微生物实验室评审关注教材

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1、微生物实验室评审关注 孙克江 2010年12月 内容 l概述 l评审依据 l实验室设置 lBSL-2 l评审关注 微生物认证认可依据 l准则 lCNAS-CL01：2006； lCNAS-CL09：2006； lCNAS-CL22：2006； l实验室资质认定评审准则 实验室资质认 定特殊要求 l生物安全管理 l l 病原微生物实验室生物安全管理条例（病原微生物实验室生物安全管理条例（ 2004.11.122004.11.12） l l 实验室生物安全通用要求（实验室生物安全通用要求（GB19489-2008GB19489-2008） 疾控机构实验室类型 l工作性质 l卫生微生物实验室 l病原

2、微生物（疾病）实验室 l安全等级 lBSL-1 lBSL-2 lBSL-3 lBSL-4 危害分类与实验室安全分级 l病原微生物危 害级别（条例 ） l第一类 l第二类 l第三类 l第四类 l实验室分级 lBSL1 lBSL2 lBSL3 lBSL4 第一类第二类第三类第四类 能够引起 人类或者 动物非常 严重疾病 的微生物 ，以及我 国尚未发 现或者已 经宣布消 灭的微生 物。 能够引起人 类或者动物 严重疾病， 比较容易直 接或者间接 在人与人、 动物与人、 动物与动物 间传播的微 生物。 能够引起人 类或者动物 疾病，但一 般情况下对 人、动物或 者环境不构 成严重危害 ，传播风险 有限

3、，实验 室感染后很 少引起严重 疾病，并且 具备有效治 疗和预防措 施的微生物 。 在通常情 况下不会 引起人类 或者动物 疾病的微 生物。 专业实验室设置-1 l卫生微生物检验 l食品与食源性疾病实验室 l环境卫生实验室（化妆品、水、公共卫生场所监测等 ） l消毒产品与医院监测实验室 l霉菌实验室 l设施特点：洁净要求、安全要求（BSL-1、BSL-2) l布局 l区域集中 l分散 专业实验室设置-2 l细菌等可培养病原微生物检验 l功能与实验活动 l病原菌分离培养与鉴定 l血清学实验 l分子生物学实验 l设施特点：BSL-2、部分洁净 l布局 l区域集中或系统设置：肠道、呼吸道、虫媒或自然

4、 疫源性等 l分散设置：肠道、鼠疫、钩体、流脑、结核等 l分子生物学实验室 专业实验室设置-3 l病毒检验 l功能与实验活动 l病毒分离与鉴定 l血清学实验室 l分子生物实验 l设施特点：BSL-2、洁净 l布局 l区域集中或系统设置：呼吸道、肠道、虫媒、其他 l分散设置：脊灰、麻疹、流感、 HIV、乙脑、出血 热、肝炎等 l分子生物学实验室 BSL2设施与管理 l功能：适用于操作能够引起人类或者动物疾病， 但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危 害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重 疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物 （ GB19489-2008） l实验对象与类型（名录）：

5、三、四类病原的所有 实验；二类病毒标本抗原、血清学、核酸、生化 检测与分析（SARS冠状病毒例外，二类细菌等其 他微生物的样本检验（大量活菌操作BSL3） 表表1.1.病毒分类名录病毒分类名录 共收录共收录160160种病毒：第一类：种病毒：第一类：2929种；第二类：种；第二类：5151种；第三类：种；第三类：7474种；第四类种；第四类 ： 6 6种种 常见高致病性病毒：一类：无；二类：肾出血热汉坦病毒、高致病性禽流感常见高致病性病毒：一类：无；二类：肾出血热汉坦病毒、高致病性禽流感 、艾滋、乙脑、脊髓灰质炎、狂犬、艾滋、乙脑、脊髓灰质炎、狂犬、SARSSARS冠状病毒等冠状病毒等 表表2

