《国科金韩骅教授.》由会员分享，可在线阅读，更多相关《国科金韩骅教授.（51页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、国家自然科学基金课题国家自然科学基金课题 设计和申请书撰写设计和申请书撰写 第四军医大学基础部遗传与发育教研室第四军医大学基础部遗传与发育教研室 韩韩 骅骅 p面上项目是国家自然科学基金研究项目体系中的主要部分， 其定位是全面均衡布局，瞄准科学前沿，促进学科发展，激励 原始创新；支持从事基础研究的科学技术人员在国家自然科学 基金资助范围内自由选题，开展创新性的科学研究，力图通过 研究得到新的发现或取得重要进展。鼓励开展具有前瞻性、勇 于创新的探索性研究工作；注重保护非共识项目，支持探索性 较强、风险性较大的创新研究。 创新贯穿于整个科学研究活动 医学研究的创新 基础理论研究 以问题为导向：实现
2、理论创新 临床技术研究 以需求为导向：实现技术创新、集成创新 基础理论研究 一项肿瘤信号途径（分子）的研究 人类健康：人类生存、经济发展、社会稳定 肿瘤：对生命的威胁 肿瘤细胞/肿瘤微环境细胞 细胞的产生、增殖、凋亡、分化、迁移、侵袭 信号途径：某个信号途径的意义和Crosstalk 个别分子：某个分子的意义和分子间相互作用 例如：降低Survivin对肿瘤进行基因治疗 原理 Survivin降低能否抑制肿瘤？为什么（肿瘤细胞过表达Survivin吗 ）？机制是什么？ 方案可行性 输送系统？表达方法？靶向措施？实验研究模型？疗效观察指标？ 实施后果 体外模型中的效果？实验动物模型中的效果？临床
3、观察中的效果？ 临床技术研究 工程问题转化为理论问题：研究发明的原理、方案可行性 、实施后果 申请书内容的构思 找到一个问题：立论依据 工作中遇到的问题? 社会公众关心的热点? 读书思考的结果? 规划出一个解决问题的逻辑方案：研究内容 现象的确认：形态变化、基因表达的观察，临床病例对照研究 机制的解析：细胞、信号途径、分子 假说的验证：转染、KO、临床应用 建立了可靠的研究信誉和资质：研究基础和条件 个人背景：前期研究业绩 研究团队 拟定题目（反映核心科学问题） 制定写作提纲 确定研究目标内容 （如何解决核心科学问题？） 设计立论依据 （为什么是核心科学问题？） 建立基础和团队 （凭什么解决核
4、心科学问题？） 怎么撰写？ 面上项目报告正文撰写提纲 （一）立项依据与研究内容： 1、项目的立项依据 2、项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题 3、拟采取的研究方案及可行性分析 4、本项目的特色与创新之处。 5、年度研究计划及预期研究结果 （二）研究基础与工作条件 1、工作基础 2、工作条件 3、申请人简介 4、承担科研项目情况 5、完成自然科学基金项目情况 （三）经费申请说明 （四）其他附件清单 要求内容翔实、清晰，层次分明，标题突出 摘 要 整个申请书的提纲： 400字，4层意思，句句 切题，不能出错！ 科学问题：xxx是xxx，但是存在xxx问题。 基本思路：文献和我们以往
5、的研究工作表明，xx可能是 xx. 基本研究内容：本课题拟xxx, xxx, xxx。 主要研究意义：这些研究具有xx理论意义和xxx实际意义 。 Notch信号途径通过miRNA调控神经 干/祖细胞的增殖和分化 在哺乳类神经发育中，神经干细胞（NSC）以特定的时空顺序进 行增殖、分化和迁移，最终形成具有高级结构和功能的神经系统 。大量文献和我们最近发表的研究证明，经典Notch途径对NSC的 增殖和分化发挥关键调控作用，但其下游分子和调控机制尚不完 全清楚。我们最近在Notch途径关键转录因子RBP-J条件性基因剔 除小鼠用神经球培养对比了正常和Notch信号阻断的NSC的miRNA 表达谱
