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1、临床医生应重视中段尿细菌培养和药物实验,合理使用抗 生素,尽量减少耐药菌株的发生和真菌感染。 参考文献: 1 高祝慧,刘建侠 1112例泌尿系统感染病原菌检验及 检验常见菌耐药性分析 J 1哈尔滨医药, 2005, 25 (2)111 2 张丽华,刘彦慧,赖志刚 1尿液细菌培养及药敏结果 分析J 1齐鲁医学检验, 2005, 16 (2)391 3 王建树,莫成锦 1检出尿培养321株病原菌分布及耐 药性分析J 1中国热带医学, 2005, 5 (2)3241 4 江晓平,魏雪芬 1医院获得性真菌尿路感染的临床特 点J 1中国微生态学杂志, 2003, 15 (3)7011 5 方晓霞,邓懋清
2、,杨月霞,等 1180株真菌鉴定及结 果分析J 1中华医学检验杂志, 2004, 25221 6 郭仲辉,陈顺仪,梁卫芳,等 1泌尿系统分离超广谱 酶及耐药性分析J 1实用医技杂志, 2005, 12 (5)12881 7 丁国印,王运堂,白景花 1留置导尿泌尿系感染的常 见菌群耐药分析及预防对策J 1中华医院感染学 杂志, 2005, 15 (7)13121 8 欧阳范献,陈允凤,卜平凤,等 14年中海口地区产 超广谱2 内酰胺酶阳性菌检测及其耐药性分析J 1 中华医院感染学杂志, 2005, 15 (1)862871 9 陈晓玲 1阴沟肠杆菌耐药机制的研究进展J 1中 国抗感染化疗杂志,
3、2005, 5 (5)3111 10施金玲,蔡 璇,李从荣,等 1阴沟肠杆菌去阻遏持 续高产Ampc酶和超广谱 2 内酰胺酶的耐药调查 J 1中华医院感染学杂志, 2003, 13 (10)9671 11张群智,周惠平 1311株肠球菌所致医院感染与耐药 性分析 J 1 中 华 医院 感 染学 杂 志,2000,10 (4)2571 (收稿日期: 2006 - 09 - 29) 分析与检测 应用自动浊度微生物分析仪测定维生素片剂中的生物素 黎旭茹 张 沁 刘春丽 安利(中国)日用品有限公司(广州 510730) 【 摘 要 】 目的 建立应用自动浊度微生物分析仪定量测定多种维生素营养片剂中生物
4、素含量的方法。方法 应用自动浊度微生物分析仪对样品进行自动稀释,自动检测标准溶液和样品溶液中的菌体生长浊度,通过测定细菌 生长和繁殖强度间接地测定出样品中的生物素含量。结果 方法的线性范围0105019 ng/ml,曲线相关系数r为 019972,精密度为3175% ,回收率平均值为102137%。结论 方法操作简单、灵敏度高、处理量大,适合生产企业的 批量质量控制和检测。 【 关键词 】 微生物分析法 自动浊度微生物分析仪 生物素 Automated m icrobiological assay for d2biotin in multi2vitam in tablets Li Xuru,
5、Zhang Q in, Liu Chunli1Amway (China) Co1Lim ited Guangzhou510730 【Abstract】 Established an automatedmicrobiological assay, which is for determination the d2biotin content inmulti2vita2 min tablets1In this assay, the Autoturb3system was used formeasuring the turbidity of bacterias growth1Itwas found
6、that the range of linearity is 0105019 ng/ml1correlation coefficient of calibration curve is 019972, precision is 3175% , and recovery rate is 102137%1The available data show the assay to be a rapid, accuratemethod and suitable for easily handling a large numbr of samples in manufacturing enterprise
7、s1 【Key words】 MicrobiologicalAssay; Autoturb3; d2Biotin 许多补充多种维生素的口服营养片剂中都含有生物素。 生物素又称维生素H,在人体内,生物素参与碳水化合物、 蛋白质和脂肪的代谢,有助于防止白发、脱发、缓解痛风、 减轻皮肤过敏症状等作用。中国营养协会建议18岁以上成 年人的生物素每日摄入量为30 mg。目前我国还没有测定 食品中生物素含量的国家标准,国内外测定生物素含量的 方法有微生物分析法、化学分析法、酶法等,其中微生物 分析法具有极高的灵敏度和准确度,而且采用此法测定的 生物素是能够被生物体所利用的。本文参考美国公职分析 化学家协会
8、(AOAC)的微生物分析法,应用自动浊度微 85广 州 医 药 2006年第37卷第6期 生物分析仪,准确定量维生素营养片剂中的痕量生物素。 经证明,方法操作简便、灵敏度高、处理量大,适合企业 的批量质量控制和检测。 1 材料与方法 111 实验原理:植物乳杆菌标准菌株Lactobacillus planta2 rum (ATCC 8014)是一种生物素营养缺陷型微生物, 其正 常生长特异性地依赖外部的生物素。在一定生长条件下, Lactobacillusplantarum的生长与繁殖强度与外部溶液中生物 素的含量呈现线性关系。由于菌株的生物量专一的反映复 杂的营养成分中的生物素含量,可有效排
