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1、第3节节 测测定微生物的数量 学习导航 1.概述微生物计计数的基本方法。 2.运用稀释释平板法测测定样样品中微生物的数量 。重、难难点 新知初探思维启动 一、直接计计数法 1.常用方法：显显微镜镜直接计计数法。 2.具体步骤骤：将待测样测样 品制成悬悬液取一 定量的悬悬液放在显显微镜镜下进进行计计数观观察 并计计算出单单位体积积内的微生物总总数。 3.优优点 4.缺点：难难以计计数_的细细菌。 5.适用范围围：一般适用于纯纯培养悬悬浮液中各 种_的计计数。 二、间间接计计数法 1.常用方法：_。 所需设备设备 _，可迅速得到结结 果 能观观察到微生物的_ 简单简单 形态态特征 微小 单细单细
2、胞菌体 稀释释平板计计数法 2.具体步骤骤：需要将待测样测样 品配制成均匀的 _并使其均匀分布于平板中 的培养基内，经过经过 培养后，统计统计 培养基中出 现现的_,即可推算出检测样检测样 品中的 活菌数。 3.优优点：在样样品中含菌数_的情形 下也可以完成计计数。 系列稀释释液 菌落数 较较少 判一判 (1)在用直接计计数法测测量培养瓶中酵母菌时时 ，应应在培养液静置一段时间时间 后，从瓶底部吸 取液体样样本。() (2)用稀释释平板计计数法，通过观过观 察菌落，得 出的数值值往往比实验值实验值 要大。() (3)在计计数时时，用于培养的器皿要进进行灭灭菌 。() 三、间间接计计数法实实例
3、1.土壤中好气性细细菌的计计数 (1)制备备土壤稀释释液 取土壤表层层_处处的土样样。准 确称取1 g土样样，放入盛有_ mL无菌水的 锥锥形瓶中，振荡荡20 min后制成102倍的稀释释 液。然后进进行系列稀释释，得到103、104、 105、106的系列稀释释菌液。 5 cm10 cm 99 (2)取样样及倒平板：每个号码设码设 置_个重复 。 (3)培养。 (4)观观察记录记录 计计数时对时对 于细细菌、放线线菌、酵母菌以每个 培养皿内有_个菌落为为宜。霉菌 以每个培养皿内有_个菌落为为宜 。 3 30300 10100 2.检测检测 天然水源中细细菌总总数和大肠肠菌群数 (1)细细菌总
4、总数通常是指1 g或1 mL检测样检测样 品中 所含_的总总数,单单位用cfu/g(mL) 表示。 细细菌菌落 (2)大肠肠菌群数通常是指每100 g或100 mL 检测样检测样 品中所含大肠肠菌群的实验实验 数值值，以 (MPN)表示。大肠肠菌群是指在_条件下 ，24 h内能发发酵_，产产酸产产气的一类类 _氧或_氧型革兰兰氏阴性无芽孢孢杆 菌的总总称。大肠肠菌群数的检测检测 ，常用 _法，使用乳糖胆盐盐蛋白胨胨培养 基、_琼琼脂培养基(EMB培养基) 和乳糖发发酵管。 37 乳糖需兼性厌厌 多管发发酵 伊红红美蓝蓝 3.土壤中分解尿素细细菌的计计数 有些细细菌含有_酶，能将尿素 琼琼脂培养
5、基中的尿素分解生成氨，氨溶于水 变变成氢氢氧化铵铵，导导致培养基变变成_性， 使酚红红指示剂剂呈现现_色。 尿素分解 碱 红红 想一想 土壤有“微生物的天然培养基”之称，为为什 么？ 【提示】 由于土壤具备备了各种微生物生长长 所需的营营养、水分、空气、酸碱度、渗透压压 和温度等条件，是微生物生活的良好环环境。 对对微生物来说说，是微生物的“大本营营”； 对对人类类来说说，是最丰富的“菌种资资源库库” 。 要点突破讲练互动 要点一 直接计计数法和间间接计计数法的比较较 1.显显微镜镜直接计计数法 (1)原理：利用特定细细菌计计数板或血细细胞计计 数板，在显显微镜镜下计计算一定容积积的样样品中微
6、 生物的数量。 (2)方法：用计计数板计计数。计计数板是特制的 载载玻片，其上有特定的面积为积为 1 mm2，高 为为0.1 mm的计计数室，一个计计数室又被分成 25个(或16个)中格，每个中格再被划分成 16个(或25个)小格，每个计计数室都由400个 小格组组成。 (3)操作：将稀释释的样样品滴在计计数板上，盖 上盖玻片，然后在显显微镜镜下计计数45个中 格中的细细菌数，并求出每个小格所含细细菌的 平均数，再按计计算公式求出每毫升样样品中所 含的细细菌数。 (4)计计算公式 每毫升原液所含细细菌数每小格平均细细菌数 40010000稀释释倍数 (5)缺点：不能区分死菌与活菌。 2.间间接
7、计计数法(活菌计计数法) (1)原理：当样样品的稀释释度足够够高时时，培养 基表面生长长的一个菌落，来源于样样品稀释释液 中的一个活菌，通过统计过统计 平板上的菌落数， 就能推测测出样样品中大约约含有多少活菌。 (2)操作 设设置重复组组,增强实验实验 的说说服力与准确性 。将待测样测样 品经经一系列10倍稀释释，然后选选 择择三个稀释释度的菌液，分别别取0.1 mL接种 到已制备备好的平板上，然后用无菌涂布器将 菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度 下培养计计数菌落数。为为使结结果接近真实值实值 ， 可将同一稀释释度菌液加到三个或三个以上的 平板上,经经涂布、培养，计计算出菌落平均数。 为
