检验方法评价.

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1、By LauraBy Laura 检测系统的性能评价、 确认和验证 1.测量误差：测量结果减去被测量的真值的差，简称误差 。 2.随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测量进 行无限多次测量所得结果的平均值之差。 3.系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多 次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统 误差。亦称为正确度 复习基础知识 4、正确度：检测结果离真值的偏移程度 5、精密度：表示测量结果中随机误差大小的程 度。 6、准确度： 准确度是测量结果中系统误差（正确度）与 随机误差（精密度）的综合。 检验结果应该： 准确 精确 迅速 1.实验方法 分级 实验方法学与量值 溯

2、源 2.参考物的 分级 3.值溯源 4.方法学评价 第一节、方法学与量值溯源 是指准确度最高，系统误差最小，经过详 细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些 方面不够明确的方法。 决定性方法 参考方法 是指准确度与精密度已经充分证实的分 析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的 随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度 、特异性及较宽的分析范围。 常规方法 是指性能指标符合临床或其他目的需 要，有足够的精密度、准确度、特异性和适 当的分析范围，而且经济实用。 一临床生化检验方法分级 表3-1 临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法 项目决定性方法 参考方法 常规方法 钙钙ID-MS原

3、子吸收分光光度法邻邻甲酚酞络酞络 合酮酮法、MTB法 氯氯ID-MS、中子活化法电电流滴定法硫氰氰酸汞法、选择选择 性电电极法 镁镁ID-MS原子吸收分光光度法MTB 法 钾钾ID-MS、中子活化法火焰光度法 离子选择电选择电 极法、火焰光度 法 钠钠中子活化法火焰光度法 离子选择电选择电 极法、火焰光度 法 清蛋白-免疫化学法溴甲酚绿绿法 总总蛋白-凯凯氏定氮法双缩脲缩脲 法 肌肝ID-MS离子交换层换层 析法苦味酸法、酶法 尿素ID-MS尿素酶法二乙酰酰一肟肟法、酶法 尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外）磷钨钨酸比色法 胆红红素-重氮反应应法J-G 法、钒钒酸盐盐氧化法 葡萄糖ID-MS已糖激酶

4、法葡萄糖氧化酶法 胆固醇ID-MSAbell-Kendall 法酶法 甘酒三脂ID-MS变变色酸显显色法酶法 （primary reference materials）也称一级标准品 ，与决定性方法平行，用于验证决定性方法、评价 与校准参考方法，以及为二级标准品定值。 原级参考物质 次级参考物质 （secondary reference materials）也称二 级标准品 ，二级标准品的定值源于一级标准 品和参考方法，主要用于评价常规方法，也可 为质控物定值。 常规校准品 校准（calibration）指的是对由仪器、方法和试 剂所组成的检测系统的校准过程。 电解质、酶类、其他生化指标应合理

5、选择校准品 二临床生化检验的参考物质和校准品 标准品 校准品 质控品 一级标准品用高纯化学物质。一般由国家标准计量局出具证书 。 二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参考 实验室或权威学术组织出具证书，如SRM、BCR、IFCC。 标准品(standard）可用做校准品（calibrater），考虑 血清成分复杂、难以避免基质效应 。 质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值 、冻干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。 图21-1 各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程 三量值溯源 溯源性(traceability）是指通过一条具有规定 不确定度（uncertainty

6、）的不间断的比较链，使 测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准 （通常是国家或国际测量标准）联系起来的特性 ，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。 溯源性 图3-2 量值溯源和量值传递途径 第二节 检测系统的性能 评价、确认和验证 教学： 检测系统的性能评价 检测系统的性能确认 检测系统的性能验证 系 统统 误误 差 误误差分类类评评价试验试验评评价指 标标 理想结结 果 比例系统误统误 差 回收试验试验回收率95-105% 恒定系统误统误 差 干扰试验扰试验干扰值扰值接近0 比例系统误统误 差 恒定系统误统误 差 方法对对比试验试验 Y=a+bX b接近1.0 a接近0 随机 误误差

7、 重复性试验试验（批内、批间间 、日间间）、总总 不精密度 CV 0.97，或b 1.03。 相关系数r一般情况下，0.975或20.95 。 二、检测限的评价 1. 可检测的最低分析物浓度为检测系统的 分析灵敏度或称检测限。 分析灵敏度： 具有定性含义的： 检测低限（LLD） 空白 具有定量含义的： 生物检测限（BLD） 加物 功能灵敏度（FS） CV 2.检测限的不同概念 3.检测限实验 4.结果可接受性评价 与仪器或试剂厂家标示比较 三、回收试验三、回收试验 所谓回收即分析方法正确测定加入 常规分析样品中的纯分析物的能力。目 的是测定比例系统误差，以衡量候选方 法的准确度。 方法 将被分

8、析的纯品标准液加入病人 样品中，成为分析样品，原病人样品 加入相同量的无分析物的溶液作基础 样品，然后用实验方法分析，两者测 定结果的差值为回收量。 回收率计算 以测定血清钙为例说明如下： 样品制备 1)基础样品：血清2ml蒸馏水0.1ml； 2)分析样品：血清2ml4mmol/L钙标准液0.1ml； 3)分析样品：血清2ml25mmol/L钙标准液0.1ml； 计算公式及计算结果计算公式及计算结果 故本例的管的加入量分别为： 回收浓度分析样品测得浓度基础样品测得 浓度 回收率（）回收浓度/加入浓度100 血清钙回收试验结果血清钙回收试验结果 测得浓度（测得浓度（ mmol/Lmmol/L）

