卡托普利抗高糖诱导的h9c2细胞氧化损伤作用及其作用机制的研究

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1、分类号：R 9 6 密级： 学位类别； 科学学位团专业学位口 。 学校代码；10 0 6 2 学号：2 0 0 8 2 0 7 3 学科门类：医学 又蚌酱甜 母 T l A N J I 奠醵E D l C A LU N l V E I 玲l T Y 硕士学位论文 M A S T E R SD I S S E R T A T I O N 论文题目：卡托普利抗高糖诱导的H 9 c 2 细胞氧化 损伤作用及其作用机制的研究 TITLEP r o t e c t i v ee f f e c t sa n dm e c h a n i s mo fc a p t o p r i l o nh i g

2、hg l u c o s e - i n d u c e do x i d a t i v ei n j u r yi n H 9 c 2c e l l s 一级学科：药学 二级学科：药理学 论文作者：王嫒媛 指导教师：刘艳霞教授 导师组成员：吴艳娜讲师 j 宋君秋讲师 天津医科大学研究生院 二。一一年五月 学位论文原创性声明 IiYllll112IIilli001iiiiiilllltllllllllllltlttll34 1 6 硼lY 2 0 0 1 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包

3、含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名：之避速 日期：辨莎月矿日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 4 膏 本论文属于 保密 口，在年解密后适用本授权书。 _一 不保密区7 。 ( 请在相对应的方框内打“4 ) 学位论文作者签名：燃日期：口，年参月扩日

4、 导师签名：自蔓鱼毖日期：汐，年占月护日 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 研究卡托普利( C a p t o p r i l ，C a p ) 对高糖诱导的H 9 c 2 细胞氧化损伤的保护作用， 探讨该作用与P 1 3 K A k t 和E R K l 2 信号转导通路的关系。 方法： 1 高糖诱导H 9 c 2 细胞氧化损伤模型的建立 用含1 0 F B S 的D M E M 培养基培养H 9 c 2 细胞2 4h 后，换用含不同浓度葡萄糖 无F B S 的D M E M 培养基处理细胞4 8h ，采用M T T 法检测细胞存活率。选择适宜的 葡萄糖浓度，建立高糖诱导H 9 c

5、 2 细胞氧化损伤的模型。 2 C a p 抗高糖诱导I 拘H 9 c 2 细胞氧化损伤作用及其与P 1 3 K A k t 信号通路的关 系 用含1 0 F B S 的D M E M 培养基培养H 9 c 2 细胞2 4h ，按以下分组加入不同试药 孵育4 8h 。实验分7 组：C 组( 正常对照组) ：加入无F B S 的D M E M 培养基；G 组( 模型组) ：加入浓度为3 5 0m m o l L 的葡萄糖；( 耍) C a p l 0 + G 组：同时加入终浓 度为1 0J - t m o l L 的C a p 和3 5 0m m o l L 的葡萄糖； C a p l 0 0

6、0 ( 3 组：同时加入终浓度 为1 0 0l - l m o l L 的C a p 和3 5 0m m o l L 的葡萄糖。L Y + G 组：终浓度为1 0I - t m o l L 的 L Y 2 9 4 0 0 2 ( P 1 3 K A 虹印制剂) 预处理1 0m i n ，再加入终浓度为3 5 0m m o l L 的葡萄 糖；( 查) L Y + C a p l 0 0 G 组：终浓度为1 0v , m o l L 的L Y 2 9 4 0 0 2 预处理1 0m i n ，再同时 加入终浓度为1 0I _ t m o l L 的C a p 和3 5 0m m o l L 的葡

7、萄糖；( 2 ) L Y + C a p l 0 0 + G 组：终 浓度为1 0I - t m o l L 的L Y 2 9 4 0 0 2 预处理1 0 r a i n ，再同时加入终浓度为1 0 0I - t m o l L 的 C a p 和3 5 0m m o F L 的葡萄糖。M T T 法测定细胞存活率，比色法测定细胞培养液中 乳酸脱氢酶( L a c t a t eD e h y d r o g e n a s e ，L D H ) 活性、总超氧化物歧化酶( T o t a lS u p e r O x i d eD i s m u t a s e ，T - S O D ) 和

8、锰超氧化物歧化酶( M a n g a n e s eS u p e rO x i d eD i s m u t a s e ， M n S O D ) 活力以及丙二醛( M a l o n d i a l d e h y d e ，M D A ) 含量；H o c c h s t3 3 2 5 8 染色、 c a s p a s e 3 活性检测细胞凋亡；W e s t e r nb l o t 法检测H 9 C 2 细胞中p A k t 和t 。A k t 的蛋白 表达水平。 3 C a p 抗高糖诱导的H 9 c 2 细胞损伤的作用及其与E R K l 2 信号通路的关系 用含1 0 F

9、 B S 的D M E M 培养基培养H 9 c 2 细胞2 4h ，按以下分组分别加入不同 试药孵育4 8h 。实验分7 组：至同上；P D + G 组：终浓度为5 0p m o l L 的 P D 9 8 0 5 9 ( E I l 2 抑制剂) 预处理3 0m i n ，再加入终浓度为3 5 0m m o l L 的葡萄糖； 天津医科大学硕士学位论文 P D + C 印1 0 + G 组：终浓度为5 0 肛m o l L 的P D 9 8 0 5 9 预处理3 0r a i n ，再加入终浓度 为1 0I _ t m o l L 的C a p 和3 5 0m m o l L 的葡萄糖；(