6、，鉴定出一组在正常和Notch缺陷NSC中差异表达的miRNA ，并对其中个别分子在Notch信号调控NSC中的作用进行了初步探 讨。本课题拟在此基础上，深入研究Notch信号调控这组候选 miRNA的分子机制；揭示候选miRNA在NSC增殖分化中的作用和机 制；阐明候选miRNA在Notch信号途径中的功能意义。这些研究可 以拓展对Notch信号调控机制的认识，还可以发现神经发育中NSC 增殖分化调控的新机制，具有重要的理论意义。 （一）立项依据与研究内容（4000-8000字） 立项依据 1、研究意义 2、国内外研究现状及发展动态分析 3、主要参考文献目录 常见问题： 1、写成了国内外研究
7、现状 2、提炼不出来自己的研究有什么意义 3、完全没有阐述本课题的基本研究内容，所以无从阐述本研究的意义 1、研究意义： 结合科学研究发展趋势来论述科学意义 结合国民经济和社会发展中迫切需要解决的关键科技问题来论述应用前景 放大、修改版的摘要： （1）从更广泛的层面上对研究意义进行阐述，如某种疾病对公众健康的影响 ，某一个现象或问题对学科发展的意义，等等 （2）通过分析现在存在的问题、自己的前期结果，引伸到自己的研究内容 （3）针对这些问题，本课题开展的研究内容 （4）本课题的研究有什么科学意义、应用前景 脊椎动物神经系统的高度有组织的结构是其正常行使功能的基础，而正常有序的发育则是其复 杂结
8、构形成的基础。哺乳类的中枢神经系统（CNS）是从定位于神经管管壁靠近管腔侧（发育中的 室管膜带）的神经干细胞（NSC，neural stem cells）增殖、分化而来。NSC可以通过对称分裂来增 殖，还可通过不对称分裂在自我更新的同时产生中间神经祖细胞（INP，intermediate neural progenitors）。神经祖细胞则在细胞内、外信号的共同作用下在不断通过对称分裂而增殖的同时沿着 特定的路线进行迁移，并不断分化产生各种类型的子代神经细胞，再组装成不同的神经结构而发挥其 功能。正确理解NSC维持自身增殖、NSC向下游细胞的分化、以及进一步迁移、分化成成熟神经细 胞和形成神经
9、连接的分子机制，不仅对于了解神经系统的结构形成十分重要，也对认识包括人类的高 级神经活动在内的神经系统的功能以及相关人类疾病的发病机制具有重要的意义。 Notch信号途径是神经发育调节的关键信号途径之一。最近，我们用小鼠Nestin基因增强子建立 了在NSC中特异表达重组酶Cre的转基因小鼠（Zhang Q et al. Neurosci Lett. 2005; 379:90-95） ，并与本研究室以往建立的RBP-J-Floxed小鼠交配得到了在NSC特异剔除RBP-J的条件性基因剔除 小鼠。表型分析发现从RBP-J条件性基因剔除小鼠胚胎分离培养的神经球（Neurosphere）具有明 显降
10、低的自我更新能力和增强的分化潜能，并且向神经元的方向分化增加（Gao F et al. Mol Cell Neurosci. 2009; 40:442-450）；体外神经元培养还发现RBP-J缺陷神经元的神经突起生长减少（ Gao F et al. Unpublished）。然而，这些工作和国际上本领域的相关研究都还未能阐明Notch信号 途径是通过哪些下游分子、如何调控神经干细胞的增殖和分化的。 近几年发现的microRNA（miRNA）在脊椎动物神经系统中表达丰富并具有一定时空特性。多 项研究已经提示miRNA参与了NSC的分化。Notch信号途径作为神经系统发育调控的关键信号途径之 一，
11、是否可通过调控某些miRNA影响NSC及其下游细胞的增殖分化？针对这一问题，本课题组利用 神经球悬浮培养法从RBP-J剔除小鼠和对照小鼠分别培养了NSC，利用miRNA表达芯片对比分析， 结合生物信息学分析和文献回顾，获得了一组（7个）在RBP-J剔除神经球和对照神经球之间有明显 差异表达并可能具有潜在功能的miRNA（见工作基础）。本项目拟在此基础上检测这些候选miRNA 在小鼠CNS发育过程中的表达，在培养的细胞中和小鼠体内分析候选miRNA对NSC自我更新、增殖 和分化的调控作用，继而进一步深入研究其调控机制，尤其与Notch信号的关系。这些研究：可以 明确参与调控NSC自我更新和分化的