8、为了保证结证结 果准确，要选择选择 一个合适的稀 释释倍数，且同一稀释释倍数的各个重复组组菌落 数要相近，若设设置的重复组组中结结果相差太远远 ,意味着操作有误误，需重新实验实验 。 (3)优优点：能观观察菌落特征。 在探究培养液中酵母菌种群数量变变 化的实验实验 中，需利用计计数板对对微生物细细胞进进 行直接计计数。计计数板是一个特制的可在显显微 镜镜下观观察的载载玻片，样样品就滴在计计数室内。 计计数室由2516400个小室组组成，容纳纳液 体总总体积为积为 0.1 mm3。某同学操作时时将1 mL酵母菌样样品加99 mL无菌水稀释释，用无 菌吸管吸取少许许使其自行渗入计计数室，盖上 盖玻
9、片并用滤纸滤纸 吸去多余菌液，进进行观观察计计 数。 例1 (1)在实验实验 中，某同学的部分实验实验 操作过过程是 这样这样 的：从静置试试管中吸取酵母菌培养液 加入计计数板进进行计计数，并记录记录 数据；把酵 母菌培养液放置在冰箱中；第七天再取样样 计计数，记录记录 数据，统计统计 分析绘绘成曲线线。 请纠请纠 正该该同学实验实验 操作中的3处错误处错误 ： _ _ _ _； _ _ _ _； _ _ _ _。 (2)在实验实验 前应该对计应该对计 数板、吸管等器具进进 行_处处理。 (3)如果一个小方格内酵母菌过过多，难难以数清, 应应采取的措施是 _ _ _。 (4)如果观观察到如图图
10、所示a、b、c、d、e 5个 大格共80个小室内共有酵母菌48个，则则上述 1 mL酵母菌样样品中约约有酵母菌_个 ；要获获得较为较为 准确的数值值，减少误误差，你认认 为该为该 怎么做？ _ _ _。 【解析】 (1)在从试试管中吸取酵母菌之前, 应应将试试管轻轻轻轻 振荡荡几次，目的是使酵母菌在 培养液中均匀分布。酵母菌的培养液应应置于 适宜温度下培养，并且每隔24小时时就要统统 计计一次菌落数目。(2)为为了避免杂杂菌污污染， 实验实验 中所用吸管、计计数板等器具需进进行灭灭菌 处处理。(3)、(4)解答时时要注意以下两点: 统统一单单位;注意体积积的变变化。 400个小室共容纳纳液体总
11、总体积为积为 0.1 mm3， 则则80个小室容纳纳体积为积为 ：2102mm3， 含酵母菌48个，又因酵母菌培养液总总体积为积为 100 mL,统统一单单位后即可求出酵母菌个数。 【答案】 (1)应应将试试管轻轻轻轻 振荡荡几次再 吸取酵母菌培养液进进行计计数 应应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养 应连续应连续 七天，每天观观察、取样计样计 数并记记 录录数据 (2)灭灭菌 (3)适当稀释释 (4)2.4108 多次计计数，求平均值值 变变式训练训练 用稀释释平板法测测定同一土壤样样品中的细细菌数, 在对应对应 稀释释倍数为为106的培养基中，得到以 下几种统计结统计结 果，正确的是( )
12、 A涂布了1个平板，统计统计 的菌落数是230 B涂布了2个平板，统计统计 的菌落数是215和 260，取平均值值238 C涂布了3个平板，统计统计 的菌落数分别别是 21、212和256，取平均值值163 D涂布了3个平板，统计统计 的菌落数分别别是 210、240和250，取平均值值233 解析：选选D。在设计实验时设计实验时 ，一定要涂布至 少3个平板，作为为重复组组，才能增强实验实验 的 说说服力与准确性，所以A、B两项项不正确。C 项虽项虽 涂布了3个平板，但是，其中1个平板的 计计数结结果与另两个相差太远远，说说明在操作过过 程中可能出现现了错误错误 ，因此，不能简单简单 地用 3
13、个平板的计计数值值求平均值值。 要点二 间间接计计数法在统计统计 微生物数目时时的 注意事项项 1.设设置对对照 (1)目的：排除实验实验 中非测试测试 因素对实验结对实验结 果的影响，提高实验结实验结 果的可信度。 (2)方法：取一个未接种的培养基与接种好 的培养基一起培养。 2.注意无菌操作 (1)建立无菌观观念，严严格控制实验实验 器材、实实 验验室、实验实验 操作者的消毒、灭灭菌。 (2)整个实验过实验过 程必须须保证证无菌操作。 (3)取样样、稀释释都要在酒精灯火焰附近的无 菌环环境中进进行。 (4)规规范操作，防止其他微生物污污染，实验实验 结结束后洗手、消毒。 3.准确计计数 (
14、1)在计计算结结果时时，不同的微生物要选择选择 的 稀释释倍数不同。细细菌、放线线菌、酵母菌一般 以每个培养皿中有30300个菌落为为宜，而 霉菌则则以有10100个为为宜。 (2)要设设置3个或3个以上的重复组组，然后求 其平均值进值进 行计计算。 (3)每隔24 h统计统计 一次，最后选选取数目稳稳定 时时的记录记录 作为结为结 果。 特别别提醒 间间接计计数法主要是用来推测测 样样品中大约约含有的活菌数。 统计统计 的菌落数往往比实际实际 的数目低，因 为为当两个或两个以上微生物在一起时时，平板 上观观察到的只是一个菌落。 在做分离分解尿素的细细菌实验时实验时 ，A 同学从对应对应 的培养基上筛选筛选 出大约约150个菌 落，而其他同学只选择选择 出大约约50个菌落。A 同学的结结果产产生原因可能有( ) 由于土样样不同 由于培养基污污染 由 于操作失误误 没有设设置对对照 A B C D 例2 【解析】 实验结论实验结论 是否
