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1、L/O/G/O 临床临床PCR实验室审核实验室审核 要点体会及技术验收要点体会及技术验收 内蒙古包钢医院 孟昭彦 2013-11-09 呼和浩特 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 Contents 临床临床PCR技术准入管理背景技术准入管理背景 技术准入程序技术准入程序 1 2 3 临床基因扩增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点 内蒙古自治区临床基因扩增实验室审核办法内蒙古自治区临床基因扩增实验室审核办法要点要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 Contents 临床临床PCR技术准入管理背景技术准入管理背景 4 1 2 3 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床临床PCR技术准入管理
2、背景技术准入管理背景 临床基因扩增检验实验室主要将PCR技术用于疾病的诊断 与治疗监测。PCR技术发明是生物医学领域的一项革命性 创举，具有深远历史意义，但在上世纪九十年代，在我国 由于部分医疗机构受利益的驱动，在缺乏技术、设备以及 规范化管理的情况下，PCR技术临床应用泛滥，出现大量 假阳性和假阴性结果，甚至出现虚假检测报告，造成检验 结果和临床意义应用十分混乱，严重扰乱正常医疗秩序， 特别在性病基因检测方面，甚至还带来一系列道德伦理、 家庭纠纷以及社会和法律问题。 PCR技术临床应用所出现的一系列问题引起卫生部管理层 高度重视，卫生部医政司于1998年下发了卫医发19989 号文件宣布PC
3、R技术暂停应用于临床诊断 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床临床PCR技术准入管理背景技术准入管理背景 经过近四年反复论证，卫生部2002年1月14日发布“临床 基因扩增检验实验室管理暂行办法”（简称暂行办法）， 同年2月20日卫生部临床检验中心发布“临床基因扩增实 验室工作规范”。 两个文件宣布了PCR技术临床应用解冻，明确规定临床基 因扩增检验实验室开展PCR技术必需具备的基本条件： 规范的PCR实验室 编写适合本实验室的质量手册 经PCR专业知识培训的技术人员（PCR上岗证） 使用有生产批文的PCR试剂。 具备条件的二级以上医院可向卫生部或省临床检验中心申 请技术验收。 内蒙古包钢医院内
4、蒙古包钢医院 临床临床PCR技术准入管理背景技术准入管理背景 2010年12月，卫生部印发医疗机构临床基因扩增管理 办法， 卫办医政发2010194号。 2011年内蒙古自治区卫生厅医政管理要点明确将PCR技 术作为第二类医疗技术进行准入管理，制定内蒙古自治内蒙古自治 区临床基因扩增实验室审核办法区临床基因扩增实验室审核办法。 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 Contents 4 1 2 3 内蒙古自治区临床基因扩增实验室审核办法内蒙古自治区临床基因扩增实验室审核办法要点要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床临床PCR技术准入适用范围技术准入适用范围 应用范围 第二条本管理办法所称临床基因扩增
5、技术是指以临床诊 断和治疗为目的，以扩增检测核酸（DNA或RNA）为方法 的检测技术；建立规范化的实验室；采集人体的各种样本， 利用临床基因扩增检验技术进行分子生物学检验，为临床 提供医学检验服务并出具检验报告的全过程。 第三条 本办法适用于开展临床基因扩增检验技术的医疗 机构。只要开展临床基因扩增检验技术的医疗机构，符合 软硬件符合要求的实验室均可开展。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增实验室的设计临床基因扩增实验室的设计 实验室设计和各区仪器设备配置实验室设计和各区仪器设备配置 第十三条第十三条 临床基因扩增检验实验室
6、设置的一般要求及工临床基因扩增检验实验室设置的一般要求及工 作流程作流程 按照医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则筹建实验室。 “各区独立、注意风向、因地制宜、方便工作”。 设置基本原则为有4个独立且完全隔离的工作区域,不能有空气的 直接相通：包括试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区以及产 物分析区。 根据使用仪器的功能，区域可适当合并，例如使用实时荧光PCR 仪扩增区以及产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩 增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区以及产物 分析区可合并。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩
7、增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点 工作区域仪器设备配置标准符合工作导则。各区有明确标识及专 有仪器设备和清洁用具等，人流和物流单向流动。 原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域： 试剂储存和准备区 标本制备区 扩增区 扩增产物分析区 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增检验实验室区域设计原则临床基因扩增检验实验室区域设计原则 试
8、剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析 区在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在 空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不 能有空气的直接相通。 根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时荧 光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处 理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本 制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。 临床基因扩增实验室审核流程、要点临床基因扩增实验室审核流程、要点 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增实验室的设计临床基因扩增实验室的设计 产物分析区产物分析