9、除其他物质对测 定的影响,因此利用分光光度计测定接种培养后的标准溶 液和样品溶液的透光度,可间接地测定出食物样品中的生 物素含量。 112 仪器和设备:自动浊度微生物分析仪(Autoturb3Bio2 assay System) :由美国Schaefer公司生产,是用于定量测定 抗生素、维生素等物质的仪器。这个仪器包括2个工作模 块 2 自动稀释模块和分光光度测定模块。自动稀释模块能自 动吸取011 ml和0115 ml的样品,混合培养基,将样品稀 释成测定所需的2个终浓度。在样品加入菌种液培养完成 后,分光光度测定模块能自动连续吸取测试样品,读取其 透光度值。每轮测试的处理样品量为30个,每
10、个样品仅需 时3分钟。恒温培养箱,高压蒸汽灭菌器,离心机。 113 培养基与试剂: 0112N氨水溶液, 0185%灭菌生理盐水。乳酸杆菌素 培养液、生物素分析培养液:(美国BD公司)按照干粉培 养基的配置指引,制备成培养液。乳酸杆菌琼脂培养管: (美国BD公司)用乳酸杆菌素琼脂干粉培养基制备成直面 试管。 生物素标准储备液:称取01200 g标准加50 ml 0112N 氨水,用去离子水定容到200 ml,再经2次稀释定容,配 制成1000 ml 011 ng/ml的储备液。 114 菌株:美国国家菌种保藏中心的标准菌株Lactobacil2 lus plantarum (ATCC 8014
11、) ,接种于乳酸杆菌琼脂培养管中 保存。 115 实验方法 11511 菌种液的配制:使用前一天,将已在琼脂管中生长 2024小时的L1plantarum接种于Lactobacilli培养液中, 35 培养6小时,取出后离心10 min (3000 r/min) 2次, 每次离心后弃去上清液,用已灭菌的生理盐水重新悬浮。 11512 样品预处理:称取适量样品到1000 ml容量瓶中, 加100 ml 0112N氨水溶液混匀后于121 高压灭菌5 min, 取出冷却至室温,用去离子水定容。 11513 工作标准的制备:分别吸取1、1、1、3、2、3 ml 标准储备液,用去离子水定容至200、10
12、0、50、100、50、 50 ml,制备成015、110、210、310、410、610 ng/ml的工 作标准。 11514 标准系列管和样品试管的制备:用自动浊度微生物 分析仪自动稀释模块,将每试管的空白基准、工作标准、 待测样品分别稀释成4个测试试管。得到0105、011、012、 013、014、016 ng/ml和01075、0115、013、0145、016、 019 ng/ml两个浓度梯度的工作曲线。每个待测样品有2个 浓度,每个浓度有2个平行的样品管。 11515 灭菌:样品管与标准系列管均加盖,于121 条件 下高压灭菌5分钟。 11516 接种与培养:待试管冷至室温后,每
13、管接种100l 菌种液,于35 恒温培养箱中培养18小时。 11517 测定:用自动浊度微生物分析仪的分光光度测定模 块,选取650 nm波长,自动进样及测定标准管及样品管的 透光度值T%。 116 计算: 样品中生物素( g/g) = F M1000 其中2 从标准曲线上得出的生物素的含量ng M2 样品量g F2 稀释倍数 2 结果与讨论 211 测定波长的确定:本测试方法条件下,测试标准溶 液,在波长500700 nm内,确定650 nm有最小透光度 T%。 212 反应时间的影响:在本测试方法条件下,培养时间在 18小时后,样品中菌种基本结束对数生长期,进入稳定 期。最高浓度的标准试管
14、在培养18小时后,透光度值T% 结果变化小于2%。 213 线形范围:在测试条件下,用生物素标准的两个工作 系列溶液,按测试方法测定透光度T%。结果表明,生物 素浓度在0105019 ng/ml范围内,生物素的浓度与对应透 光度T%的对数呈良好的线性关系。 表1 反应时间对透光度的影响(n =9) 反应时间(h)16182022 透光度T%平均值1917171415161413 表2 生物素浓度范围和线性关系 日期回归方程1回归方程2 相关系数 r平均值 1y = - 015942x +119944y = - 015595x +11987019993 2y = - 017673x +11960
15、4y = - 016740x +119352019935 3y = - 016788x +119827y = - 016341x +119736019989 表3 样品生物素测定结果的精密度 日期生物素平均值( g/g) STDEVRSD (% ) 14310901711165 24315601230153 34611201551119 44617101460198 4天平均4418711683175 95广 州 医 药 2006年第37卷第6期 表4 样品生物素的加标回收率 本底值 (ng/ml) 理论加标值 (ng/ml) 实测加标值 (ng/ml) 平均回收率 (% ) 11995 01
16、50145891167 11011097109172 21021114105172 214 方法的精密度实验:同一种维生素样品,在4天进行 连续测定 共20次,平 均 值 为44187g/g,精 密 度为 3175%。 215 方法的加标回收率实验:同一种维生素样品,在3天 进行加标实验9次,平均回收率为102137%。 216 油 脂 干 扰 的 排 除:含 油 脂 成 分 的 物 质 会 促 使 L1plantarum生长迅速,导致样品的透光度不再与生物素的 含量成比例关系。因此,为去除油脂对实验结果的干扰, 实验用的玻璃器具在彻底清洗后,用烘箱160加热6小时; 实验时,操作人员手部表面不能涂抹护肤品。 217 生物素残留的排除:培养菌种的培养液含有生物素, 在制备菌种液时,菌种液离心后用生理盐水反复彻底冲洗, 消除菌种液中生物素的残留。否则,会使测定的透光度值 升高