10、 D P D - + C a p l 0 0 + G 组：终浓度为5 0 I _ t m o l L 的P D 9 8 0 5 9 预处理3 0m i n ，再加入终浓度为1 0 0J _ t m o l L 的C a p 和3 5 0m m o l L 的葡萄糖。M T T 法测定细胞存活率、比色法测定细胞培养液中L D H 活性、T - S O D 和M n S O D 活力以及M D A 含量；H o e c h s t3 3 2 5 8 染色、e a s p a s e 3 活性检测细胞凋亡。 W e s t e r nb l o t 法检- 澳U H 9 c 2 细胞中p E R K

11、 l 2 和E I 1 2 的蛋白表达水平。 结果： 1 高糖诱导H 9 c 2 细胞损伤模型的建立 在葡萄糖浓度为3 5 0m m o l L 处理4 8h 的条件下，细胞出现皱缩、破裂，与C ( 1 0 0 0 硅0 ) 组比较，细胞存活率( 5 2 9 6 怡：3 6 2 ) 显著降低，且降低程度适中，实验 结果重复性好，确定后续实验采用浓度为3 5 0m m o l L 葡萄糖建立模型。 2 C a p 抗高糖诱导的H 9 c 2 细胞氧化损伤作用及其与P 1 3 K A k t 信号通路的关 系 C a p l 0 + G 和C a p l 0 0 + G 组分别与G 组相比，细胞存

12、活率显著提高 ( 8 2 8 1 0 硅2 0 3 ，8 2 6 5 嘣：2 5 5 V S 5 4 6 8 士2 2 8 ，P 0 0 1 ) 、细胞培养液中L D H 活性显著降低( 2 5 0 9 4 8 8 ，2 3 7 0 士1 5 0V S 6 3 1 7 士1 9 5 ，P O 0 1 ) ；T S O D 活力 ( 1 7 9 9 4 1 8 9 ，1 6 4 4 4 - 2 1 1V S 1 0 9 2 4 1 4 5 ，P O 0 1 ) 及M n S O D 活力显著提高 ( 8 4 3 1 4 - 1 1 6 ，8 1 5 3 4 - 1 0 9v S 5 2 3 2

13、4 - 0 9 2 1 ，P 0 0 1 ) 、M D A 含量显著降低 ( 1 3 3 3 4 - 0 0 8 3 ，1 3 8 3 4 - 0 0 3 4V S 4 0 6 2 4 - 0 0 6 8 ，P 0 0 1 ) ；H o e c h s t 染色均能减轻细胞核 凝聚，减少细胞碎片、c a s p a s e 3 活性明显降低( 2 5 3 5 士1 1 4 ，2 7 1 1 0 硅1 5 1 v s 5 2 0 8 士2 0 1 ，P 0 0 1 ) 。 加入P 1 3 K A k t 抑制剂L Y 2 9 4 0 0 2 后的L Y + C a p l 0 + G 和L Y

14、+ C a p l0 0 + G 组，分别 与C a p l 0 + G 和C a p l O O + G 组比较，细胞存活率显著降低( 5 8 5 9 圪4 4 V S 8 2 8 1 0 硅2 0 3 ，6 2 2 7 4 1 5 1 v s 8 2 6 5 士2 5 5 ，P O o i ) 、细胞培养液中L D H 活 性显著提高( 4 8 9 0 4 1 1 0v s 2 5 0 9 士8 8 ，4 7 6 5 4 - 1 1 7v s 2 3 7 0 士1 5 0U L ，P 0 0 1 ) ； T S O D ( 1 2 2 6 4 1 3 1v s 1 7 9 9 4 1 8

15、9 ，1 2 4 8 4 - 1 2 7v s 1 6 4 4 + 2 1 1U m l ，P 0 0 1 ) 及 M n S O D 活力( 5 9 3 1 4 1 8 4v s 8 4 3 1 4 - 1 1 6 ，5 6 6 3 + 0 9 6 3V S 8 1 5 3 4 1 0 9U m l ，P 0 0 1 ) 显著降低、M D A 含量显著提高( 3 2 8 4 4 0 0 6 7W 1 3 3 3 4 0 0 8 3 ，3 2 5 9 4 0 0 6 7 V S 1 3 8 3 4 - 0 0 3 4 ，P O o o 。H o e c h s t 染色呈致密浓染，细胞核碎片增多：c a s p a s e - 3 活性 明显升高( 4 8 6 7 4 3 1 6 v s 2 5 3 5 0 社1 1 4 ，4 4 0 3 士1 6 9 v s 2 7 1 1 0 社1 5 1 ， P 0 0 1 ) 。 天津医科大学硕士学位论文 W e s t e r nb l o t 结果显示，与G 组相比，C a p l0 + G 和C a p l0 0 + G 组均显著增加高 糖损伤的H 9 c 2