9、区 空气流向空气流向 空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向 缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间 专用走廊专用走廊工作流向工作流向 扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增实验室的设计 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增实验室的设计临床基因扩增实验室的设计 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增实验室审
10、核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 试剂储存试剂储存 与准备区与准备区 标本标本 制备区制备区 扩增区扩增区 产物产物 分析区分析区 临床基因扩增检验实验室的空气流向临床基因扩增检验实验室的空气流向 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 人流，物流人流，物流 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 试剂储存和准备区（导则）试剂储存和准备区（导则） 功能：功能：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及 离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。 仪器设备配置标准（基本配置）：仪器设备配置标准（基本配置）： （1）28和-20以下冰箱。 （2
11、）混匀器。 （3）微量加样器（覆盖0.2-1000l）。 （4）可移动紫外灯（近工作台面）。 （5）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和吸头。 （6）专用工作服和工作鞋(套)。 （7）专用办公用品。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 标本制备区（导则）标本制备区（导则） 功能：功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对 于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人 防护和操作规范的要求。 仪器设备配置标准（基本配置）：仪器设备配置标准（基本配置）： （1）2-8冰箱、-20或-80冰箱。 （2）高
12、速离心机。 （3）混匀器。 （4）水浴箱或加热模块。 （5）微量加样器（覆盖0.2-1000l）。 （6）可移动紫外灯（近工作台面） 。 （7）生物安全柜。 （8）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和吸头（带滤芯）。 （9）专用工作服和工作鞋(套)。 （10）专用办公用品。 （11）如需处理大分子DNA，应当具有超声波水浴仪。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 扩增区（导则）扩增区（导则） 功能：功能：cDNA合成、DNA扩增及检测 仪器设备配置标准（基本配置）：仪器设备配置标准（基本配置）： （1）核酸扩增仪。 （2）微量加样器（
13、覆盖0.2-1000l），（视情况定）。 （3）可移动紫外灯（近工作台面）。 （4）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和吸头（带滤芯）。 （5）专用工作服和工作鞋。 （6）专用办公用品。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 扩增产物分析区扩增产物分析区 功能：功能：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切、电泳、变性高 效液相分析、测序等。 仪器设备配置标准（基本配置）：仪器设备配置标准（基本配置）： （1）微量加样器 （2）可移动紫外灯（近工作台面）。 （3）消耗品：一次性手套、加样器吸头（带滤芯）。 （4）专用工作服和工作鞋。 （5
14、）专用办公用品。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 工作流程工作流程 (一)进入各工作区域应当严格按照单一方向进行， 即试剂储存和准备区标本制备区扩增区 扩增产物分析区。 (二)各工作区域必须有明确的标记，不同工作区 域内的设备、物品不得混用。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 (四)实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区 标本制备区扩增区扩增产物分析区 的方向进行。不同的实验区域应当有其各 自的清洁用具以防止交叉污染。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点
15、内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。工作 区的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学 物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应 当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污 染的效果非常关键，因此使用可移动紫外灯（ 254nm波长），在工作完成后调至实验台上60 90cm内照射。 由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp），对紫 外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延 长照射时间，最好是照射过夜。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 设置申请设置申请 第五条第五条 医疗机构向自治区卫生行政部门（委托临医疗机
16、构向自治区卫生行政部门（委托临 床检验质量控制中心）提出临床基因扩增检验实床检验质量控制中心）提出临床基因扩增检验实 验室设置申请，并提交以下材料：验室设置申请，并提交以下材料： （一）医疗机构执业许可证复印件； （二）医疗机构基本情况，拟设置的临床基因扩增实验室 平面图以及拟开展的检验项目、实验设备设施条件和有关 技术人员资料（具体见附件） （三）对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增检验实 验室运行的预测分析。 临床基因扩增实验室审核办法要点临床基因扩增实验室审核办法要点 内蒙古包钢医院内蒙古包钢医院 临床基因扩增检验实验室应具有体系文件临床基因扩增检验实验室应具有体系文件 质量手册质量手册 程序性文件程序性文件 标准操作程序标准操作程序 相关记录表格相关记录表格 临床基