6、.2.细菌、放线菌、衣原体、支原体、细菌、放线菌、衣原体、支原体、 立克次体、螺旋体分类名录立克次体、螺旋体分类名录 共收录共收录155155种：第二类病原：种：第二类病原：1010种；第三类病原：种；第三类病原：145145 种种 常见高致病性病原菌：鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌、炭常见高致病性病原菌：鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌、炭 疽芽胞杆菌、布鲁氏菌、牛型分枝杆菌、结核分枝疽芽胞杆菌、布鲁氏菌、牛型分枝杆菌、结核分枝 杆菌等杆菌等 表表3.3.真菌分类名录真菌分类名录 共收录共收录5959种种 第二类： 第二类：4 4种种 第三类：第三类：5555种种 基本设施和设备(GB19489-2008)

7、l适用时，应符合BSL-1实验室的要求（22条） l实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门 应可自动关闭；实验室主入口的门应有进入控制 措施。 l实验室工作区域外应有存放备用物品的条件。 l应在实验室工作区配备洗眼装置。 l应在实验室或其所在的建筑内配备高压蒸汽灭菌 器或其他适当的消毒灭菌设备，所配备的消毒灭 菌设备应以风险评估为依据。 基本设施和设备 l应在操作病原微生物样本的实验间内配备生物安全 柜。 l应按产品的设计要求安装和使用生物安全柜。如果 生物安全柜的排风在室内循环，室内应具备通风换 气的条件；如果使用需要管道排风的生物安全柜， 应通过独立于建筑物其他公共通风系统的管道排出

8、。 l 应有可靠的电力供应。必要时，重要设备（如： 培养箱、生物安全柜、冰箱等）应配置备用电源。 通用管理要求 lBSL-3和BSL-4：认可和卫生部审批。 lBSL-2：单位自主管理，卫生行政部门备案 制，管理参照19489相关规定。 lGB19489-2008管理要求引用ISO/IEC 17025 相关要素结合安全保障特点 4 管理要求 4.1 组织 4.2 管理体系 4.3 文件控制 4.4 要求、标书和合同的评审 4.5 检测和校准的分包 4.6 服务和供应品的采购 4.7 服务客户 4.8 投诉 4.9 不符合检测和/或校准工作的控制 4.10 改进 4.11 纠正措施 4.12 预

9、防措施 4.13 记录的控制 4.14 内部审核 4.15 管理评审 7 管理要求 7.1 组织和管理 7.27.2 管理责任 管理责任 7.37.3 个人责任 个人责任 7.4 安全管理体系文件 7.5 文件控制 7.67.6 安全计划 安全计划 7.77.7 安全检查 安全检查 7.8 不符合项的识别和控制 7.9 纠正措施 7.10 预防措施 7.11 持续改进 7.12 内部审核 7.13 管理评审 GB19489-2008 ISO/IEC 17025 5 技术要求 5.1 总则 5.2 人员 5.3 设施和环境条件 5.4 检测和校准方法及方法的确认 5.5 设备 5.6 测量溯源性

10、 5.7 抽样 5.8 检测和校准物品（样品）的处置 5.9 检测和校准结果质量的保证 5.10 结果报告 7.14 实验室人员管理 7.157.15 实验室材料管理 实验室材料管理 7.167.16 实验室活动管理 实验室活动管理 7.177.17 实验室内务管理 实验室内务管理 7.18 实验室设施设备管理 7.19 废物处置 7.207.20 危险材料运输 危险材料运输 7.217.21 应急措施 应急措施 7.227.22 消防安全 消防安全 7.23 事故报告 ISO/IEC 17025 GB19489-2008 BSL-2管理 l建立生物安全管理委员会 l建立管理体系文件 l编制发