9、加入浓度（加入浓度（ mmol/Lmmol/L） 回收浓度（回收浓度（ mmol/Lmmol/L） 回收率回收率 1.701.70 1.881.880.190.190.180.18 94.794.7 2.852.851.191.191.151.15 96.696.6 平均平均 95.795.7 理想的结果期望回收率达到100 ，要求95%-105%。现在平均回收 率为95.7. 注意事项 准确吸量。 样品中加入标准液后，总的浓度必须在测定方法的分 析范围内，须作加入高、中、低不同浓度的回收试验 ，计算平均回收率。 加入标准液后，使实验样品中被测浓度达到医学上具 有决定意义的浓度。 加入标准液的

10、体积在整个样品中要少，一般在10以 内。 四、临床生化干扰试验 EP7-A 干扰：在临床生化中，由于另一成分的影响或者样本的特 性，待测的一定浓度的分析物出现有临床意义的偏倚。 分析物：实验室测试的物质或者成分 干扰物：样本中不同于分析物的能引起测量偏倚的组分 。 应用举例 尿酸对GOD-POD法测定血糖的干扰： 样本制备： 基础样本： 血清0.9ml+0.1ml蒸馏水 分析样本1： 血清0.9ml+4mmol/L尿酸0.1ml 分析样本2： 血清0.9ml+8mmol/L尿酸0.1ml 尿酸样本：蒸馏水0.9ml+8mmol/L尿酸0.1ml 用GOD-POD法测定，结果填入下表。 干扰实验

11、检测结果 葡萄糖测得值 （mmol/L） 加入尿酸值 (mmol/L) 干扰值 (mmol/L) 基础样本6.50 分析样本16.200.400.30 分析样本25.950.800.55 尿酸样本0 干扰实验检测结果 单位浓度尿酸使葡萄糖减少值= mmol/L 表明正常血清尿酸0.4mmol/L，使血糖测定结果约减 少0.28mmol/L。 五、评价测定线性范围 （EP6-A法） 线性范围（linear range）是指系统最 终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓 度或活性成比例的范围。 线性检测系统反应，包括校准、线性化 技术、系数和仪器反应。 实验标本 线性实验应使用与病人标本相似的标本

12、，最少使用4 个浓度水平，推荐5个水平。 高值标本应高于线性上限30，低值标本应低于线 性低限。 样本来源 病人标本 低浓度的标本稀释高浓度标本 用推荐的稀释液稀释病人样本 病人样本中添加分析物 商业质控物/校准物/线性验证物质 可准备如下血清： 低浓度X1混合血清； 高浓度X5混合血清； 血清X2：3份“X1”+1份“X5”； 血清X3：2份“X1”+2份“X5”； 血清X4：1份“X1”+3份“X5”。 浓度由低到高顺序：X1, X2, X3, X4, X5 配制溶液浓度的计算 X为标本浓度，V为标本体积 实验程序 全部实验和数据采集应在同一工作 日内完成。分析序列应为随机排列。有 显著携

13、带污染时，应用空白隔开标本。 每个浓度标本重复测定4次纪录测定结果 。 方法线性实验记录表 标标本浓浓度 测测定次数 X1Y1-1Y1-2Y1-3Y1-4 X2Y2-1Y2-2Y2-3Y2-4 X3Y3-1Y3-2Y3-3Y3-4 X4Y4-1Y4-2Y4-3Y4-4 X5Y5-1Y5-2Y5-3Y5-4 数据评估 初步数据检查 离群值检查 确定线性范围 初步数据检查 目视检查每一个分析的所有结果有无潜在的 离群值。将测量数据作为Y值，计算浓度或相对 浓度作为X值进行作图。 在图上，每一个Y值有一个对应的X值，将每 个浓度水平重复测定的均值点在图上，将这些 点连接起来，观察每个点与直线的大致偏

14、差， 这样容易发现异常点（明显的抄写错误或仪器 故障等）。 判断离群点的方法 对于特定浓度Yi值的离群点进行检测时，需将其4个重复值从大 到小排列（Yi-1到Yi-4）。 计算级差D=Yi-1Yi-4。 若Yi-1可能是离群点，计算：D1=（Yi-1Yi-2）/D。 若Yi-4可能是离群点，计算：D4= Yi-3Yi-4）/D。 计算结果（D1或D4）如果大于0.765（0.05）或0.889（0.01） ，则该点判为离群点。 全部数据中的离群点如果有2点，则应保留全部数据 或重新进行实验。 离群点2个或者以内，保留全部数据。 离群点2个以上，重新实验。 数据的处理 以分析物浓度为X轴，反应值

15、或仪器输出值（ 均值）为Y轴，绘制X-Y线性图（Y=aX+b）。 目测线性和进行统计学分析，判断是否符合要求。 确定线性范围 多项式回归分析 非线性程度 随机误差的影响 多项式回归分析 可以借助多种商业统计软件完成。 SPSS和SAS 做数据库 例如用SPSS的话，选“分析” “回归分析 ” “曲线估计” “因变量” 、 “ 自变量” 、“模型（线性、平方、三次方 ）” 得三个方程 多项式回归分析 阶别 回归方程 回归自由度（Rdf ） 一次Y=a+b1X2 二次Y=a+b1X+b2X23 三次Y= a+b1X+b2X2+b3X34 将测定数据分别拟合一次、二次和三次多项式 多项式回归分析 一次多项式模型为直线，是判断某种方法是否为线性 的最适方程。 二次多项式模型代表一种抛物线反应曲线，有增加趋 势（曲线上升）或减少趋势（曲线下降）两种。 三次多项式模型代表一种“S”形反应曲线，在测量 范围的两端呈非线性。 在一次多