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1、分类号 密级 华中农业大学硕士学位论文 除虫菊种子辐射效应及其组织培养研究 1S 3 8 7 40 S t u d yo nI r r a d i a t i o nE f f e c to fS e e d sa n d T i s s u eC u l t u r eo f C h r y s a n t h e m u mc i n e r a r i i f o l i u mT r e v 研究生：李振芳 指导教师：王彩云教授 专业：园林植物与观赏园艺研究方向：园林植物栽培生理 获得学位名称：农学硕士获得学位时间：2 0 0 7 年6 月2 6 日 华中农业大学园艺林学学院 二Oo
2、七年六月 洲煳 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 砷7 年6 月；。日 是否保密 是 如需保密，解密时间 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究2 r _ 作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同X - 作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：茗簪暑 时间：呻年月9 日 学位论文使用授权书 本人完全了解“华中农业大学关于保存、使
3、用学位论文的规定”，即学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇 编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论 文的全部或部分内容。 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书。 学位论文作者张荐挥考 导师张五弼乏 签名日期：砷年月7 日签名日期：司年6 月坳日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 除虫菊种子辐射效应及其组织培养研究 目录 摘要】 A b s t r a c t I l l 缩写词表V 1 前言：1 I I 研究背景1 1
4、 2 研究进展2 1 2 1 辐射诱变的研究状况3 1 2 1 1 辐射诱变在植物种质创新上的应用4 1 2 1 2 辐射诱变育种的特点4 1 2 1 3 辐射诱变突变体的分离5 1 2 2 除虫菊酯的提取和处理6 1 2 3 除虫菊组织培养研究7 1 2 3 1 外植体再生7 1 3 2 2 愈伤组织培养7 1 3 研究目的与意义。8 26 0 C o T 射线对除虫菊种子的辐射效应9 2 1 材料与方法9 2 1 1 种子辐射处理9 2 1 2 辐射材料的田间观测9 2 1 3 辐射材料突变体的筛选1 0 2 1 4 数据处理与分析方法1 0 2 2 结果与分析1 0 2 2 1 辐射处理
5、对除虫菊种子萌发和出苗率的影响。1 0 2 2 1 1 不同辐射剂量对除虫菊发芽率的影响1 0 2 2 1 2 不同辐射剂量对除虫菊出苗率和存苗率的影响1 1 2 2 2 辐射处理对除虫菊幼苗生长特性的影响1 2 2 2 2 1 不同辐射剂量对除虫菊真叶数的影响1 2 2 2 2 2 不同辐射剂量对除虫菊株高的影响1 3 2 2 3 突变株的田间筛选1 4 3 除虫菊素含量检测1 6 3 1 材料与方法1 6 3 1 1 材料1 6 3 1 2 除虫菊素提取1 6 3 1 3 薄层色谱分析1 6 3 1 3 1 材料1 6 3 1 3 2 实验方法1 6 3 1 4 除虫菊素气相色谱分析1 7
6、 3 1 4 1 试剂1 7 3 1 4 2 仪器1 7 3 1 4 3 色谱操作参数1 7 华中农业大学2 0 0 7 届硕士毕业论文 3 1 4 4 除虫菊素含量测定。1 8 3 1 5 数据处理与分析方法1 8 3 2 结果与分析1 8 3 2 1 除虫菊叶片提取物的T L C 分析1 8 3 2 2 辐射材料除虫菊素的气相色谱分析。2 0 3 2 2 1 除虫菊叶片提取物的气相色谱分析2 1 3 2 2 2 不同辐射处理除虫菊素各组分的含量变化2 3 3 2 2 3 辐射变异株的气相色谱检测2 5 3 2 2 4 不同苗龄除虫菊叶片提取物除虫菊素含量比较2 5 4 除虫菊叶片再生体系初
7、步研究2 7 4 1 材料与方法2 7 4 1 1 材料。2 7 4 1 2 除虫菊快繁体系的建立2 7 4 1 2 1 无菌苗的建立2 7 4 1 2 2 快繁培养基筛选。：2 7 4 1 2 3 生根培养基筛选2 7 4 1 3 除虫菊叶片再生体系的建立。2 8 4 1 3 1 愈伤组织诱导2 8 4 1 3 2 叶片直接诱导不定芽2 8 4 1 4 数据统计及分析2 8 4 2 结果与分析2 9 4 2 1 除虫菊的快繁体系建立2 9 4 2 1 1 除虫菊快繁培养基筛选2 9 4 2 1 2N A A 对除虫菊无菌苗生根的影响3 0 4 2 2 除虫菊愈伤组织的诱导3 1 4 2 2
8、1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响3 1 4 2 2 2K T 和2 ，4 D 之间的交互作用对愈伤组织诱导的影响3 2 4 2 2 32 ，4 D 不同浓度对叶片愈伤组织诱导的影响3 3 4 2 2 4K T 不同浓度对叶片愈伤组织诱导的影响3 4 4 2 3 除虫菊叶片直接诱导芽。3 5 5 问题与讨论3 6 5 16 0 C o Y 射线对除虫菊种子辐射效应3 6 5 2 辐射突变体的筛选3 7 5 3 除虫菊素的提取及含量测定3 7 5 4 除虫菊组织培养研究3 8 5 5 展望3 8 参考文献4 0 致谢4 6 附j 豪I 4 7 除虫菊种子辐射效应及其组织培养研究 摘要 本文利用不
9、同剂量的6 0 C o Y 射线对除虫菊种子进行辐射，通过观测辐射后 M 1 代的发芽率、出苗率、幼苗生长情况等，研究6 0 C 0 Y 射线辐射对除虫菊的 生物学效应；从2 0 0 多株辐射M 1 代中筛选出2 1 个形态变异植株，并对这些形 态变异植株进行了除虫菊素含量的气相色谱分析，初步筛选出2 株除虫菊素含 量增加的突变株。对除虫菊的快速繁殖和植株再生也进行了初步研究，为以后 辐射突变体的离体培养分离以及遗传转化奠定基础。其主要结果如下： ( 1 ) 辐射处理对除虫菊种子萌发和出苗率的影响 6 0 C o Y 射线辐射对除虫菊发芽率影响规律为：低剂量表现出一定的促进作 用，高剂量表现一
10、定的抑制作用；对发芽快慢的影响一致表现为具有一定的延 缓作用。除虫菊出苗率从大到小顺序为：1 0 G y C K 2 0 G y 8 0 G y 4 0 G y 辐射 处理，除虫菊存苗率从大到小顺序为：C K 4 0 G y 1 0 G y 2 0 G y 8 0 G y 辐射处 理。 ( 2 ) 辐射处理对除虫菊幼苗生长特性的影响 辐射处理对除虫菊真叶数表现出低剂量1 0 G y 促进生长，高剂量抑制生长的 效应；对株高表现出明显的抑制效应，并有随着辐射剂量的增加抑制效应也随 之增加的趋势。 ( 3 ) 除虫菊辐射突变株的田间筛选 通过对2 2 5 株辐射M 1 代材料苗期各表型性状调查，筛选出2 1 个形态变异 植株。其中，株高只产生了矮株突变体；叶长和叶形指数两性状出现了正负双 向突变体；叶面积只出现了负向突变体；分蘖数和真叶数两性状均没有出现突 变；所有突变中平均株幅的负向突变最多；其次是株高的负向突变。所有突变 中，只出现了1 株正向突变体，其余均为负向突变体，而且大部分突变体都集 中在8 0 G y 辐射处理。 ( 4 ) 除虫菊素含量测定 通过薄层色谱分析