12、新的miRNA，并初步阐明其作用的机制；就我们掌握的文献 ，到目前为止还没有报道在哺乳类Notch信号可以通过miRNA调控发育过程，所以本课题有望揭示 Notch信号调控中枢神经系统发育的新机制，具有重要意义。 2、国内外研究现状及发展动态分析： 领域的基本知识介绍(Biology) 所研究的问题的研究现状，包含自己发表的论文 (Molecule) 以本课题的研究逻辑和研究意义结尾(Biology) 围绕课题的思路进行综述，层次清晰，步步提示存在问题，观点鲜明，把 自己的研究思路暗含在对文献的综述中，最后用自己的研究提出解决办法 常见问题： 1、综述不全面、没有很好地阅读、忽略了重要进展（尤
13、其是国内专家） 2、逻辑思路不清晰，没有围绕一个中心问题进行综述 3、自说自话，只是以自己的前期研究为依据 4、过多引用未发表的Data 5、以未见报道为依据（在其他的肿瘤已有结论，现在换个肿瘤） 国内外研究现状 NSC增殖分化调控的一般知识 1、Notch信号途径及其对NSC增殖分化的调控 作用： 1.1 Notch信号途径 1.2 Notch信号对神经分化的调控 2、miRNA对NSC/INP增殖分化的调控作用： 2.1 miRNA在中枢神经系统的表达 2.2 miRNA对NSC分化命运的选择具有十分重要的 作用 3、Notch途径和miRNA的关系 4、Summary 3、主要参考文献：
14、 (显示科学态度!) 准确 及时更新 格式规范一致 与正文对应 国内科学家、中文论文引用 Yao-Chun Wang, Fei He, Xiao-Wei Liu, Guang-Ying Dong, Hong-Yan Qin, Xing-Bin Hu, Fan Feng, Min-Hua Zheng, Liang Liang, Lei Feng, Ying-Min Liang, Hua Han. Notch signaling determines the M1 versus M2 polarization of macrophages in anti-tumor immune response
15、s. Cancer Res. 2010; 70:4840-4849. (封面标题) 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题 （此部分为重点阐述内容） 研究目标：本课题的总体研究目的和达到的程度，要一目 了然。 一句话讲出：通过xxx，阐明xxx，为xxx奠定基础。 常见问题： 研究目标太大/太小 研究目标与研究内容混淆 研究内容：围绕着上述研究目标，（1）打算开展几个方面的实验研究？（2 ）每个方面都进行哪些实验？ 例如对一个新基因的功能研究： 1、表达：在生物信息学预测的基础上，进行表达范围分析（Northern, RT-PCR, 原 位杂交）、细胞内定位分析（免疫荧光染色、融合蛋白表达） 2
16、、功能：在体外对细胞功能的影响：转染、干扰；增殖、凋亡、分化、迁移、形态变 化？体内功能研究：KO？转基因小鼠？病例相关的分析？ 3、作用机制：转录调控？信号转导？上、下游分子？相互作用蛋白？ 4、表达调控：启动子结构？表观遗传修饰？翻译后调控？ 常见问题： 层次条理不清楚：针对一个问题需要做哪几个方面的研究？逻辑关系 内容简繁不得当：（生物信息学、构建质粒；筛选、构建小鼠、转录调控） 和研究方案混淆：罗列具体的实验步骤 在前期工作已经获得RBP-J基因剔除NSC与正常NSC差异miRNA的基 础上，检测这些候选miRNA在小鼠CNS发育过程中的表达特点，在培 养的细胞中和小鼠体内分析重要候选miRNA对NSC自我更新、增殖和 分化的调控作用，继而进一步深入研究其调控机制，尤其与Notch 信号的关系，以期明确miRNA参与介导Notch信号调控NSC自我更新 增殖和分化的信号通路、作