11、布生物安全管理手册或在质量管理手册 补充相应补充实验室生物安全管理规定 l编写发布相关程序文件 l制定制度 l技术操作指导书 l记录 l安全手册 安全手册应涵盖的内容 紧急电话 联系人 u实验室平面图 u紧急出口 u撤离路线 u实验室标识系统 l生物危险 l化学品安全 l辐射 l机械安全 l电气安全 l低温、高热 l消防p危险废物的处理和处置 p事件、事故处理的规定和程序 p从工作区撤离的规定和程序 p紧急救护等 个体防护 1.1.紧急联系信息紧急联系信息 2.紧急导向信息 3.危险源及处置信息 5.自身防护信息 4.应急操作信息 6.简易规程 感染预防措施 无菌操作 生物安全柜使用 感染性物

12、质处理 消毒剂使用 BSL-2设置 l类型 l常压实验室 l负压实验室（准BSL-3) l布局方式 l区域集中型 l分散独立型 评审关注 l4.6服务和供应品 l4.13记录 l5.2人员 l5.3设施和环境条件 l5.4检测和校准方法及方法的确认 l5.5设备 l5.6测量溯源性 l5.7抽采样 l样本管理 l5.9质量的保证 l5.10结果报告 服务和供应品试剂管理 l核查条款： l重点核查 l培养基和试剂验收和管理规定（程序或规程等） l技术验收与评估：关键培养基、病原鉴定试剂、 各种疾病诊断试剂（免疫诊断试剂盒、PCR试剂 ） l保藏与使用 记录控制 l核查条款： l技术记录：样本接收

13、、实验、计算、转移 、报告过程记录 l质量（工作）活动记录：管理记录、设施 设备监控记录与使用维护、培养基配制、 关键试剂保存使用、菌毒种管理、 标准菌株（细胞）确认转种使用、废弃物 收集处理记录等 人员 l核查要素： l人员授权上岗：表、资质（生物安全、压 力容器等）、综合与技能考核 l重要设备授权 l年度培训计划 l培训实施与效果评价 设施和环境 l核查要素 l布局、设施：区域配套与功能隔离 l卫生微生物：洁净实验室（无菌间与超净工作台）、 BSL-2、辅 助实验室 l病原实验室： BSL-2、洁净实验室或超净工作台、辅助实验室、 消毒间（设施） l标识与控制：生物安全、洁净、感染性废弃物

14、、紧急撤离 ；进入控制 l净化和负压实验室使用及定期监控记录 l消毒灭菌设备完好性和使用记录 l菌毒种/标本管理 l废弃物收集、处理制度和记录 l器材和试剂清理与归类保存 方法 l核查要素 l方法的选择和有效性 l卫生检验标准：国家标准、规范 l疾病检验标准：行业标准（WS） 、国家 标准（卫生）卫生部规程、国家CDC监测方案或 检验方法 l方法确认 l新项目确认 l自动化数据处理保存备份 设备 l核查要素 l仪器检校、状态及其标识 l设定参数和性能监控与监测记录 l使用和维护记录 l重要设备使用人员授权（培训和评价） l操作规程和维护计划 l无菌器材标识及其管理 测量溯源 l核查要素 l诊断

15、试剂台帐及其管理 l标准菌株、细胞台帐及其管理 l标准菌株和细胞来源、确认、保藏记录 l标准菌株传代、确认、保存和使用记录 样品 l要素核查 l样品验收、登记、保存和处置记录 l卫生 l疾病 l样品保存场所和设备的配置管理 质量保证 l要素核查 l年度内外部质控计划 l实施情况 l结果评价 l质控活动规定 l日常检测活动质量控制或保证 l ELISA lPCR 检验注意事项 判断检测结果 3232 结果判定 引物阳性对照阴性对照 InfA+- swFluA+- swH1+- RNaseP- 判断实验成立 引物标本1标本2标本3标本4标本5 InfA -+/-+ swFluA -+/- swH1 -+/-+ RNaseP +-+ 结果 非甲型流感 病毒 可能出现 变异 甲型H1N1流感 病毒 非人源标本/不合格 标本/设备故障 理论上不成 立 结果判断 报告 l重点关注：方法依据、计量单位、结果数值 或表述 l食品报告 l化妆品报告