n e c t i n T h e s e r e s u l t ss u g g e s tt h a tp M j F A Km a yn o to n l yp r o m o t et h eW S S Vi n f e c t i o n , b u ta l s o p a r t i c i p a t ei nt h ed e f e n s
11、 em e c h a n i s mv i at h ee n h a n c e m e n to ft h ei m m u n e - c e l l a d h e s i o n u - f sb e l o n gt o 濂s m a UGp r o t e i nf a m i l y , H e r eam e m b e ro fC l a s sI IA r f sw a s c l o n e df r o m 酣。j a p o n i c u s ( d e s i g n a t e da sM j A r f 4 ) 。砖蠢啭w a si n i t i a l
12、 l yf o u n dt ob e u p r e g u l a t e ds i g n i f i c a n t l yp o s ti n f e c t i o n , w h i c h i n d i c a t e dt h a tM j A r f 4h a v ea c o n n e c t i o n 谳蠼W S S Vi n f e c t i o n 。T h ep r o m o t e ro fM ) & 4 r f 4w a sa n a l y z e da n da c o n s e r v e de l e m e n tC R EW a sf
13、o u n d18b pu p s t r e a mf r o mt r a n s c r i p t i o ns i t e 。P r o m o t e r a c t i v i t ya s s a ys h o w e dt h a t 怒m a yh a v ea l li n h i b i t e de f f e c to nM j A r f 4t r a n s c r i p t i o n 融黼g hF i v ec e l l s 。M j A r f 4W a sl o c a l i z e da tG o l g ia n ds u c hd i s t
14、 r i b u t i o nw a s 2 覆鼹夫擎矮士攀位论文 d e p e n d a n to nG T Pw i t hs i t em u t a t i o na n a l y s i s M o r e o v e r , B F Ah a v en oe f f e c to n h e m o c y t ep h a g o c y t o s i so fW S S V O v e r a l l ，t h e s ed a t ap r o v i d ee v i d e n c et h a ts h r i m p A r fm a yh a v ea n
15、i m p o r t a n tr o l ei nt h el a t ep h a s eo fW S S Vi n f e c t i o n K e y w o r d s ：F A K ；A f t ；W S S V 3 厦门大学学位论文原剖性声明 本太呈交熊学位论文是奉天在导辉指导蠢独立竞威酶研究袋 果。本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果，均 在文中数适当方式鳞确标鹧，并符合法律觏范和厦门大学研究生学 术活动规范( 试行) 。 另外，该学位论文为 气娴 ) 课题 经费或实验室的 资助，在( X 匍 ) 实验窒完成每( 请在以上括号内填写课 题或谍题组受责入或实验
16、塞名称，未有此顼声明蠢容酶，可以不佟特 别声明。) 声明人：签名) ： 之筠 妒飞年蠡蔑冬E t 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人同意厦门大学根据中华人民共和国学位条例暂行实施办 法等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交 学位论文( 包括纸质版和电子版) ，允许学位论文进入厦门大学图书 馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国 搏士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和 摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。 本学位论文属于： ( ) 1 经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文， 于年月日解密，解密后适用上述授权。 ( ) 2 不保密，适用上述授权。 ( 请在以上相应括号内打“或填上相应内容。保密学位论文 应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密 委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认 为公开学位论文，均适用上述授权。) 声明人( 签名) ：幺知舄 渺o 年明日
