《实验三、血清、红细胞制备.》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验三、血清、红细胞制备.(17页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、实验三、实验动物的采血方法、 动物血清及红细胞的制备方法 指导老师:程 燕 实验目的 1、学习实验动物不同部位的取无菌采 血方法; 2、学习动物血清、红细胞的制备; 3、观察兔、豚鼠的免疫器官。 实验原理 免疫系统由免疫器官、免疫组织、免疫细胞和免疫分子组成。 免疫细胞 1.固有免疫的组成细胞:吞噬细胞、淋巴器官、树突状细胞 、NK细胞、NKT细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞; 2.适应性免疫应答细胞:T细胞、B细胞 免疫分子 1.膜型分子:TCR、BCR、CD分子、粘附分子、MHC分子、细胞 因子受体。 2.分泌型分子:免疫球蛋白、补体、细胞因子。 实验原理 血液是一种结缔组织(细胞间质)。
2、血液系统是各种重要的 免疫细胞、免疫分子的载体,也是各种免疫事件发生的场所。 组成:1、血浆 血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原) 脂蛋白、无机盐、氧等成分 激素、酶、抗体 细胞代谢产物等。 2、血细胞 红血球、 白血球(有粒白细胞:中性粒 细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞和无粒白细胞:单核细胞和 淋巴细胞) 血小板 实验原理 实验研究中,要采集实验动物的血液进行检查或 分析,故必须掌握血液的正确采集、分离和保存 的操作技术。 采血方法的选择,主要决定于实验的目的所需血 量以及动物种类。 用血量较少可刺破组织取毛细血管的血 当需血量较多时可作静脉采血 (原则:静脉采血时,若需反复多次,应自远
3、离心 脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉) 实验原理 现将采用血方法按动物和部位分别加以介绍。 小鼠和大鼠采血方法:割尾采血法、尾静脉穿刺采血 、眼眶后静脉丛采血、摘眼球法、断头采血、颈(股) 动静脉采血 豚鼠采血法:耳缘剪口采血 、心脏采血 、股动脉采血 、背中足静脉取血 兔采血法:耳静脉采血 、耳中央动脉采血 、心脏取血 、后肢胫部皮下静脉取血 、股动静脉、颈动静脉取血 、 鸡采血法 :翼根静脉采血、心脏采血、颈静脉采血 实验原理 家兔采血方法 (1)耳缘静脉采血: 家兔固定,将耳缘静脉皮肤上的毛拔去或剪去,75%酒精消毒 ,用左手食指和中指夹住静脉近心端,以使其血管怒张拇指和小 指夹住
4、耳缘部分,以左手无名指和小指放在耳下作垫,待静脉充 盈后,右手持注射器使针头由静脉末端刺入,顺血管方向向心端 刺约1-1.5cm,放松左手拇指和食指对血管的压迫,右手缓慢抽 吸注射器,若注射阻力较大,说明针头没有刺入静脉,应调整针 头或重新穿刺;也可以刀片在血管上切一小口,让血自然流出, 滴入盛器内,采血完毕,用干棉球按压止血。 (2)兔心脏穿刺取血: 家兔背位固定,在左胸第24肋间剪毛一块,用75% 酒精和碘伏消毒。然后用510ml注射器,在胸骨左缘3 -4肋间心尖搏动最明显处作垂直穿刺。 注意事项有: 动作宜迅速,以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝 固; 如针头已进入心脏但抽不出血时,应
5、将针头稍微后退一 点。 在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心,肺、 实验原理 豚鼠采血方法 (1)背中足静脉取血 固定动物,将动物脚背面用酒精消毒,找出背中 足静脉后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右 手拿的注射针刺入静脉。采血后,用纱布或脱脂棉压 迫止血。反复采血时,两后肢交替使用。 (2)心脏采血 通常在胸骨左缘的正中,选心跳最强的部位作穿刺 。针头宜稍细长些,以免发生手术后穿刺孔出血,其 操作手法详见兔心脏采血。 实验动物的采血量 动物种类最大安全采血量(ml ) 最大致死采血量 (ml) 小白鼠0.10.3 大白鼠12 豚鼠510 家兔1040 狗50300 猴1560 血清的制备
6、 血清的制备:不加抗凝剂 无菌静脉采血2ml,37自然凝固,待血清开始出现后 ,放冰箱内12小时或24小时,离心分离血清(3000rpm ,5-10min),得到的上清液即为血清,小心将上清吸 出(注意切勿吸出细胞成分)。 血浆的制备:需加抗凝剂(抗凝剂:血液 = 1:9) 无菌静脉采血2ml(注射器用抗凝剂润洗),将血液加 入到有抗凝剂的离心管中颠倒混匀,离心(3000rpm,5 -10min)后所得的上清液即为血浆。 注意:血清的保存可以在每50ml血清中加1硫柳汞水溶 液1ml防腐。 红细胞及悬液制备 标准红细胞的制备: 取全血1ml,加等渗盐水23ml,充分摇匀离心沉淀 ,弃去上清液,
7、然后再加生理盐水23ml 按上述方法 洗涤,共三次,离心去上清,余下的为压积红细胞。 红细胞悬液的制备: 2红细胞悬液:压积红细胞2滴+新鲜等渗盐水4ml 5红细胞悬液:压积红细胞5滴+新鲜等渗盐水4ml 10红细胞悬液:压积红细胞5滴+新鲜等渗盐水2ml 注意: 标准红细胞盐水悬液临用前制备,最多存放3天, 用柠檬酸葡萄糖溶液(ACD)溶液保存最长可保存1周 实验器材 实验动物:豚鼠、兔 实验试剂:血液抗凝剂(1:500u肝素钠注射液) 生理盐水 实验器材:5ml注射器、 一次性离心管(5、10、15ml规格)、 普通吸管、尖吸管、1ml刻度吸管 75%酒精棉球 水平离心机 实验步骤 1.用75酒精棉球消毒采血部位皮肤 2.用5ml注射器分别抽取豚鼠或兔静脉血2ml 豚鼠采血法 :背中足静脉取血 心脏采血、 兔采血法:耳缘静脉采血 心脏采血 3.制备血清、红细胞(如上述流程) 注意事项: 1、采血部位需要进行消毒 2、采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥; 3、注意血清与血浆制备的区别:抗凝剂的使用 4、不同规格离心管的使用 一次性离心管规格用途 15ml血浆、红细胞制备的离心 10ml放置不同用途的吸管 5ml血清制备、红细胞悬液制备 实验作业 1、血清、血浆的组分的区别? 2、血清、血浆制备方法及操作的区别 ?